Universidad Tecnolgica de la costa

Ingenieria de Fermentaciones

Exmenes parciales
29

de enero 26 de febrero 1 de abril 29 de abril

1. De la Microbiologa Industrial a la Biotecnologa

Biologa celular Biologa molecular Ingeniera de procesos BIOTECNOLOGA Industria farmacutica Ambiente y energa Diagnsticos mdicos Industria qumica Bioqumica

Gentica molecular

Microbiologa

Industria alimentaria Y forrajera

Industria de la fermentacin

PRODUCTOS TIPICOS EN INGENIERIA BIOQUIMICA

cidos orgnicos Aminocidos

Alcoholes y solventes Antibiticos Esteroides Vitaminas Otros Protena unicelular

Ejemplos:
cidos

orgnicos: actico, ctrico, fumrico, glucnico, itacnico, lctico. Aminocidos: glutamato de sodio, Llisina, L-metionina, L-triptofano, Lvalina Alcoholes y solventes: Acetona, butanol, 2,3 butanodiol, etanol, glicerol Antibiticos: bacitracina, estreptomicina, neomicina, penicilina, tetraciclina

Ejemplos:
Esteroides:

cortisona, hidrocortisona, prednisolona, testosterona, triamcinolona. Protena unicelular: Algas, bacterias, levaduras, hongos Vitaminas: cido ascrbico, cianocobalamina, -caroteno, rivoflavina Otros: alcaloides, enzimas, insecticidas biolgicos, metano, nucletidos, polisacridos

Principales productos de la biotecnologa comercializados:

Bebidas Quesos Alcohol

alcohlicas

Antibiticos Reactivos

de diagnstico Jarabes de alto contenido en fructosa Aminocidos Levadura para panificacin Esteroides

Principales productos de la biotecnologa comercializados (cont.):

Vitaminas cido

ctrico Enzimas Vacunas Albmina Insulina Urokinasa Factor humano VIII Hormona del crecimiento Insecticidas microbianos

Tendencias de la Tecnologa a Futuro

Fuente: The Futurist, Nov.-Dic. 1997

Fermentacin
Del

latn fervere = ebullir

Accin

de las levaduras sobre extractos de frutas o granos de produccin de CO2

Apariencia

ebullicin

Fermentacin
Significado

generacin de energa por el catabolismo de compuestos orgnicos

para bioqumicos:

Significado

industriales:

para

microbilogos

Es mucho ms amplio. Cualquier proceso para la generacin de un producto mediante el cultivo msico de un microorganismo

AZCARES
PROCESO OXIDATIVO CATABOLISMO
NUCLETIDOS DE PIRIDINA REDUCIDOS CONDICIONES ANAERBICAS

CONDICIONES AERBICAS Transferencia de electrones va sistema citocromo actuando el O2 como aceptor terminal de electrones

La oxidacin de nucletidos reducidos acoplada con la reduccin de un compuesto orgnico

Productos de la fermentacin bacteriana del piruvato (Dawes y Large, 1982)

A: B: C: E: F:

G:

H: I:

bacterias cido lcticas (Streptococcus, Lactobacillus) Clostridium propionicum Levaduras, Acetobacter, Zymomonas, Sarcina ventriculi, Erwinia amylovora Clostridia Klebsiella Levaduras Clostridia (organismos butricos y butlicos) Bacterias cido propinicas

1.1. Tipos de procesos biotecnolgicos

Aquellos que producen clulas microbianas (biomasa) como producto b) Aquellos que producen enzimas microbianas c) Aquellos que producen metabolitos microbianos d) Aquellos que modifican algn compuesto, el cual se ha adicionado a la fermentacin (proceso de transformacin)
a)

Ejemplos de productos de diferentes categoras en la biotecnologa

(Cooney, 1983)

Masa celular Componentes celulares Productos biosintticos

Levadura de Baker, protena celular Protenas intracelulares Antibiticos, vitaminas, aminocidos, cidos orgnicos

Ejemplos de productos de diferentes categoras en la biotecnologa

(Cooney, 1983)

Productos Etanol, metano, cido lctico catablicos Bioconversin Jarabe de maz rico en fructosa, cido 6-amino penicilnico Tratamiento Lodo activado, digestin anaerobia de desechos

a) Procesos para la produccin de biomasa

Proceso

de fabricacin relacionado con el crecimiento CONDICIONES PTIMAS MAYOR CRECIMIENTO De acuerdo al sustrato que utilizan se clasifican en: Sustratos naturales y Sustratos preparados a partir de productos qumicos puros

Sustratos naturales
Preparados

a partir de productos o subproductos naturales, ejem: mostos sustratos y poca versatilidad de los

Complejidad

Requieren

de investigacin ingenierl previa muy profunda, para determinar condiciones ptimas de proceso

Sustratos preparados a partir de productos qumicos puros

Fuentes

de carbono fijas para la produccin de energa y protenas en forma econmica. usaron crudos de petrleo y productos derivados de ste (como metanol) conocido y fcil de seguir en su reaccin

Se

Sustrato

Produccin comercial de masa microbiana

1.

