E N Z I M A S

Introduccin
Un rasgo especial de la clula es su capacidad para realizar reacciones qumicas rpidas y a temperatura ambiente, fuera de la clula estas reacciones serian lentas y la compleja actividad metablica de la clula no podra realizarse a velocidades tan bajas. La vida, tal y como la conocemos, no seria posible si no existieran catalizadores para facilitar y controlar los procesos metablicos. Esos catalizadores son las enzimas.

1850 1926 1960

Enzimas y Coenzimas
Protenas sintetizadas en la clula, catalizan una reaccin, van desde 12,000 hasta 1 milln de tipos y peso molecular es en kDa

Actividad cataltica a travs de Cofactores (iones inorgnicos como metales).

DESCRIPCION
Complejo metalorgnico llamado Coenzima, que actan como transportadores transitorios de grupos funcionales especficos.

Grupo prosttico Haloenzima Apoprotena

Elementos inorgnicos que sirven como cofactores para las Enzimas

Algunos coenzimas actan como portadores transitorios de tomos o grupos funcionales especficos

Vitaminas, cofactores o precursores de enzimas

HALOENZIMA

Hemoglobina con su coenzima o grupo HEMO

Clasificacin y Nomenclatura

Sufijo asa, clasificacin 1961 Comisin de Enzimas de la Unin Internacional de Bioqumica

Descripcin de la Clasificacin
Deshidrogenasas
O2 acta como receptor

OXIDORREDUCTASAS Cantidad en el grupo: 187

Oxidasas

Oxigenasas

O2 es incorporado parcialmente a las molculas

Catalizan reacciones Redox fisiolgicas.

Peroxidasas

H2O2 sirve como receptor

Transaminasa Quinasas

TRANSFERASAS Cantidad en el grupo: 171

Transcetilasas

Catalizan la transferencia de grupos de un substrato a otro como metilo, amino, alquilo y acilo y de grupos que contienen fosforo y azufre, O2 es incorporado parcialmente a las molculas.

Fosfatasas

HIDROLASAS Cantidad en el grupo: 181

Peptidasas Amidasas Proteasas Sacarasas

Hidrolisis de gran variedad de compuestos por medio del agua

Fumarasa Catalizan la Descarboxilasa supresin de grupos qumicos sin hidrolisis. Actan sobre enlaces C-C, CAldolasa O, C-N, C-S

LIASAS
Cantidad en el grupo: 88

Racemasas

Epimerasas

Catalizan la inversin de la configuracin alrededor del tomo de carbono asimtrico en un sustrato con nico (racemasas) o ms (epimerasas) centros de asimetra

ISOMERASAS Cantidad en el grupo: 37, catalizan reacciones de isomeracin

Cis-trans isomerasa Transforma un ismero de un compuesto qumico en otro. Puede, por ejemplo, transformar una molcula de glucosa en una de galactosa.

Ceto-isomerasa intramoleculares

Mutasas o transferasas intramoleculares

Pueden facilitar el traspaso de grupos acilo, o fosforilo de una parte a otra de la molcula, como la lisolecitina acil mutasa que transforma la 2 lisolecitina en 3 lisolecitina, etc

C-O C-S C-N

LIGASAS Cantidad en el grupo: 41

C-C Esteres fosfricos

N-Fe, Zn, Cu, Mg, K, Ni, Mo, Se

Catalizan la unin entre dos molculas, dando lugar a un nuevo enlace qumico; generalmente, sucede con la hidrlisis de un compuesto de alta energa, como el ATP, con rotura de un enlace pirofosfato del ATP, generalmente acta sobre compuestos de alta energa.

Como funcionan las Enzimas

Substrato: es el compuestos o tipo de substancia sobre el cual acta la enzima. Sitio activo: bolsa enzimtica, sobre la cual se acopla el substrato.

Especificidad de las Enzimas

Especificidad (capacidad de un enzima de distinguir entre dos substratos competitivos)
Especificidad de Especificidad grupo: una serie de absoluta de grupo: compuestos pueden atacan solamente un servir como sustratos, sustrato, ejemplo solo ejemplo las pueden atacar al aldohexosas, son glucosa y no a los fosforiladas por la dems monosacridos quinasa

Especificidad relativa de grupo: puede atracar a series homologas de aldohexosas

Estereo especificidad: ataca ismeros DyL

Inhibicin Enzimtica
Son molculas que se unen a enzimas y disminuyen su actividad. La unin de un inhibidor puede impedir la entrada del sustrato al sitio activo de la enzima y/u obstaculizar que la enzima catalice su reaccin correspondiente, la unin del inhibidor puede ser reversible o irreversible.

1.

Irreversibles reaccionan con la enzima de forma covalente y modifican su estructura qumica a nivel de residuos esenciales de aminocidos necesarios para la actividad enzimtica. diferentes tipos de inhibiciones, dependiendo de si el inhibidor se une a la enzima, al complejo enzima-sustrato o a ambos.

