AUTOIMUNIDADE

Daniela Amaral Tom R2 da Patologia Clnica

Introduo
O Sistema Imune normal tem a capacidade de reagir a uma enorme variedade de microorganismos, mas no contra cada antgeno prprio do indivduo. A esta no-responsividade especfica a um antgeno induzido pela sua exposio aos linfcitos chamamos de:
Tolerncia Imunolgica

Tolerncia Imunolgica

Exposio Antgeno Linfcito

Ocorre atravs de trs mecanismos:

Os antgenos prprios so classificados como tolerognicos ou no-imunognicos e essa sua caracterstica que gera a tolerncia imunolgica.

Importncia da Tolerncia Imunolgica

Primeira: os antgenos prprios normalmente induzem tolerncia Segunda: aprendermos com ela como induzir tolerncia em linfcitos especficos para um antgeno particular, assim podemos ser capazes de usar este conhecimento para prevenir ou controlar as reaes imunes indesejveis.

Mecanismos de Tolerncia Imunolgica

Autoimunidade

Definida como uma resposta imune contra antgenos prprios.

Tolerncia Central da clula T

Tolerncia Perifrica da clula T

Ocorre atravs de trs mecanismos:
Anergia: a inativao funcional dos linfcitos T que ocorre quando clulas reconhecem antgenos sem nveis adequados de co-estimuladores que so nescessrios para a ativao do linfcito T Deleo: a ativao repetida dos linfcitos T maduros pelos antgenos prprios, ou o reconhecimentos dos antgenos prprios sem o segundo sinal, estimulam vias de apoptose que resultam na deleo dos linfcitos T auto-reativos Supresso Imune: alguns linfcitos auot-reativos, ao se encontrar com linfcitos prprios, podem se desenvolver em clulas regulatrias cuja funo prevenir ou suprimir a ativao de outros linfcitos auto-reativos potencialmente perigosos

Anergia

Deleo

Tolerncia central dos linfcitos B

Tolerncia perifrica dos linfcitos B

Fatores genticos na Autoimunidade

Mltiplos genes predispem a doenas auto-imunes, e os genes mais envolvidos nesse processo so os do MHC Lembrando que o MHC a molcula responsvel pela apresentao do antgeno ao linfcito T Quando temos a herana de determinados alelos de MHC, que so incapazes de apresentar o antgeno ao linfcito T, apresentamos doenas auto-imunes Se herdamos um alelo particular do HLA , aumentamos o risco relativo de apresentarmos uma doena auto-imune. Porm esse alelo do HLA por si s no ir causar a doena, como no caso da alterao no loci do MHC.

Associaes de doenas auto-imunes com alelos do locus do MHC

Genes no-MHC associados a autoimunidade

Papel das infeces na autoimunidade

DOENAS AUTO-IMUNES

Orgo Especficas e Sistmicas

Orgo Especficas
Doena de Hashimoto Doena de Graves Esclerose Mltipla Myasthenia Gravis Anemia Hemoltica autoimune Prpura trombocitopnica auto-imune Sndrome do anticorpo antifosfolpide Diabetes Mellitus Tipo 1

Sistmicas

Artrite Reumatide

Lpus Eritematoso Sistmico Esclerose Sistmica

Doena Mista do Tecido Conjuntivo Sndrome de Sjgren

DIAGNSTICO:

ACHADOS SOROLGICOS COMUNS PARA AS VRIAS DOENAS AUTO-IMUNES

Componentes Nucleares Reconhecidos por auto-anticorpos

Membrana Nuclear Cromatina Nuclolo Protenas Nucleares Partculas Ribonucleoprotenas(RNA) Molculas de DNA

Anticorpos Auto-Imunes
FAN(Fator Anti-Ncleo)Hep-2/ ANA/PAAC Anti-DNA ENA (Screening, 4, 6, 8...) ANCA (C-ANCA ou P-ANCA) FR (Fator Reumatide) Anti-CCP3

ANA/ FAN /IFI EM CLULAS HEP-2/PAAC

ANA (Anticorpos Anti-Nucleares)

Esto presentes em vrias doenas auto-imunes como:
LES Doena Mista do Tecido Conjuntivo Artrite Reumatide Esclerodermia Esclerose sistmica progressiva Vasculites Polimiosites Sndrome de SJgren

ANA
Pode ser utilizado como indicador :
Prevendo o aparecimento de doena auto-imune Diagnstico Prognstico Para monitorizar efetivamente o tratamento

