Campuzano Mrquez Pamela Lobato Ramos Alejandra Soriano Pineda Iveett

MORFOLOGA BACTERIANA
Las bacterias, microorganismos unicelulares englobados en el reino Procaryotae pueden presentar una morfologa: En forma esfrica: (coco). En forma cilndrica (bacilo). En forma helicoidal.

COCOS
CONDICIONES SE ENCUENTRAN

Dependiendo de los planos de divisin celular y de la mayor o menor capacidad de separacin o adherencia de las clulas hijas, los cocos pueden aparecer

Aislados.(individuali zados) Agrupados.

AISLADOS:

AGRUPADOS:
en parejas (diplococos). En Cadenas (estreptococos).

En Racimos (estafilococos).

Ttradas (agrupacin 4 elemntos). Sarcinas (agrupacin 8 elementos).

BACILOS: (L.baccillus: baston) Individualmente:

Bacilo comn: en forma de bastn.

Claviforme: terminacin en clava o maza.

Fusiformes: extremos afilados. Cortados a pico o en forma recta.

Filamentosos (ramificaciones).

AGRUPADOS:
Estreptobacilos (en cadenas).

Empalizada.
Agrupados en letras.

Cocobacilos.

HELICOIDALES O ESPIRALES: SE CLASIFICAN SEGN:

El nmero de curvaturas Cuerpo rgido o flexible (poseen filamentos internos contrctiles). Rgido: Vibriones. (1 c) Espirilos. (2c)

FLEXIBLES:
Borrelia.

Treponema.
Leptoespira. Pleomorfismo:La morfologa no siempre es constante pueden presentar forma de estrella, piriformes, discoidales con apndices o yemas y planas cuadrangulares.

TAMAO BACTERIANO

Unidades de medida bacteriana: Micra () o micrmetro (m). (10mm) Nanmetro (nm). (10mm)

Dimetro de los cocos: +/- 0.5 a 2 m Bacilos: ancho: 0.2-2 m largo: 2-20 m

ESTRUCTURAS BACTERIANAS: Capsula: Es la estructura mas externa, rgida, compuesta por polisacridos y glucoproteinas. Sirve como cubierta protectora resistiendo a la fagocitosis.

Pared Celuar: Con un esqueleto de petidoglucanos o mureina. Da esructura y protege a la bacteria de la lisis.

FLAGELOS:
Responsable de la movilidad bacteriana.
Clasificados por numero y disposicin:

trica Montrica

Anftrica Loftrica
Pertrica

GRNULOS METACROMTICOS:

De polifosfato. Acumulan fosfato cuando la sntesis de cidos nucleicos est impedida. Se tien de color prpura con azul de metileno y se usan para identificar ciertas bacterias.
Grnulos metacrormticos en los Ms (Giemsa x400).

ESPORAS (G. CLOSTRIDIUM Y BACILLUS)

Algunas bacterias producen formas de resistencia llamadas esporas (metablicamente inactivas) que pueden sobrevivir en condiciones desfavorables tales como el calor o la sequa. bajo condiciones ambientales apropiadas, pueden germinar.

Las esporas que se forman dentro de la clula se llaman endoesporas, producindose una por clula. Existen distintos tipos segn su forma (ovoides, esfricas) y localizacin dentro de la clula (centrales, subterminales y terminales).

TINCIN SIMPLE
*Utilizan un solo colorante *Las estructuras se tien con la misma tonalidad *Se utiliza para ver la morfologa y arreglo en el crecimiento de las bacterias

TINTA CHINA
Utilizada para la observacin de esporas (mecanismo de defensa) Y para la tincin negativa, con la cual se observa la cpsula bacteriana

AZUL DE METILENO
Se utilizan para observar morfologa y agrupacin

Para tincin de bacterias alcoholcido resistente como bacilos de Tuberculosis o la lepra En este mtodo esta solucin es considerada como colorante de contraste, por lo que tie de color azul los tejidos de soporte y otras estructuras orgnicas de los bacilos

AZUL DE LACTOFENOL
Usado para la observacin de hongos : -El fenol destruye la flora acompaante, el acido lctico conserva las estructuras fngicas al provocar un cambio de gradiente osmtico con relacin al interior del fngico generando una pelcula -Azul de algodn posee la capacidad de adherirse a la quitina presente en las hifas y conidios y de los hongos microscpicos

FROTIS

Se denomina frotis a la extensin que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo ms posible los microorganismos

PREPARACIN DE UN FROTIS
*Colocar una pequea gota
de agua en el centro de un portaobjetos limpio *Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones aspticas, una pequea cantidad del cultivo bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua. *Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensin homognea que quede bastante extendida para facilitar su secado.