2. Reversibles se unen a la enzima de forma no covalente, dando lugar a

Inhibicin de las Enzimas

1.Inhibicin competitiva 2.Inhibicin no competitiva

AUMENTO DE TEMPERATURA

CAMBIO DE pH

ADICION DE PRECIPITANTES DE PROTEINAS

ADICION DE AGENTE OXIDANTE QUE ATACA LOS GRUPOS SH

Inhibicin competitiva
Compiten directamente con el substrato, por el lugar activo en la superficie en la enzima.

Inhibicin no competitiva
Son inhibidores potentes que se combinan, con grupo en el lugar activo de la enzima y no pueden ser desplazados por un substrato adicional.

Cintica y Actividad Enzimtica

La velocidad de la reaccin catalizada por las enzimas. El estudio de las velocidades de reaccin y la forma en que cambia su respuesta, en cuanto a parmetros experimentales se llama Cintica. La actividad enzimtica se ve afectada por muchos factores, entre ellos se encuentra:
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Concentracin de substrato Sitio activo Efecto de la enzima Efecto del pH Efecto de la temperatura Efecto de los productos terminales Efecto de los inhibidores

Medicin de la Actividad Enzimtica

Medicin del Cambio qumico catalizado por la enzima Tomar muestras en intervalos breves del substrato Se determina la Actividad Enzimtica

Incubar substrato, con enzima

1. Concentracin de Substrato (S)

La concentracin del substrato cambia durante el transcurso de

una reaccin, a medida que este se convierte en producto. Medir la (Vo) de la reaccin, cuando la (S) es mayor que la concentracin de la Enzima
1. Cuando el tiempo de reaccin es corto la disminucin en la (S) es insignificante 2. A baja (S) la Vo inicial aumenta linealmente con el aumento (S) 3. A mayor (S) de substrato, hay incrementos pequeos de Vo, y pequeos

incrementos de (S) 4. Finalmente los incrementos de (S), Vo son casi equivalente y es ah donde se forma una meseta llamada Vmax

La Vmax se alcanza cuando todos los centros activos estn ocupados con sustrato

Ecuacin de Michaelis-Mente, ecuacin de velocidad catalizada enzimticamente con un sustrato.

A baja (S), Km > (S), por lo que la (S) en la ecuacin de Michaelis-Menten es insignificante y la ecuacin queda: Vo = Vmax(S)/Km, y Vo tiene una dependencia lineal con respecto a (S).
A alta (S), donde (S) > Km, Km en la ecuacin de MichaelisMenten es insignificante y la ecuacin queda: Vo = Vmax, de acuerdo a la meseta formada a (S) elevada.

Dependencia de la velocidad inicial con respecto a la concentracin de sustrato en la que se muestran los parmetros cinticos que definen los limites de la curva a (S) alta y baja.

La ecuacin de MichaelisMenten tienen una dependencia de la Vo con respecto a (S).

2. Sitio Activo
En la especificidad de accin de muchas enzimas, y solo una pequea porcin de la protena enzimtica interviene en su actividad caracterstica. El sitio activo esta formado de una serie de aminocidos especficos . Por lo cual al llevarse a el complejo enzima-substrato se debe acoplar de manera completa, toda la porcin de la protena enzimtica.

3. Efecto de la Enzima
Cuando se emplea una enzima purificada, el ritmo de reaccin es proporcional a la concentracin de la enzima, por lo cual concentracin de substrato debe conservarse constante y hallarse siempre en exceso de la necesaria para combinarse con la enzima.

4. Efecto del pH
La concentracin de ion hidrogeno, en la mezcla ejerce una influencia sobre el ritmo de la actividad enzimtica. La intensidad mxima ocurre en el pH optimo, si el pH sigue aumentado la velocidad disminuye. El pH optimo representa las condiciones en que las cargas sobre la enzima, y el substrato permiten la accin cataltica mas eficaz. Los grandes cambios de pH, con adicin de cidos o bases pueden desnaturalizar o inactivar por completo la enzima.

5. Efecto de la temperatura
La rapidez de la mayor parte de las reacciones aumenta al doble o al triple por cada 10 C de temperatura., y esta debe ir entre 10 y 50 C, la temperatura optima de las enzimas en el cuerpo es de 37 C, arriba de 50 C se desnaturaliza la enzima, y la protena enzimtica se coagula, y la actividad enzimtica desaparece. Q10 es el cambio de intensidad de la actividad enzimtica, para la mayora de las enzimas es 1.5 y 3.0, es por cada 10 C.

6. Efecto de los productos terminales

Los productos finales de una reaccin enzimtica tienen un efecto sobre el ritmo de la actividad enzimtica, Si se deja aumentar su concentracin sin alejarlos, disminuirn el ritmo de la reaccin. Ya que algunos productos son de tipo acido o alcalino, y afectan el pH y por lo tanto se disminuye el ritmo de la reaccin. Esto se llama retroalimentacin qumica con inhibicin o disminucin del ritmo denominado retroalimentacin negativa.