Histrico do ANA
1948: Hargraves descobre a clula LE em pacientes com LES

1948 A 1997: Clula LE usada como critrio diagnstico para LES

1957: Fries utiliza a imunofluorescncia indireta para teste de triagem de ANA usando imprinting de fgados de camundongo Hoje: Imunofluorescncia indireta com clulas Hep-2 (melhores

ANA
Mtodos para diagnstico:
EIA (Enzyme Imune Assay) ELISA(Enzyme Linked Imunosorbent Assay) IFI (Imunofluorescncia Indireta)

ANA anteriormente era chamado de FAN quando realizado por IFI Hoje chamamos o ANA de PAAC (Pesquisa de Anticorpos contra Antgenos Celulares) A nomenclatura FAN no designava corretamente o teste j que nele descrevemos auto-anticorpos no s contra o ncleo, mas tambm contra nuclolos, actina, miosina, mitocndria , Complexo de Golgi, citoplasma.

IFI Hep-2,FAN ou PAAC

o teste de escolha na maioria dos laboratrios para triagem e semi-quantificao do ANA PAAC um teste de alta sensibilidade para vrios auto-anticorpos De acordo com o seu padro conseguimos determinar os auto-anticorpos envolvidos e a doena auto-imune relacionada Vrias evidncias demonstram que a presena de auto-anticorpos precedem o aparecimento de doenas auto-imunes No LES ,o PAAC por IFI em clulas HEP-2 positivo, pode preceder o aparecimento da doena em at 9 anos

Princpio do Teste: IFI em clulas Hep-2

A reao de IFI baseada na ligao dos autoanticorpos presentes no soro do paciente aos auto-antgenos expressos presentes nas clulas de carcinoma de laringe humana que so utilizadas como substrato para a deteco dos possveis auto-anticorpos e estes so revelados por um anticorpo antiimunoglobulina humana conjugado ao isotiocianato de fluorescena.

Por que clulas Hep-2?

Por apresentarem antgenos humanos no encontrados em tecidos de roedores Antgenos semelhantes estarem presentes em maiores concentraes Apresentarem todas as fases de diviso celular( intrfase/prfase, metfase, anfase e telfase) Apresentarem tambm uma relao ncleo/citoplasma em favor do ncleo E ainda presena de vrios nuclolos

Critrios para Laudar a IFI Hep-2

1. As diluies de triagem so 1/80 e 1/320 2. Os critrios morfolgicos para a leitura da lmina de IFI:
a) Aspecto da matriz nuclear b) Aspecto do nuclolo c) Observao de todos os estgios de diviso celular d) Aspecto do fuso mittico e) Aspecto do citoplasma

Correlao dos critrios gerou as seguintes rvores de decises

1. 2. 3. 4. 5. Padres nucleares Padres nucleolares Padres relacionados ao aparelho mittico Padres citoplasmticos A leitura do ttulo final deve ser feita na ltima diluio em que o padro observvel de forma definida

PASSOS PARA LEITURA DA LMINA DE IFI HEP-2

1 Passo
Definio da regio celular fluorescente

2Passo
Observao da fase de diviso celular e classificao da placa metafsica cromossmica

3Passo
Caracterizao do aspecto da fluorescncia

PADRES DA IFI HEP-2

Nuclear tipo membrana nuclear

Auto-anticorpos:
Antilamina e contra componentes antignicos do envelope nuclear(lminas,LAPs,nucleoporina,gp210)

Padro caracteriza-se por:

Fluorescncia de toda a membrana contnua ou pontilhada, sem fluorescncia em nuclolos e citoplasma, h clulas em todos os estgios de diviso

Relevncia Clnica:
Pode no apresentar associao clnica especfica Associado a Cirrose Biliar Primria, Hepatites auto-imunes Raramente associado a: doenas reumticas e SAAF Associado a algumas formas de LES e Esclerodermia Linear

Nuclear Homogneo
Auto-anticorpos:
Anti-DNA nativo, Anti-histona e Anticorpo anticromatina

Padro caracteriza-se por:

Nucleoplasma fluorescente e nuclolo no visualizado por sobreposio da colorao Placa metafsica positiva na anfase e telfase

Relevncias clnicas:
Anti-DNA nativo: marcador de LES Anti-histona: marcador de LES induzido por drogas e LES idioptico Anticorpo anticromatina: LES, AIJ importante na forma oligoarticular com uvete,Sndrome de Felty e HAI

Nuclear pontilhado grosso

Auto-anticorpos:
Anti-Sm e anti-RNP

Padro caracterizado por:

Nucleoplasma com grnulos de aspecto grosseiro e tamanho heterogneo Placa metafsica negativa

Relevncias clnicas:
Anti-Sm: marcador para LES Anti-RNP: critrio obrigatrio no diagnstico de doena mista do tecido conjuntivo, tambm presente no LES, Esclerose sistmica e AR.

