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Instituto Nacional de Salud Publica

Escuela de Salud Publica de Mxico

ENZIMAS
S P

Biol. Luz Edith Ochoa Snchez IB. Perla Tinoco Carrillo QC. Miguel ngel Ortiz Gil.

11 DE NOVIEMBRE 2008

1.- QU ES UNA REACCIN QUMICA?


Es todo proceso qumico en el que una o ms sustancias (reactivos o reactantes) sufren un proceso de transformacin o combinacin para dar lugar a una serie de sustancias (elementos o compuestos) denominadas productos. A la representacin simblica de las reacciones se les denomina ecuaciones qumicas.

2.- QU ES LA ENERGA DE ACTIVACIN?

Es la energa que necesita un sistema antes de poder iniciar un determinado proceso o es la energa mnima necesaria para que se produzca una reaccin qumica dada. La energa de activacin es inversamente proporcional a la velocidad de reaccin.

3.- QU ES UN CATALIZADOR?

Es una sustancia capaz de acelerar (catalizador positivo) o retardar (catalizador negativo o inhibidor) una reaccin qumica, permaneciendo ste mismo inalterado (no se consume durante la reaccin), proceso denominado catlisis.
Los catalizadores disminuyen la Ea, que deben superar los reactivos para transformarse en productos, sin modificar la constante de equilibrio.

4.- QU SON LAS ENZIMAS?

Sustancias de naturaleza proteica que catalizan reacciones qumicas, siempre que sea termodinmicamente posible. En estas reacciones, las enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en diferentes molculas, los productos. A las reacciones mediadas por enzimas se les denomina reacciones enzimticas.

5.- DE QUE ESTN CONSTITUIDAS?

Las enzimas estn constituidas por una protena y un componente llamado cofactor, el cual puede estar ausente. En su estructura, se entrelazan y se pliegan una o ms cadenas polipeptdicas, que aportan un pequeo grupo de aminocidos para formar el sitio activo, una enzima y un sustrato no llegan a adherirse si sus formas no encajan con exactitud , su estructura depende de los aminocidos que la conforman.

6.- DONDE SE SINTETIZAN?

Las enzimas se componen de una cadena lineal de aminocidos que se pliegan durante el proceso de traduccin (mRNA) para dar lugar a la estructura terciaria de la enzima, el proceso se lleva a cabo en los ribosomas.

7.- QU ES EL SITIO ACTIVO DE UNA ENZIMA?

El sitio activo est formado por las cadenas laterales de residuos especficos y es al localizacin sobre la superficie de la enzima donde se une el sustrato estabilizada por medio de interacciones dbiles y tiene lugar la reaccin qumica.

Sitio activo

8.- CMO IMPACTAN LAS ENZIMAS EN LAS REACCIONES BIOQUMICAS?

Las reacciones qumicas que se llevan acabo dentro de los organismos no ocurren espontneamente, estn catalizadas por enzimas, por lo que sin las enzimas las reacciones no se llevaran acabo.

9CULES SON LOS 6 GRUPOS EN LOS QUE SE CLASIFICAN LAS ENZIMAS?

1.-xido-reductasas (reacciones de xido reduccin):

2.- Transferasas ( transferencia de grupos funcionales):

3.- Hidrolasas (reacciones de hidrlisis):

4.-Liasas (adicin a los dobles enlaces):

5.-Isomerasas (reacciones de isomerizacin):


:

6.- Ligasas (formacin de enlaces con aporte de ATP)

10.- QU ES UN COFACTOR?
La actividad de algunas enzimas depende solamente de sus estructura como protenas, mientras que otros necesitan, adems uno o mas componente no proteicos llamados cofactores. El cofactor puede ser un in metlico, o bien una molcula orgnica llamada coenzima los iones metlicos pueden ser: (Fe2+, Cu2+, K+, Mn2+, Mg2+, entre otros).
o

o
o

El ion metlico puede actuar como: Centro cataltico primario Grupo puente para reunir el sustrato y la enzima, formando un complejo de coordinacin Agente estabilizante de la conformacin de la protena enzimtica en su forma catalticamente activa.

11.- QU ES UN GRUPO PROSTTICO?


Cuando el coenzima se halla unido ntimamente a la molcula del enzima recibe, normalmente el nombre de grupo prosttico. Un grupo prosttico es el componente no aminoacdico que forma parte de la estructura de algunas protenas y que se halla fuertemente unido al resto de la molcula. Las protenas con grupo prosttico reciben el nombre de heteroprotenas (o protenas conjugadas).