FIJACIN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS

Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos
Con metanol (para bacterias procedentes de medio lquido). Aadir unas gotas de metanol sobre la extensin completamente seca. Esperar a que el metanol se evapore completamente.

TINCIN DEL FROTIS BACTERIANO Cubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante el tiempo que indique el protocolo de cada tincin concreta. Suele oscilar entre 1 y 5 minutos.

Lavar la preparacin con agua para eliminar el colorante. Esta operacin se realiza inclinando el portaobjetos y aplicando el chorro de agua en su parte superior de manera que resbale sobre el frotis, pero sin que vaya dirigido directamente sobre l, pues podra arrastrar parte del frotis consigo

* Secar el porta presionando entre dos papeles filtro, pero en ningn caso se debe frotar el portaobjetos. * Observar la preparacin al microscopio

MONTAJE DEFINITIVO DE LA PREPARACIN

Pasar sucesivamente los portaobjetos por las siguientes soluciones mantenindolos un mnimo de 5 minutos en cada bao. El objetivo es que la preparacin quede totalmente deshidratada. Escurrir bien el reactivo antes de introducirlo en el siguiente bao. Alcohol de 70 Alcohol de 95 Acetona pura Acetona-xilol (1:1) Xilol

TINCIONES COMPUESTAS O DIFERENCIALES (COMBINADAS)

Se utilizan para mostrar las diferencias entre bacterias; se denominan compuestas porque se emplea ms de un colorante. Las ms utilizadas en microbiologa son de Gram y Ziehl-Neelsen

COMPONENTES DE GRAM Y ZIEHL-NEELSEN

1. COLORANTE PRINCIPAL O PRIMARIO; bsico que a las clulas cargadas negativamente las colorea 2. MORDIENTE: permite al colorante actual con ms intensidad y que se fije a las clulas (sales metlicas, solucin yodada o lugol, tanino y fenol). 3. AGENTE DECOLORANTE: disolvente orgnico como el alcohol, un cido o alcohol acetona. 4. CONTRACTOR O COLORANTE SECUNDARIO; Colorante bsico de distinto color que el primer colorante

TINCIN DE GRAM (COLORACIN)

Adems de observar las bacterias permite diferenciar los dos grandes grupos:

TCNICA PARA GRAM

1. Ya fijo el extendido cubrir la superficie con cristal violeta o con violeta de genciana (colorante primario) por un minuto.

2. Lavar con abundante agua

3. Cubrir con lugol (mordiente) durante 1 minuto 4. Lavar con abundante agua 5. Inclinar el portaobjeto y dejar gotear al alcohol de acetona (decolorante) hasta que deje de perder color 6. Lavar con agua 7. Cubrir el preparado con fucsina bsica (contracolor) por 1 min 8. Lavar con agua 9. Dejar secar el preparado al aire 10. Observar con objetivo de inmersin

FUNDAMENTO DE LA TINCIN DE GRAM

La afinidad gram positiva o negativa depende de la composicin qumica de la pared celular en la parte de su estructura fsica

Despus de las primeros 4 pasos, al observar al microscopio todo se ve violeta

Luego del decolorante algunas conservan su color mientras que otras se decoloran.

Las violetas son Gram positivas, las que pierden su color son gram negativas, pues los decolorantes orgnicos utilizados abren poros de la membrana externa de las bacterias gramnegativas (principalmente de lipoprotenas y lipopolisacridos), permiten la salida del colorante principal; al agregar el contracolor stos quedan rojos .
La fuscina a veces es reemplazada por rojo congo o safranina

Escherichia- coli Tincin de Gram

COLORACIN DE ZIEHL-NEELSEN
Las Mycobacterium las especies Corynebacterium y algunas veces con los actinomicetos, no se tien con la coloracin de Gram. La presente es una tcnica cidoalcohol resistente ideada por Erlich.