Nuclear pontilhado grosso reticulado

Auto-anticorpos:
Anticorpos contra componentes das ribonucleoproteinas heterogneas Componentes da matriz celular

Padro caracteriza-se por:

Nucleoplasma com grnulos grandes e grosseiros que se organizam linearmente formando redes Placa metafsica negativa

Relevncias clnicas:
Raramente presentes em doena auto-imune, exceto quando em nveis altos

Nuclear pontilhado fino

Auto-anticorpos:
Anti-SS-A/Ro Anti-SS-B/La

Padro caracteriza-se por:

Nucleoplasma com granulao fina e bem distribuda Placa metafsica negativa

Relevncias clnicas:
Anti-SS-A/Ro: Sjgren primria, LES, lpus neonatal e cutneo subagudo,Esclerose sistmica e cirrose biliar primria Anti-SS-B/La: Sjgren primria, LES e lpus neonatal

Nuclear pontilhado fino denso

Auto-anticorpos:
Antiprotena p75 e LEDGF/p75

Padro caracteriza-se por:

Nucleoplasma da clula em intrfase apresenta-se como pontilhado fino denso grosseiro Placa metafsica positiva com as mesmas carctersticas do nucleoplasma

Relevncias clnicas:
Sem relevncia clnica at o momento Evidenciado em indivduos normais,processos inflamatrios especficos e no especficos, doenas alrgicas e auto-imunes

Nuclear pontilhado pontos isolados

Auto-anticorpos:
Anti-p80 colina Anti-Sp100

Padro caracteriza-se por:

Nucleoplasma com pontos fluorescentes isolados Placa metafsica negativa

Relevncias clnicas:
Anti-p80 colina: sem associao clnica definida Anti-Sp100: descrito principalmente em Cirrose biliar primria e em diversas outras situaes.

Nuclear pontilhado centromrico

Auto-anticorpos:
Anti-centrmero

Padro caracteriza-se por:

Nucleoplasma da clula em intrfase apresentando pontilhado com um nmero constante de 46 pontos Placa metafsica positiva

Relevncias clnicas:
Esclerose sistmica forma CREST e cirrose biliar primria e Sjgren

Nuclear pontilhado pleomrfico

Anticorpo contra ncleo de clulas em proliferao Padro caracteriza-se por:
Nucleoplasma apresenta-se no fluorescente na clula em fase S da intrfase, passando a pontilhado com grnulos variando de grosso,fino a fino denso na medida em que a clula evolui para a fase G2

Encontrado em pacientes com LES

Padro Nucleolar
Auto-anticorpos:
Anti-PM/SCL, To/Th,nucleolna , anti-fibrilarina(U3-RNP), anti-NOR 90 e anti-RNA polimerase I

Relevncias Clnicas:
Anti-PM/SCL, To/Th,nucleolna : Sindrome de superposio da polimiosite com esclerose sistmica Anti-fibrilarina: associado a esclerose sistmica com comprometimento visceral(hipertenso pulmonar) Anti-NOR 90 : sem relevncia clnica definida, descrito na esclerose sistmica Anti-RNA polimerase I: esclerose sistmica com compromentimento visceral

Citoplasmtico fibrilar linear

Auto-anticorpos:
Antiactina Antimiosina

Descrio :
Fibras de estresse que constituem o citoesqueleto decoradas de forma retilnea, cruzando toda a extenso da clula e no respeitando os limites nucleares

Relevncias clnicas:
Antiactina: hepatite auto-imune Antimiosina: hepatite C, hepato-carcinoma, miastenia gravis

Citoplasmtico fibrilar filamentar

Anticorpo antivimentina e antiqueratina

Descrio do padro:
Decorao de filamentos com acentuao uni ou bipolar em relao membrana nuclear

Relevncia clnicas:
Antiqueratina: doena heptica alcolica,em vrias doenas inflamatrias e infecciosas

Citoplasmtico fibrilar segmentar

Auto-anticorpos:
Antialfa-actina, antivinculina e anti-tropomiosina

Descrio de padro:
Apenas segmentos curtos das fibras de estresse se encontram fluorescentes.