Produccin de levaduras para la industria panificadora Produccin de clulas microbianas (protena unicelular) utilizada como alimento humano o para animal

2.

TIEMPOS TPICOS DE DUPLICACIN PARA MICROORGANISMOS, PLANTAS Y ANIMALES Organismo

Bacterias, hongos y levaduras Algas Pastizales Aves Cerdos Ganado

Tiempo de duplicacin (h)

0.3 2 2 50 170 340 340 680 680 1,000 680 13,600

b) Enzimas microbianas
Se

producen a partir de fuentes vegetales, animales y microbianas Ventaja de enzimas microbianas: se producen en grandes cantidades mediante tcnicas de fermentacin perfectamente establecidas Se utilizan principalmente en el rea de alimentos e industrias relacionadas

Enzimas de uso comn en la industria

ENZIMA - Amilasa FUENTE
Aspergillus oryzal Bacillus amyloliquefaciens Bacillus licheniformis Aspergillus sp. Trichoderma rusei Penicilliun sp. Bacillus subtilis Aspergillus niger

USOS
Hidrlisis de almidn (mieles, cervecera), Textiles y papel Procesamiento de frutas y hortalizas Hidrlisis (glucanos) en cervecera

Celulasas

-Glucanasa

Enzimas de uso comn en la industria (cont.)

ENZIMA Glucoamilasa Glucosa Isomerasa Lactasa FUENTE
Aspergillus niger Rhizopus sp. Actinoplanes missouriensis Strptomicetes sp. Sacharomices sp.
Hidrlisis de lactosa en leche y suero

USOS
Produccin de mieles de glucosa Isomerizacin de glucosa en mieles

Enzimas de uso comn en la industria (cont.)

ENZIMA Lipasa FUENTE
Aspergillus sp. Mucor sp. Rhizopus sp.

USOS
Modificacin de sabor en queso y mantequilla. Procesamiento de grasa y aceite Extraccin y clarificacin de jugos Panadera y cervecera

Pectinasa

Aspergillus niger

Proteasa

Bacillus amiloliquenfaciens

c) Metabolitos microbianos
El

crecimiento de un cultivo se divide en una serie de etapas:

Periodo de adaptacin o fase lag Fase exponencial o logartmica Fase estacionaria Fase de muerte

 Comportamiento

de cultivo de acuerdo a los productos obtenidos en cada etapa:

Fase

logartmica (TROFOFASE): Los productos generados son esenciales para el crecimiento de las clulas (aminocidos, nucletidos, protenas, cidos nuclecos, lpidos, carbohidratos, etc.) PRODUCTOS PRIMARIOS del metabolismo Compuestos que no tienen una funcin obvia en el metabolismo microbiano PRODUCTOS SECUNDARIOS

Fase estacionaria (IDIOFASE):

PRODUCTOS DEL METABOLISMO PRIMARIO

Metabolito Primario Etanol cido ctrico Acetona y butanol cido glutmico Importancia Comercial
Ingrediente activo en bebidas alcohlicas. Combustible en motores mezclado con petrleo

Diversos usos en la industria de alimentos Solventes Potenciador de sabor

PRODUCTOS DEL METABOLISMO PRIMARIO (cont.)

Metabolito Primario Lisina Nucletidos Polisacridos Vitaminas Importancia Comercial Suplemento alimenticio Potenciador de sabor
Diversas aplicaciones en la industria de alimentos, recuperacin de aceites

Suplemento alimenticio

METABOLISMO SECUNDARIO
No

todos los microorganismos lo presentan entre bacterias filamentosas, hongos y bacterias esporulantes se presenta en enterobacterias

Comn

No

Propiedades de productos secundarios:

Actividad Inhibicin

antimicrobiana especfica de enzimas de crecimiento farmacolgicas

Promotores Propiedades

Relacin entre metabolismo primario y secundario (Turner, 1971)

Las

rutas del catabolismo primario se muestran en la siguiente figura en lneas obscuras productos secundarios identifican con letra itlica se

Los

d) Procesos de transformacin
Se

utilizan clulas microbianas para convertir un compuesto en otro estructuralmente relacionado pero de mayor valor

Las reacciones que pueden ser catalizadas para efectuar este proceso son:

Deshidrogenacin Oxidacin Hidroxilacin Deshidratacin y condensacin Descarboxilacin Aminacin Desaminacin Isomerizacin

Ventajas de los procesos microbianos sobre los puramente qumicos:

Son muy especficos Operan a bajas temperaturas No requieren de metales pesados como catalizadores

Ejemplos de procesos de transformacin:

Produccin Produccin Produccin Produccin

de vinagre de esteroides de antibiticos de prostaglandinas

Problema de los procesos de transformacin:

Se tiene que producir una gran masa microbiana para catalizar la reaccin

ENZIMAS o CELULAS INMOVILIZADAS

1.2. Historia de la Microbiologa Industrial

1.

