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Definicin: Ciencia que estudia la biologa de los microorganismos: Morfologa Estructura Fisiologa Gentica Ecologa Microbiana
Microbiologa - Especialidades
Bacteriologa:
Micologa:
Virologa:
Microbiologa - Especialidades
Protozoologa:
Inmunologa:
Clasificacin de la Microbiologa
Microbiologa Acutica. Microbiologa del Suelo o Agrcola. Microbiologa de los Alimentos. Microbiologa Clnica o Humana. Microbiologa Sanitaria. Microbiologa Industrial. Biotecnologa.
aos. Los Estromatolitos: mantos microbianos.2,5003,000 millones de aos. Procariotas filamentosos fottrofos y anoxignicos.
Plantae. Erns H. Haeckel (1866): Arbol Filogentico. Introdujo el trmino Monera y cre un nuevo Reino: Protista. Edouard Chatn (1932): Protistas:
Inferiores: Bacterias
Animalia
Plantae
Fungi
Protista
Procariota
Tres Dominios
ARCHAE
BACTERIA Clulas procariotas con ARNr eubacteriano y lpidos de membrana compuesta por diacil diesteres de glicerol
EUCARYA
Membrana compuesta por lpidos isopprenoide del tipo dieter de diglicerol y ARNr arqueobacteri ano
Organizacin eucaritica con lpidos de membrana formados por acil y esteres de glicerol ARNr eucaritico
HISTORIA DE LA MICROBIOLOGIA
Enfermedad. Varrn: (S. IIa.c)Principio de contagio por seres invisibles. Roger Bacon: (S.XIII)Postul que enfermedades eran producidas por seres invisibles vivientes. Fracastorius (1546): Habl sobre semillas de la enfermedad: a) Contagio directo; b) C. por fomites; c) C. a Distancia.
celdillas pequeas en rodaja de corcho (Clulas). Inicio de la Teora celular. Anthony van Leeuwenhoek: Fabric microscopio compuesto; imagen aumentada 300 veces. Observ bacterias (bastn, cocos y espirilos), giardias, hongos, levaduras y espermatozoides.
Leeuwenhoek: 1673 y 1732 (cartas a Royal Society de Londres con la descripcin de los animlculos.
Historia de la Microbiologia
Teora de la Generacin espontnea:-
Defensores: Aristteles (384-322 a.c); J. Needham (1749); Pouchet (1859). Opositores: F. Redi (1626-1697); L. Spallanzani (1765-1776); Rudolf Virchow, afirm que toda clula viva surgan de clulas vivas preexistentes (Biognesis). L. Pasteur (1859) desterr esta teora en forma definitiva. J. Tyndal desarroll la esterilizacin fraccionada (Tindalizacin)
Luis Pasteur
convertan en alcohol en ausencia de aire (Fermentacin). Desarroll proceso de pasteurizacin. J. Schoenlein (1839), descubrio el agente etiolgico del favo. C. Davaine (1863-1868) encontr bacilos en la sangre de vacas con carbunco. L. Pasteur (1860-1880): Estudi carbunco, clera aviar, porcino la rabia y otras. R. Koch (1843-1910). Aisl el carbunco y el bacilo tuberculoso en cultivos puros. Demostr la teora Microbiana de la enfermedad.
Postulados de Koch
El m.o debe estar presente en todas las
enfermedades. El m.o se debe aislar en cultivo puro. El m.o aislado e inoculado en un animal receptivo debe reproducir la enfermedad. El m.o. debe ser reaislado
vapores de fenol y bicloruro de mercurio. P. Ehrlich (1909). Desarroll el Salvarsan efectivo para Sifilis. G. Domagk: Rojo de prontosilo para los neumococos hemolticos. A. Fleming (1929). Descubre la penicilina. Chain y Florey industrializaron la penicilina.
Desarrollo de la Inmunologa
Chinos (S.XI a.c) Inmunizaban contra la viruela. E. Jenner (1796) 1. Tcnica de Inmunizacin
por escarificacin de la viruela. L. Pasteur desarroll la 1. Vacuna a germen atenuado (Vacuna). 1880 L. Pasteur inmuniza contra el clera aviar, 1881 carbunco y 1885 contra la rabia.
Desarrollo de la Inmunologa
Ilich Metchnokoff (1983). Enuncia Teora de la
Fagocitosis. Behring y Kitasato prepararon las primeras antitoxinas contra ttano y difteria. Calmette y Guerin (1922) prepararon la vacuna contra la tuberculosis. P. Medawar estudi el fenmeno de la Autotolerancia inmunolgica.
relacin gen enzima. En 1944 O. Avery, C. Mac Leod y M. McCarty establecieron qie el DNA era el material gentico. En 1946 J. Lederberg y E. Tatum describieron la Conjugacin bacteriana. En 1953 J. Watson y F. Crick, propusieron modelo de la estructura y la replicacin del DNA. 1960 Paul Berg demostr que fragmentos de DNA humano o animal se podan adherirse a DNA bacteriano formando un hbrido (DNA recombinante). Esta tcnologa se denomin Ingeniera Gentica o Tecnologa del DNA recombinante.