Relevncias clnicas:
Anticorpos encontrados nas miastenia gravis, doena de crohn e colite ulcerativa

Citoplasmtico pontilhado polar

Auto-anticorpos:
Antigolginas

Descrio do padro:
A decorao apenas citoplasmtica em pontos agrupados de situao perinuclear, normalmente em apenas um polo nuclear

Relevncias clnicas:
Em altos ttulos: LES, Sjgren primria e outras doenas auto-imunes sistmicas como ataxia cerebelar e infeces virais por EBV e HIV

Citoplasmtico pontilhado pontos isolados

Anticorpo anti-EEA1, antifosfatidilserina e anticorpo anti-GWB Descrio do padro:
Pontos definidos de nmero varivel por toda a extenso do citoplasma

Relevncias clnicas:
Anti-EEA1 e antifosfatidilserina: sem associao clnica definida Anti-GWB: associado a Sjgren primrio

Citoplasmtico pontilhado fino denso

Anticorpo antiprotena P-ribossomal e antiPL7/PL12 Descrio do padro:
Fluorescncia de finos, densos e confluentes pontos, chegando quase a homogeneidade

Relevncias clnicas:
Antiprotena P-ribossomal: especfico do LES e pode estar associado a quadros psiquitricos Anti PL7/PL12: raramente encontrados na polimiosite

Citoplasmtico pontilhado fino

Anticorpo anti-histidil t RNA sintetase (Jo1) Descrio de padro:
Pontos definidos em grande nmero e densidade, clula em diviso e nuclolo no fluorescentes

Relevncias clnicas:
Marcador de Polimiosite no adulto Descrito raramente na dermatomiosite

Citoplasmtico pontilhado reticulado

Anticorpo anti-mitocndria Descrio do padro:
Fluorescncia em retculo por todo o citoplasma

Relevncias clnicas:
Pode sugerir a presena do anticorpo anti-M2 ( antipiruvato desidrogenase), marcador da cirrose biliar primria Esclerose sistmica

Aparelho mittico tipo centrolo

Anticorpo antialfa-enolase

Descrio do padro:
Ponto fluorescente isolado na clula em repouso que se divide em dois e migra ao polo oposto do ncleo medida que a clula entra em diviso

Relevncia clnica:
Altos ttulos sugestivo de esclerose sistmica

Aparelho mittico tipo ponte intercelular

Anticorpo antibeta-tubulina Descrio do padro:
Antgenos que formam a unio entre clulas me e filha ao final da telfase encontram-se fluorescentes

Relevncias clnicas:
Encontrado no LES e na Doena Mista do Tecido Conjuntivo

Aparelho mittico tipo fuso mittico

Anticorpo anti-HsEg 5 Descrio do padro:
H decorao intensa e grosseira nos polos mitticos das clulas em diviso e as pontes intercelulares so positivas em telfase.

Relevncias clnicas:
Associado a diversas condies auto-imunes com baixa especificidade

Misto do tipo nucleolar homogneo e nuclear pontilhado grosso com placa metafsica decorada em anel ( cromossomos negativos)
Anticorpo anti-KU
Relevncias clnicas:
Marcador de superposio de polimiosite e esclerose sistmica Pode ocorrer tb no LES e esclerodermia

Misto tipo nuclear e nucleolar pontilhado com placa metafsica positiva

Anticorpo anti-topoisomerase I (Scl-70)
Relevncia clnica:
Associado a esclerose sistmica forma difusa Mais raramente pode ocorrer na sndrome CREST

Misto tipo citoplasmtico pontilhado fino denso a homogneo e nucleolar homogneo

Anticorpo anti-RNP Relevncia clnica:
Marcador do LES e freqentemente direcionado a quadros psiquitricos.