Grupo prosttico Flavn mononucletido 1 Flavn adenn dinucletido 1 Pirroloquinolina quinona 2 Fosfato de piridoxal 3 Biotina 4 Metilcobalamina 5

Funcin Reacciones redox Reacciones redox Reacciones Redox Transaminacin, descarboxilacin y desaminacin Carboxilacin Metilacin e isomerizacin

Distribucin Bacterias, Archaea y eucariotas Bacterias, Archaea yeucariotas Bacterias Bacterias, Archaea y eucariotas Bacterias, Archaea y eucariotas Bacterias, Archaea y eucariotas Bacterias, Archaea y eucariotas Bacterias, Archaea y eucariotas Bacterias, Archaea y eucariotas Bacterias, Archaea y eucariotas

Pirofosfato de tiamina 6
Hemo 7 Molibdopterina 8 9 cido lipoico 10

Descarboxilacin
Reacciones redox Reacciones de oxigenacin Reacciones redox

12.- EN CINTICA ENZIMTICA, QU SIGNIFICAN VMAX, KM Y [S].

La representacin grfica de la ecuacin de Michaelis-Menten (v0 frente a [S]0) es una hiprbola. La Vmax corresponde al valor mximo al que tiende la curva experimental, y la KM corresponde a la concentracin de sustrato a la cual la velocidad de la reaccin es la mitad de la Vmax.

Si la velocidad inicial de la reaccin se mide a una determinada concentracin de sustrato (representado como [S]), la velocidad de la reaccin (representado como V) aumenta linealmente con el aumento de la [S]. Sin embargo, cuando aumentamos la [S], la enzima se satura de sustrato y alcanza su velocidad mxima (Vmax), que no sobrepasar en ningn caso, independientemente de la [S].

13.- QU ES LA ACTIVIDAD ENZIMTICA?

La unidad de actividad enzimtica (U) como la cantidad de enzima que cataliza la conversin de 1 mol de sustrato en un minuto. La actividad especfica es el nmero de unidades de enzima por miligramo de protena (U/mg prot) o por mililitro de disolucin (U/ml). Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de actividad enzimtica como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo. Esta unidad se llama katal (kat). 1 katal equivale a 60 x 106 U.

14.- CUL ES LA ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN?

15.- PARA QU SIRVE LA KM?

La constante de Michaelis, KM, mide la concentracin de sustrato a la que la velocidad de reaccin es Vmx/2.Por lo tanto: es una magnitud determinada experimentalmente y definida operativamente; es la concentracin del sustrato a la cual la velocidad de la reaccin es la mitad de la velocidad mxima.

16.- PARA QU NOS SIRVE LA ECUACIN DE LINEWAEVER-BURKE?

Cuando se grafica la velocidad de la reaccin, v0, contra la concentracin de substrato, S, no siempre es posible determinar la condicin en que se ha llegado a la velocidad mxima, Vmax.

El inverso de la velocidad (1/v0) contra el inverso de la concentracin de substrato (1/S), se obtiene una lnea recta. El grfico de Lineweaver-Burke. Se utiliza para calcular la Km y la Vmax as como para determinar el mecanismo de accin de los diversos tipos de inhibidores. Describe una recta en donde el intercepto con el eje de las abscisas es igual a 1/Km y el intercepto con el eje de las ordenadas es igual a 1/Vmax.

1 Km 1 v 0 Vmax S Vmax

17.- EN QU CONSISTE LA INHIBICIN COMPETITIVA?

El sustrato y el inhibidor no se pueden unir a la misma enzima al mismo tiempo. El inhibidor tiene afinidad por el sitio activo de una enzima en el que tambin se une el sustrato; el sustrato y el inhibidor compiten para el acceso al sitio activo de la enzima. Los inhibidores competitivos son a menudo similares en estructura al sustrato verdadero.

Inhibicin competitiva - Representacin recproca doble

1/v

0.07

0.06

0.05

0.04

1/Vmax

0.03

-1/Km

0.02

0.01

1/s
0.00 -0.3 -0.2 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

-1/(Km(1 + i/Ki))

18.- EN QU CONSISTE LA INHIBICIN NO COMPETITIVA?


El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la fijacin del substrato a la enzima, pero s impide la accin cataltica: Inhibicin No Competitiva

19.- Qu es una enzima alostrica y cmo es su curva de Vmax vs [S]?


- Son protenas con mltiples subunidades (mltiples centros activos y catalticos)
- Presentan una cintica sigmoidal, indicativa de efectos cooperativos en la unin del sustrato. - Su actividad est regulada por otras molculas efectoras. - Pueden mantener las concentraciones de sus sustratos en valores bastante constantes: * Existe una concentracin crtica de sustrato ([S]c) por debajo de la cul la enzima es prcticamente inactiva * Un pequeo aumento de la concentracin de sustrato, por encima de la ([S]c, da lugar a un notable aumento de la actividad enzimtica

20.- CMO SE DA LA ACTIVACIN E INHIBICIN ALOSTRICA?