.- Beijerinck y Winogradsky: demostraron que bacterias contribuyen al reciclaje de elementos vitales entre el suelo y la atmsfera. Inicio de la Ecologa microbiana. .-Las bacterias y hongos devuelven el dioxido de carbono a la atmsfera por descomposicin de la materia orgnica. .-El nitrgeno atmosfrico es convertido por bacterias a formas asimilables para las plantas y animales.
residuales (heces humanas), aguas de desecho, residuos industriales y aguas superficiales de arrastre.
Las plantas de tratamiento de aguas residuales
Biorremediacin
En 1988 se comienza a utilizar microorganismos para
subterrneos.
Se pueden eliminar derrames de sustancias qumicas,
Control de Plagas
Los insectos pueden causar graves daos en las cosechas. Bacillus thuringiensis es usado para controlar plagas como
3) Vibrios
Tcnicas Microbiolgicas
A) B) C) D) E) F) G)
Microscopio: Instrumento que sirve para visualizar organismos microscpicos. El microscopio se invento, hacia 1610, por Galileo, segn los italianos, o por Jansen, en opinin de los holandeses. Clases:
M. de campo claro. M. de Campo Oscuro. M. de Contraste de Fase. M. de Inmunofluorescencia. M. Confocal. M. Acstico de Barrido M. Electrnico: Transmisin, de Barrido
microscopio sufri diversos adelantos mecnicos que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso aunque no se desarrollaron mejoras pticas. Las mejoras mas importantes de la ptica surgieron en 1877 cuando Abbe publica su teora del microscopio y por encargo de Carl Zeiss mejora la microscopa de inmersin sustituyendo el agua por aceite de cedro lo que permite obtener aumentos de 2000
Tipos de Microscopios
(T.E.M.) fu el primer tipo de microscopio electrnico desarrollado este utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra consiguiendo aumentos de 100.000 X. Fue desarrollada por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrnico de barrido (SEM).
observacin de muestra en cortes ultrafinos. Un TEM dirige el haz de electrones hacia el objeto que se desea aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del espcimen. Para utilizar un TEM debe cortarse la muestra en capas finas, no mayores de un par de miles de ngstroms. Se coloca una placa fotogrfica o una pantalla fluorescente detrs del objeto para registrar la imagen aumentada. Los microscopios electrnicos de transmisin pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces. MEB Un microscopio electrnico de barrido crea una imagen ampliada de la superficie de un objeto. No es necesario cortar el objeto en capas para observarlo con un SEM, sino que puede colocarse en el microscopio con muy pocos preparativos. El SEM explora la superficie de la imagen punto por punto, al contrario que el TEM, que examina una gran parte de la muestra cada vez.
Tcnicas Microbiolgicas
Colorantes: Sustancias que permiten teir las clulas microbianas. Clases: a) Acidos: Eosina b) Bsicos: Azul de Metileno, Violeta de genciana. c) Neutros: Wright, Giemsa.
Tcnicas Microbiolgicas
Mtodos de Coloracin: A) Col. Simple: Azul de metileno. B) Col. Doble: - Colorante Primario ( Cristal Violeta) y Colorante Secundario o de contraste. Ejemplo: Tcnica de Gram y Tcnica de Ziehl Neelsen.
Tcnicas Microbiolgicas
Medios de Cultivo: Sustancias nutritivas que permiten el crecimiento y desarrollo de los microorganismos en condiciones adecuadas. Clases de Medios de Cultivo: 1. Por su Origen: a) Animal (Leche, huevos, etc.) y b) Vegetal: Papa, tomate, etc).
Medios de Cultivo
2. Por su Consistencia: a) Lquido o Caldo (C. nutriente). b) Slido: Presenta agar (Agar Nutriente. c) Semislido: Presenta 0.5% de Agar (Agar cepa). 3. Por su Utilidad: a) Medios comunes: Agar nutriente b) Medios Especiales: 1) Medios Enriquecidos: Agar sangre, Agar chocolate.
Medios de Cultivo
2)Medios Selectivos: Presentan sustancia inhibidora (Agar Chapman) 3) M. Selectivo Diferencial: Presentan sustancia inhibidora + Sustrato + Indicador de pH (Agar Mac Conkey) 4) M. Diferenciales: Se usan para estudiar caractersticas bioqumicas o fisiolgicas (C. peptona, Agar TSI, LIA etc).
Agar Sangre
La Clula Bacteriana
Estructura Bacteriana
Pared Celular
Peptidoglicano, Mucopeptido o Mureina
Esta macromolcula esta formada por una secuencia alternante de N-acetilglucosamina (NAG) y el cido N-acetilmurmico (NAM) unidos mediante enlaces -1,4. El NAM se enlaza con una cadena de tetraptidos entre los que se encuentran la L-alanina, cido D-glutmico, cido m-diaminopimlico o la L-lisina o D-alanina.