Misto tipo nuclear pontilhado fino com fluorescncia do aparelho mittico

Anticorpo anti-NuMa1 Relevncia clnica:
Associado a Sndrome de Sjgren

Importncia do PAAC no diagnstico das doenas auto-imunes

Funo para o clnico de teste de triagem na deteco de doena auto-imune Conforme seu padro podemos relacion-lo a determinados auto-anticorpos e dessa forma o clnico pode direcionar a pesquisa desses auto-anticorpos utilizando outros testes mais especficos Lembrando que aps a utilizao de clulas Hep-2 aumentamos a sensibilidade do teste

ANTI-DNA

Anti-DNA
Alta correlao com a atividade do LES quando h comprometimento renal Os testes Anti-DNA em metodologia de IFI e Colorzyme utilizando como substrato a Crithidia luciliae baseando-se no princpio de reao contra o cinetoplasto Devido a sua alta sensibilidade e especificidade essa metodologia a mais utilizada mundialmente.

Crithidia luciliae
um parasita flagelado unicelular No patognico ao ser humano Encontrado no sistema digestivo de insetos tipo moscas varejeiras Este microorganismo possui uma estrutura privilegiada o cinetoplasto que :
Uma mitocndria gigante rica em ds-DNA

Portanto um substrato sensvel e especfico para detectar anticorpos anti ds-DNA

Significado Clnico
A presena de reao positiva para ds-DNA uma forte evidencia da presena de LES com comprometimento renal Este teste faz parte do 10 critrio de classificao do LES pelo American College of Rheumatology

Objetivos do teste
A pesquisa de anticorpos anti-DNA geralmente utilizada como prova de segmento e diferenciao de diagnstico de LES Realizado para diferenciao de padro nuclear homogneo em IFI com clulas Hep-2 Utilizado para avaliao do grau de atividade da doena

Princpio do teste- IFI

Lminas contendo 14 poos com Crithidia luciliae aderidas neles Coloca-se as amostras sorolgicas em cada poo Iniciando triagem com titulaes de 1/20 para diagnstico e aps se positivo repetir com mais titulaes at 1/1280 Incubar por 30 minutos em camara mida Seguir com lavagens com tampo PBS Aps coloca-se o conjugado (anticorpo anti IgG humana ligado a fluorescena) Incubar por 30 minutos em camara mida Seguir com lavagens com PBS Aplicar glicerina e colocar as lamnulas

IFI Anti-DNA
Se presena de antiDNA visualizamos fluorescncia do cinetoplasto da Crithidia luciliae
Lembrar que ele encontra-se posterior ao ncleo na base do flagelo

ENA SCREENING, ENA 4 E ENA 6

Ac Especficos-Deteco do ENA (Anticorpos Nucleares Extraveis)

Pode ser realizada atravs das seguintes tcnicas:
Imunodifuso Dupla de Outcherlony (IDD) ELISA ( antgenos especficos e screening ) IFI com substrato especfico (Anti-DNA Crithidea Lucillae) Western Blotting

Mtodo ELISA
Baseia-se na reao antgeno-anticorpo detectveis atravs de reaes enzimticas A enzima mais comumente utilizada nestas provas a peroxidase, que catalisa a reao de desdobramento da gua oxigenada (H2O2) em H2O mais O2 Existem vrios modelos de testes de ELISA Em sua forma mais simples, chamada ELISA indireto, um antgeno aderido a um suporte slido (placa de ELISA) preparado; A seguir coloca-se sobre a placa os soros em teste ( ex. soro humano), na busca de anticorpos contra o antgeno.

Mtodo ELISA
Se houver anticorpos no soro em teste ocorrer a formao da ligao antgeno-anticorpo, que posteriormente detectada pela adio de um segundo anticorpo dirigido contra imunoglobulinas da espcie onde se busca detectar os anticorpos (humana, no caso), a qual ligada peroxidase. Este anticorpo anti-IgG, ligado enzima denomina-se conjugado. Ao adicionar-se o substrato apropriado para a enzima (isto , H2O2 dissolvida em uma substancia qumica que d uma reao colorida quando H2O2 desdobrada).

Os orifcios onde ocorreu a reao antgeno-anticorpo apresentam uma colorao (varivel dependendo do substrato). Por ltimo , realizada a leitura da placa em um espectofotmetro que faz a medida do comprimento de onda da cor da reao

Deteco de Ac Especficos(ENA)
Atravs do ELISA pode-se usar vrios antgenos especficos como substrato para investigar a existncia de um auto-anticorpo especfico no soro de um paciente (anti-Ro, anti-La, Scl-70, Anti-RNP,AntissDNA, Anti-dsDNA entre outros) ou usar um pool de anticorpos para realizar um screening. Os antgenos esto separados por kits, que contm o nmero de antgenos que cada kit contm:
ENA screening : Possui vrios antgenos. ENA 4 : Possui 4 tipos de antgeno diferentes ENA 6 : Possui 6 tipos de antgeno diferentes E outros testes com mais antgenos