El producto Z inhibe la reaccin de A, B

7. Efecto de los Inhibidores

Ciertas molculas pueden inhibir la accin cataltica de un enzima: son los inhibidores. Estos inhibidores bien pueden ocupar temporalmente el centro activo por semejanza estructural con el sustrato original (inhibidor competitivo) o bien alteran la conformacin espacial del enzima, impidiendo su unin al sustrato (inhibidor no competitivo).

Enzimas Reguladoras
Tienen una actividad cataltica mayor o menor en respuesta a seales enviadas en cada secuencia metablica, para regulacin de la velocidad enzimtica, la cual se ajusta constantemente para adaptarse a los cambios en las necesidades de la clula con respecto a la energa y a las biomolculas requeridas durante el crecimiento celular y e la reparacin de lesiones.
1. Enzimas alostricas 2. Enzimas reguladas

con

modificacin

covalente

reversible

Clasificacin de Enzimas Reguladoras

Alostricas
Unin reversible no covalente de un

Enzimas reguladas covalentes reversibles

Algn

metabolito regulador denominado modulador.

1.

Homotropicas: El sustrato acta, tambin como modulador. Estas enzimas contienen dos o ms centros de unin para el sustrato. La modulacin depender de cuntos sean los centros del sustrato que estn ocupados. Heterotropicas: Son estimuladas o inhibidas por un modulador diferente a la del sustrato.

2.

aminocido de la enzima se une covalentemente a algn grupo qumico y de esta forma se activa o se inactiva la enzima. El grupo que ms frecuentemente interviene en este tipo de regulacin es el grupo fosfato (Pi) y los aminocidos que normalmente intervienen son la serina y la treonina.

Enzima regulador aspartato transcarbamoilasa. Los polipptidos catliticos de cada agrupamiento se muestran en tono azul y purpura. Los sitios de fijacin de los moduladores alostricos se encuentran en blanco y rojo. La fijacin del modulador produce grandes cambios en la conformacin y actividad de enzima.

Obtencin y Produccin de Enzimas

Bacterias Hongos Plantas Animales

rganos Tejido Clulas

88% Bacillus Aspergillus 4% plantas 8% animales

Extermfilos (Termfilos 70 C) Halfilos (0.5 M)

SINTETIZAR ENZIMAS EN GRANDES FERMENTADORES

DESNATURALIZACIN Y SALINIDAD ELEVADA

1. HIPEREXPRESIN DEL GEN QUE LA CODIFICA 2. MUTAGENESIS

Purificacin de enzimas mediante manipulacin y cromatografa de afinidad. 1. Se asla y se modifica el gen de la protena. 2. Se expresa el gen recombinante en una bacteria apropiada 3. Se prepara un soporte gelificado con un grupo qumico, que se una a la protena recombinante 4. Se cultiva la bacteria recombinante de forma que exprese la protena 5. Se aplica un extracto acelular de la bacteria a la columna: la protena recombinante se une al gel y las dems no 6. Se aplica una solucin que contenga un compuesto qumico o ion que desplace a la protena del gel

Inmovilizacin de Enzimas

Aplicaciones de la Tecnologa Enzimtica

INDUSTRIA
CLINICA CLINICA

ENZIMA
Amilasa Fosfatasa acida

UTILIDAD
Elevada en pancreatitis aguda Elevada en cncer de prstata

FARMACEUTICA FARMACEUTICA
TEXTIL

Hialuronidasa Asparraginasa
Amilasas

Infartos de miocardio Leucemia y tumores

Eliminan el almidn usado para reforzar los hilos Elimina manchas de huevo, sangre, a pH alcalino y baja temperatura

LAVANDERIA

Proteasa

Aplicaciones de la Tecnologa Enzimtica

INDUSTRIA
TENERIAS PAPELERA ALIMENTOS

ENZIMA
Lipasas Hemicelulasas, Celulasas, Oxidorreductasas Endoproteasas

UTILIDAD
Hidroliza las grasas, ahorrando tensoactivos Reforzar el blanqueo del papel

Aumentan el contenido de aminocidos, reforzar el sabor de sopas y caldos

Aumentan el rendimiento de extraccin de aceites de oliva. Hidrolizan steres y triglicridos Procesado de azucares, licores ricos en fructuosa

ACEITES Y GRASAS

Peptolticas , Lipasas

ALCOHOL

Isomerasas

Bibliografa
1.

Donald J. Burton et al., QUIMICA ORGANICA Y BIOQUIMICA, Editorial McGraw-Hill, Traduccin de la primera edicin en ingles 1997, pp. 302 a 321

2.

Direccin General de Educacin Media Superior y Superior, BIOQUIMICA, Editorial, Telebachillerato, Edicin 2004, pp. 99 a 109
Eric E. Conn et al., BIOQUIMICA FUNDAMENTAL, Limusa 1965, Capitulo 7 Francisco C. Rodrguez et al., BIOTECNOLOGIA AMBIENTAL, Editorial Tebar 2005, pp. 301 a 317 Leningher et al., PRINCIPIOS DE BIOQUIMICA, Omega 2000, pp. 198 a 235

3. 4.

5.