Avaliao da capacidade de infeco e multiplicao da bactria Ca. Liberibacter asiaticus atravs de PCR quantitativo em tempo real em tangerina Sunki e P.

trifoliata

Samanta Marengo1,2; Maringela Cristofani Yaly2, Alessandra Alves de Souza2; Helvcio Della Coletta Filho2; Marcos Antonio Machado 2
1Curso

PG/IAC/APTA, Campinas, SP, 2Centro APTA Citros Sylvio Moreira - IAC, Caixa Postal 04, 13490-970, Cordeirpolis, SP, samanta@centrodecitricultura.br

INTRODUO
O huanglongbing (HLB) ou greening considerada uma das mais devastadoras doenas dos citros em todo o mundo (Halbert & Manjunath, 2004), recentemente foi detectada no Estado de So Paulo (Coletta Filho et al., 2004). O agente causal, Candidatus Liberibacter spp, uma bactria endocelular, no cultivvel e limitada ao floema da planta hospedeira. Os sintomas se caracterizam por frutos com tamanho reduzido e assimtrico, columela central torta, abortamento de sementes e colorao desuniforme. O patossistema HLB ainda muito pouco conhecido. O controle da doena em todo o mundo se d por erradicao de plantas doentes e controle qumico do vetor. At o momento, no h nenhuma fonte de resistncia que possa ser utilizada no controle desta doena. Neste sentido o objetivo desse trabalho foi avaliar a capacidade de infeco e de multiplicao da bactria Ca. L. asiaticus em hbridos de citrandarins (tangerinna Sunki x P. trifoliata). Para isso, primeiramente realizou-se um estudo da capacidade de replicao dessa bactria nos parentais.

RESULTADOS E DISCUSSO
Avaliao da populao de bactrias Os resultados obtidos por qPCR indicam que existe diferena na multiplicao da bactria entre as duas espcies estudadas. O Ct (threshold cycle), ciclo onde a reao atinge o limiar de deteco, da tangerina Sunki menor do que o de Poncirus, mostrando que a bactria se multiplica com maior rapidez na tangerina.
Ct (threshold cycle)
Tempos de

coleta (Dias)

Poncirus trifoliata

Citrus sunki

15 30 60 90

28,83 a* 29, 97 a 30,89 a 34,47 a 34,13 a 29,20 a

27, 94 a 28, 49 a 29,22 a 29,60 b 29,63 b 18,27 b

C
120

Fig. 1 Sintomas tpicos do huanglongbing em plantas de citros: (a) planta com amarelecimento; (b) frutos apresentando tamanho reduzido, columela torta, sementes abortadas e amadurecimento; (c) Candidatus Liberibacter spp

Com 180 dias de inculo a variao entre os Cts resultou numa diferena de 10,93 ciclos. Como a amplificao atravs da PCR exponencial (210,93) pode-se afirmar que as amostras de Sunki apresentaram Liberibacter numa concentrao 1.951 vezes maior que as amostras de Poncirus.

180

MATERIAL E MTODOS
Bloco experimental 94 hbridos (Citrus sunki vs. Poncirus trifoliata) + parentais
Tabela 1. Threshold cycle- Ct obtido atravs da tcnica de qPCR. * Mdias seguidas das mesmas letras nas linhas no diferem significativamente entre si pelo teste t a 1 e 5%.

CONCLUSO
Enxertia com borbulhas infectadas com Ca. Liberibacter asiaticus. Parentais 6 repeties biolgicas Coletas 15, 30, 60, 90, 120 dias. Esses resultados indicam um grande potencial para deteco de hbridos menos suscetveis, pois os parentais so contrastantes para essa caracterstica. A prxima etapa est sendo quantificar a populao de bactria nos hbridos intergenricos utilizando-se de qPCR e mapeamento de QTLs associados a tolerncia/suscetibilidade ao HLB.

PCR em tempo real SYBR GREEN

LITERATURA CITADA
HALBERT, S. E.; MANJUNATH, K. L. Asian citrus psyllids (Sternorryncha: Psyllidae) and greening disease of citrus: a literatura review and assessment of risk in Florida. Florida Entomologist 87(3): 330-353, 2004. COLETTA-FILHO, H. D.; TARGON, M. L. P. N.; TAKITA, M. A.; DE NEGRI, J. D.; POMPEU JR., J.; DO AMARAL, A. M.; MULLER, G. W.; MACHADO, M. A. First Report of the Causal Agent of Huanglongbing (Candidatus Liberibacter asiaticus) in Brazil. Plant Dis. 88:1382, 2004.

Primers - regio 16S do

DNA bacteriano

Sequenciamento

APOIO FINANCEIRO: FAPESP e CNPq