ENA
Screening:
Mtodo utilizado como triagem quando temos a IFI com Hep-2 positiva Se positivo correlacionar com os dados clnicos e realizar o ENA-4 Consiste em :
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. colocar as amostras na placa de ELISA com vrios anticorpos nucleares extraveis Incubar 30 minutos em temperatura ambiente Lavar por 3 vezes com soluo de lavagem Acrescentar o conjugado e incubar por 15 minutos Lavar por mais trs vezes Incubar por mais 15 minutos aps adio de substrato Adicionar soluo STOP Ler em 450 nm no espectofotmetro

ENA
ENA -4:
Imunoensaio enzimtico imunomtrico Microplaca constituda por 3 mdulos com 8 poos cada revestidos com SS-A; SS-B; Sm; RNP-Sm Teste que determina especificamente os anticorpos que positivaram o PAAC e o ENA Screening

ENA- 6:
Imunoensaio enzimtico imunomtrico Microplaca contendo alm dos anticorpos do ENA -4 Jo 1 e Scl-70

ANCA-AUTOANTICORPOS
ANTICITOPLASMA DE NEUTRFILOS

ANCA
So anticorpos direcionados contra constituintes citoplasmticos de neutrfilos e moncitos. Testes para detectar ANCA so utilizados para fazer o diagnstico e a monitorizao de atividade inflamatria de vasculites autoimunes de pequenos vasos : Granulomatose de Wegner Poliangete Microscpica Glomerulonefrite Necrotizante segmentar pauciimune (forma renal de PAM) Sndrome de Churg Strauss melhor demonstrado nessas doenas usando uma combinao de IFI de neutrfilos normais de sangue perifrico e ELISA (Enzmyme linked immunosorbent assays) que detecta ANCA para PR3 (proteinase3) ou MPO (Mieloperoxidase).

Correlao dos autoanticorpos relacionados ao ANCA e as patologias

Pacientes com Granulomatose de Wegener produzem anticorpos :
anti-PR3(proteinase 3)

Pacientes com poliangete microscpica, Churg-Strauss, poliarterite nodosa produzem anticorpos:

anti-MPO (mieloperoxidase)

Quando solicitar ANCA

Descrio do mtodo de deteco do ANCA e seus Padres

Neutrfilos possuem grnulos citoplasmticos contendo PR3 e MPO . Em lminas com neutrfilos fixadas com etanol ocorre a migrao dos grnulos contendo MPO para a Periferia do ncleo , gerando:
padro P - ANCA

O mesmo no acontece com os grnulos com PR3, que permanecem no citoplasma, gerando:
padro C - ANCA

Quanto fixados com formalina no ocorre distribuio de grnulos, estes sendo PR3 ou MPO continuam no citoplasma, resultando em um padro C ANCA em todas as vezes.

 Neutrfilos contendo anticorpos contra outro antgeno que no o PR3 ou MPO , como por exemplo na RCUI apresentam padro P ANCA quando tratados com etanol, por isso so chamados P ANCA Atpico. Tanto o padro P-ANCA como o P-ANCA Atpico so artefatos e s ocorrem quando os neutrfilos so fixados com o etanol. Quando fixados com Formalina os neutrfilos adotam o padro de fluorescncia citoplasmtica (C ANCA ). Com exceo do P-ANCA Atpico que continua com padro P-ANCA mesmo fixado com formalina.

Quando temos um padro ANA ao formol ,temos ausncia de fluorescncia devendo ser realizado IFI com Hep-2 para investigar anticorpos anti-antgenos nucleares

Doenas que geram P-ANCA Atpico

Doenas Inflamatrias Intestinal:
Colite Ulcerativa em 80% dos casos Doena de Crohn

Colangite Esclerosante Primria em 25% dos casos

ETANOL

FORMALINA

FATOR REUMATIDE-FR: DOSADO POR NEFELOMETRIA

Fator Reumatide - FR
O termo FR engloba um grupo de autoanticorpos das classes IgG, IgA e IgM que tm em comum a capacidade de reagir com diferentes eptopos da poro Fc da IgG humana O FR IgM pode servir como marcador precoce da Artrite Reumatide(AR O risco de desenvolvimento da doena aumenta de forma proporcional ao aumento de FR em indivduos normais Est presente em 90% dos casos de AR clssicos, aps seis meses de incio da doena Pode est aumentado em 15-35% em pacientes com LES Falso positivos variam de acordo com o mtodo utilizado para sua deteco

Mtodos para Diagnstico

Antigamente era mensurado utilizando-se a prova do ltex, mais sensvel, associado a tcnica Waller-Rose mais especfica Atualmente o mtodo de pesquisa utilizado para deteco do FR a nefelometria que capaz de identificar as trs classes :IgG, IgM e IgA, fornecendo valores numricos em UI/ml.