Perodo de ignorancia (antes de 1800) Perodo de descubrimiento (1800 1900) Perodo de desarrollo industrial (posterior a 1900)

2.

3.

Perodo de ignorancia
almacenaban carne para mejorar su sabor, producan bebidas intoxicantes a partir de frutas y granos Perodo a. C.: Diversas civilizaciones producan queso, yogurt y salsas de leguminosas Ao 4000 a. C.: pan, vino y cerveza
Caverncolas:

Perodo de descubrimiento
Siglo

XVIII: desarrollo del microscopio y descubrimiento de los microorganismos. THENARD sugiere que los m.o. producen el alcohol del vino Siglo XIX: Pasteur demostr que eran correctas las ideas de Thenard. Hansen aisl y propag cultivos de levadura (cervecera Carlsberg). Se descubre que algunas enfermedades son causadas por m.o. Emmerich y Low aislaron de bacterias la FIOCIANASA (primer antibitico) 1ros pasos para tratar aguas residuales con m.o.

Perodo de desarrollo industrial

1900

- 1950: desarrollo procesos fermentativos industriales: fermentaciones alcohlicas, produccin de cidos actico, lctico, ctrico y glucnico, acetona, butanol y glicerol. Procesos AEROBICOS y ANAEROBICOS. la Segunda Guerra Mundial: produccin de penicilina la post-guerra: Se present un retroceso debido al crecimiento de la industria petroqumica

Durante Durante

Perodo de desarrollo industrial

Aos

60s: Avance importante debido a la investigacin para la produccin de masa microbiana como fuente de protena, por parte de compaas multinacionales
desarrollo de las manipulaciones genticas de m.o. IN VITRO, dando origen a la INGENIERIA GENETICA

ltima

fase de desarrollo: inicia con el

Calendario de eventos (segn Houwink, 1984)

La

era pre-Pasteur (antes de 1865):

Bebidas alcohlicas (cerveza, vino) Productos lcteos (queso, yogurt) Otros alimentos fermentados

La

era Pasteur (1865-1940):

Etanol, butanol, acetona, glicerol cidos orgnicos (cido ctrico) Tratamiento aerobio de agua residuales

Calendario de eventos (segn Houwink, 1984)

La

era de los antibiticos (1940-1960):

Penicilinas: tecnologa de la fermentacin

sumergida Gran variedad de antibiticos Tecnologa de la estructura de la clula animal: vacunas contra virus Transformaciones microbiolgicas de esteroides

Calendario de eventos (segn Houwink, 1984)

La

era de los post-antibiticos (1960-1975): Aminocidos Protena celular Enzimas (detergentes) Tecnologa de las clulas y las enzimas inmovilizadas (glucosa isomerasa) Tratamiento anaerobio de aguas de desecho Polisacridos bacterianos (goma de xantn) Gasohol

Calendario de eventos (segn Houwink, 1984)

La

era de la nueva biotecnologa (1975 -): Tecnologa de los hibridomas: anticuerpos monoclonales Pruebas diagnsticas con anticuerpos monoclonales (1980) Ingeniera gentica (1974) Vacunas de origen animal contra la diarrea (1982) Insulina humana (1982)

1.3. Elementos de un proceso biotecnolgico

i. ii. iii. iv.

v. vi.

Formulacin del medio de cultivo Esterilizacin del medio, bioreactores y equipo de apoyo Produccin de un cultivo activo y puro Crecimiento del m.o. en el bioreactor bajo condiciones ptimas para la formacin del producto Extraccin y purificacin del producto Manejo de los efluentes generados en el proceso

DESARROLLO DE INCULO

Biomasa Cultivo
(fluido) SEPARACION DE CELULAS

Cultivo stock

Biorreactor de siembra

Biorreactor de produccin

Sobrenadante
EXTRACCIN DEL PRODUCTO

ESTERILIZACIN DEL MEDIO

PURIFICACIN FORMULACIN DEL MEDIO EMPAQUE Constituyentes del medio

TRATAMIENTO DE EFLUENTES