TCNICA
1. Ya fijo con la superficie cubierta con carbolfuscina como colorante principal (fucsina)+ un primer mordiente (cido fnico o carblico) 2. Calor por 5 min con un hisopo encendido hasta que haya vapor (calor mordiente fsico o segundo mordiente) 3. Lavar con abundante agua 4. Inclinar el portaobjetos y gotear el cido alcohol (decolorantes: cido sulfrico al 3% en el alcohol etlico al 95%) hasta que deje de transmitir calor. 5. Lavar con abundante agua 6. Cubrir el preparado con azul de metileno (contracolor) por 1 min 7. Lavar con agua 8. Dejar secar el preparado al aire 9. Observar el preparado con objetivo de inmersin

FUNDAMENTO DE LA COLORACIN DE ZIEHLNEELSEN

Manifiesta la capacidad de resistir a la decoloracin gracias al alto contenido de lpidos complejos (cidos miclicos) y ceras que poseen algunos microorganismos en su pared celular. Los que resisten la decoloracin se llaman cido alcohol resistentes AAR y se ven rojos mientras que se tien azul son los no cido alcohol reisistentes (no AAR). Tinciones de Ziehl-Neelsen y PAS sin nada
a destacar.

Formacin nodular de 3 cm de dimetro mximo, compatible con ganglio linftico que muestra superficie externa lisa con restos de tejido adiposo, y superficie de corte amarillenta homognea

COLORACIN DE GIEMSA
Modificacin de la de Romanowsky (azul de metileno y eosina) : Para diferenciar lo intracelular de lo extracelular de parsitos en sangre circulante en las especies como plasmodium y Leishmania, Para demostracin de formas de levaduras de Candida, Histoplasma capsulatum y Pneumocystis carinii, para la observacin de especies Mollicutes, especies de Rickettsia y cuerpos elementales de especies de Chlamydia. En laboratorios de hematologa para demostrar la diferencia entre el ncleo y el citoplasma de las distintas clulas sanguneas.

TINCIN NEGATIVA
El colorante no tie los microorganismos, se queda alrededor de ellos. Se usa tinta china (suspensin de partculas de carbn coloidal) o nigrosina (colorante negro insoluble en agua) Se usa para encontrar presencia de cpsulas alrededor de las clulas microbianas y micticas, ya que este elemento no se tie con bases.

Para examinar estas tinciones debe aumentarse el contraste cerrando el diafragma del condensador, la cpsula parece un halo que se ve gris en el fondo negro.

TINCIN DE ENDOSPORAS
Ya que las endosporas poseen cubiertas exclusivas para teirlas se requiere calor para que el colorante pueda penetrar se usa el verde de malaquita y safranina o fucsina (tie contraste en formas vegetativas)
Segn lo visto con aceite de inmersin, la presencia de endosporas teidas de verde con malaquita verde y las clulas vegetativas se tie con safranina. Sin errores el material verde que puede estar presente en la diapositiva despus de la tincin de endosporas las endosporas son simtricos en forma y apariencia, y ms pequeas que las clulas vegetativas (varios se indican con flechas de color negro). En este grupo, endosporas quedan algunos dentro de las clulas (un ejemplo de una endospora en una celda se muestra por la flecha azul), prcticamente todos han sido liberados

TINCIN DE FLAGELOS Y CILIOS

Estructuras muy delgadas se realiza una suspensin coloidal de sales de cido tnico (mordiente) que forman un precipitado que se deposita sobre las estructurasy a la fucsina cida los cilios y flagelos pueden ser visualizados como estructuras de color rojo.

COLORACIONES FLUORESCENTES
Se usan colorantes llamados fluorocromos que se iluminan con luz especial como : naranja de acridina (afinidad especial por el cido nucleico) rodamina-auramina (cidos miclicos de las paredes de micobacterias) y el blanco coflor (afinidad hacia celulosa, levaduras, hifas y seudohifas).

Naranja de acridina susceptibilidad del ADN del espermatozoide al cido inducido por la desnaturalizacin in situ por cuentificacin del cambio metacromtico del naranja de acridina fluorescente del verde (ADN natural) al rojo (ADN desnaturalizado

BIBLIOGRAFA
Negroni Marta Microbiologa estomatolgica, Editorial Mdica Panamericana S. A., Buenos Aires 1999. Liebana Urea J. Microbiologa oral 2 Ed. Interamericana de Espaa Mc Graw- Hill, Madrid, 1995