La inhibicin alostrica ejerce su accin sobre otra parte de la molcula, causando un cambio conformacional con repercusin negativa en la actividad enzimtica.

La activacin alosterica en los que el cambio en el sitio cataltico producido por el activador alosterico es positivo, de modo que facilita la entrada del sustrato y por tanto su conversin a los productos.

21.- QU EFECTO TIENEN EL PH Y LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA?

Las enzimas poseen una temperatura de actividad mxima, y al sobrepasarla hay una prdida de la estructura terciaria lo que provoca la prdida de su actividad cataltica de manera irreversible debido a que las fuerzas de unin dbiles se rompen. Aumentos en la temperatura aumenta las interacciones cinticas de las molculas

Enzima Pepsina

pH ptimo 1.5 7.7 7.6

Vo

Tripsina Catalasa

Arginasa
Fumarasa 1 3 pH 7 11 14 Ribonucleasa

9.7
7.8 7.8

Las enzimas presentan su mxima actividad a un valor dado de pH (normalmente entre 4 y 8). Si se someten a un cambio en el pH, los diversos grupos funcionales de las cadenas polipeptdicas pueden ionizarse o interactuar con otras cargas o grupos funcionales provocando un cambio en su estructura terciaria.

Vo

Vo

Vo

37 85 Temperatura oC)

10

50 100 Coenzima

10

30 50 70 100 Tiempo (min)

22.- QU PAPEL JUEGAN LAS BETA-LACTAMASAS EN UNA INFECCIN POR CIERTOS TIPOS DE BACTERIAS?

Las -lactamasas son enzimas que rompen el anillo -lactmico que es una estructura de cuatro tomos presente en ciertos antibiticos que actan inhibiendo la sntesis de peptidoglucanos de la pared celular bacteriana debido a que dicho anillo es anlogo del aminocido D-alanilD-alanina. Por tanto, al romperse el anillo -lactmico, la molculas pierde su actividad antimicrobiana. -lactamasas son responsables de crear resistencia a los antibiticos.

Modo de accin de las -lactamasas

E+I

EI

EI*

E + I*

1. El inhibidor se fija a la enzima igual que el substrato o un inhibidor competitivo convencional 2. La accin cataltica de la enzima convierte al inhibidor I en una especie altamente reactiva I* 3. I* modifica covalentemente a la enzima, inactivndola de forma definitiva al igual que un inhibidor irreversible.

23. QU ES UNA RIBOZIMA?


Algunas molculas de RNA puden actuar como enzimas. A estas molculas se les denomina ribozimas. Al igual que las enzimas protecas poseen un centro activo que se une especficamente a un sustrato y que facilita su conversin en un producto. Las ribozimas son menos verstiles que las enzimas proteicas.

24.- SOLUCIN DE PROBLEMA DE CINETICA ENZIMATICA.


Las cinticas de una enzima se midieron en funcin de la concentracin de sustrato tanto en ausencia como en presencia de 2X10-3 M de inhibidor (I). Los valores experimentales que se obtuvieron estn dados en la siguiente diapositiva. a.- Cules son los valores de Vmax y KM tanto en ausencia como en presencia del inhibidor? b.- Qu tipo de inhibicin es?
VMAX CON O SIN INHIBIDOR: (moles/min) 50

KM SIN INIHIBIDOR

0.001M

KM CON INHIBIDOR

0.002M

TIPO DE INHIBICIO:

COMPETITIVA.

Inhibicin competitiva
PROBLEMA EQUIPO LUZ-PERLA-MIGUEL

Sustrato
Concentracin (M) 0.3 X 10-5 0.5 X 10-5 Inverso (1/M)

Velocidad (moles/min)
Sin inhibidor Con Inhibidor

Inversos de la velocidad (min/moles)


Sin inhibidor Con Inhibidor

10.4 14.5

8.2 12.12

1.0 X 10-5
3.0 X 10-5 9.0 X 10-5

22.5
33.8 40.5

19.05
32.26 40

Sustrato

Velocidad (moles/min)

Inversos de la velocidad (min/moles)


Sin inhibidor Con Inhibidor

Con Concen- Inverso (1/M) Sin inhibidor Inhibidor tracin (M)

0.0003

3333.33

10.4

8.2

0.0962

0.1220

0.0005
0.001

2000.00
1000.00 333.33 111.11

14.5
22.5

12.12
19.05

0.0690
0.0444 0.0296 0.0247

0.0825
0.0525 0.0310 0.0250

0.003
0.009

33.8
40.5

32.26
40

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KM Vmax
pendiente de la recta

1/V

-1 / KM 1 Las unidades de [S] es M. Las unidades de V son moles/min Vmax

1/S

ordenada al origen

BIBLIOGRAFA:

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