Princpio da Tcnica
O FR se presente no soro ir promover a aglutinao de partculas de ltex revestidas com gama-globulina humana presentes no reagente, promovendo um aumento da turbidez, que determinado fotometricamente atravs do nefelmetro contra padres conhecidos. Valor de referncia normal < 20 UI/ml

Nefelometria
Tcnica utilizada para medir concentraes no sangue ,LCR ou urina de vrias protenas como:
Imunoglobulinas : IgG, IgM e IgA Fator Reumatide Complemento : C3, C4

Mede a difrao (desvio) da luz ao passar por uma soluo contendo complexos imunolgicos formados aps reao de imunoprecipitao

Nefelometria

Nefelometria
Vantagens
uma tcnica precisa Rpida Fcil realizao Totalmente automatizada

Desvantagens
Alto custo do anti-soro

Podem surgir reaes inespecficas de soros lipmicos :

Nescessidade de ultracentrifugar a amostra para clarific-la

Necessidade de vrias diluies para antgenos muito concentrados

ANTI-CCP3

Histrico Anti-CCP3
Foi demonstrado em diversos trabalhos que anticorpos perinucleares (APF) e anti-queratina (AKA) so muito mais especficos para AR, embora hoje seja conhecido que eles reagem contra a filagrina nativa e passaram a ser tratados como anticorpos anti-filagrina (AFA). Em 1995, Sebbag e cols., demostraram que todos esses anticorpos eram direcionados para a citrulina contendo eptopos. A citrulina um aminocido no padro, pois no incorporado em protenas durante a sntese protica, sendo gerada via modificao ps-translacional de resduos de arginina pela enzima arginina-peptidil-deaminase (PAD).

 Em 1998, Schellekens cols. Descobriram que peptdeos lineares contendo citrulina eram muito especficos para anticorpos anti-AR (aprox.. 96%) em ensaio por mtodo ELISA.
Um artigo subsequente demonstrou que variantes cclicas destes peptdeos, chamados peptdeos citrulinados cclicos (CCP), eram igualmente especficos para AR, mas com maior sensibilidade que dos peptdeos lineares. Em 2007, a Liga Europia contra o Reumatismo (EULAR) publicou diretrizes para o diagnstico precoce de AR, incluindo o Anti-CCP como o principal teste no diagnstico precoce da Artrite Reumatide.

Importncia Clnica do Anti-CCP3

O anticorpo anti-CCP um novo marcador sorolgico para a AR, com utilidade diagnstica e prognstica que suplementa o FR. A sua importncia fica realada diante da tendncia atual de tratar a AR mais cedo e mais agressivamente com agentes que modificam o curso da doena.

Princpio do Mtodo de deteco do Anti-CCP3

O antignio utilizado no teste QUANTA Lite CCP 3.1 IgG/IgA ELISA um pptido sinttico cclico citrulinado que tem uma sensibilidade e especificidade elevada na deteco de anticorpos em doentes com AR. Este antignio est ligado superfcie de uma placa de micropoos. Os controles pr-diludos e as amostras diludas dos doentes so adicionados aos diferentes poos, permitindo que quaisquer anticorpos CCP IgG presentes se liguem ao antignio imobilizado. A amostra no ligada lavada e adiciona-se um conjugado IgG/IgA antihumano marcado a cada poo. Uma segunda incubao permite ao conjugado enzimtico ligar-se a quaisquer anticorpos de doentes que tenham ficado agarrados aos micropoos. Depois da segunda lavagem para retirar o excesso de conjugado, a restante atividade das enzimas medida adicionando um substrato cromognico e medindo a intensidade da cor que se desenvolve. A intensidade da cor feita por espectrometria, medindo e comparando a intensidade da cor desenvolvida nos poos do doente com a cor dos poos de controle.

OBRIGADA!

Referncias Bibliogrficas
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