Continuacin
Funciones del Peptidoglicano 1. Gran rigidez: contrarresta las fuerzas osmticas. Se debe a: a) Grado de entrecruzamiento b) Enlace B 1-4 es muy compacto y ms estable c) Alternancia en el tetrapptido de aminocidos tipo D y L. 2. Flexibilidad Condiciona forma celular
La ME me encuentra unida al PG a travs de distintos componentes y tipos de enlaces: Enlaces inicos: mediado por cationes divalentes entre protenas de la ME y el PG. Enlaces Hidrfobos: entre fosfolpidos y protenas de la ME y el PG Enlaces covalentes: entre lipoproteinas y el PG
Composicin y estructura de la ME
1.
2. a)
b)
c)
Fosfolpidos: localizado en la lmina interna de la m.ext.. Es similar a la m.c, con predominio de fosfatidil-etanolamina. Lipopolisacrido (LPS): Endotoxina. Glucolpido complejo compuesto de tres regiones: Lpido A: porcin proximal, hidrofbico. Porcin txica. Oligosacrido medular (Core o nucleo): KDO ms Lglicero-manoheptosa (hep) zona con carga negativa. Cadena lateral especfica:`polisacrido repetitivo que se proyecta a la parte exterior. Es el Antgeno somtico O
4. Se une a cationes divalentes (Mg++ o Zn++) lo que contribuye a la estabilidad de la M.e. 5. Endotoxina: - Pirogenecidad - Hipotensin - Necrosis de tejidos - Shock letal por fallo cardiaco - Activa el complemento - Mejora la actividad de los fagocitos 6. El Ag.somtico O condiciona la virulencia de las bacterias
3. Lipoproteina de Braun (LPP): Muy abundante en la M.E. Es responsable de la unin covalente entre la ME y el PG. 4. Protenas de la ME: Estn intercaladas y participan en la estabilizacin de la ME. PORINAS: Protenas de 35 kDa se agregar formando trmeros con canales interiores y que atraviezan la m.e Funcin: permitir el paso de sustancias, proteccin contra sales biliares, receptores de fagos.
Propiedades de la M. externa
Acta como tamiz molecular: protege contra muchos Antb, colorantes, c. Biliares, enzimas etc. 2. Mantienen el grado de humedad, adhesividad y carga elctrica. 3. Aqu se fijan los componentes del complemento 4. Punto de anclaje del anillo externo (L) del corpsculo basal de los flagelos.
1.
Compartimiento acuoso que baa al PG entre la ME y la M. citoplasmtica. Incluye: 1. RNAasa y fosfatasa 2. Penicilinasas 3. Protenas de transporte de nutrientes 4. Protenas de unin a estmulos qumicos. Funcin: Osmorregulacin
Acidos Teicoicos
Acidos teicoico: son cadenas de molculas de glicerina
o ribitol esterificadas entre s por puentes fosfato, portan una fuerte carga negativa (probablemente sirvan para "secuestrar" cationes). Los cidos teicoicos se unen probablemente a la murena a travs del fosfato formando una amida. Son muy antignicos. Los grupos sustitutivos de los polioles incluyen Dalanina (como ster), N-acetilglucosamina, Nacetilgalactosamina, los sustituyentes son caractersticos de las especies bacterianas.
(A) Acido Ribitol- teicoico con unidades repetitivas unidas por enlaces 1,5-fosfo dister de D-ribitol y ster de D-alanina en posicin 2 y sustituyentes glicosidcos en posicin 4 (R= Nacetilglucosamina en S. aureus o alfa-glucosil en B. subtilis .
de N-acetilglucosamina. El peptidoglicano se halla unido al arabinogalactano. En la porcin ms distal y externa de los arabinogalactanos se hallan fijados los cidos miclicos. Los glucolpidos estn formados por micolatos de trealosa, sulfolpidos, micsidos, que se encuentran asociados a los cidos miclicos y se ubican perifricamente en la pared. Los micolatos de trealosa, llamados factores de cordn y sulfolpidos se encuentran principalmente en las cepas de Mycobacterias ms virulentas.
halla anclado en la membrana citoplasmtica; es considerado el equivalente mycobacteriano del lipopolisacrido de las Gram negativas debido a que provoca una respuesta antimicrobiana en macrfagos. Adems, el LAM tambin podra servir como poro para el paso de los nutrientes a travs de la pared celular. En la pared celular tambin se encuentran protenas inmunoreactivas que son utilizadas con fines diagnsticos (PPD).
Membrana Celular
1. 2. 3. 4. 5. 6.
Bicapa de fosfolpidos) Lado externo de la membrana Lado interno de la membrana Protena intrnseca de la membrana Protena canal inico de la membrana Glicoprotena
bicapa 8. Molculas de colesterol 9.Cadenas de carbohidratos 10. Glicolpidos 11. Regin polar (hidroflica) de la molcula de fosfolpido 12. Regin hidrofbica de la molcula de fosfolpido
biosntesis y transduccin de energa. es la barrera osmtica de la clula es sede de los sistemas de transporte activo y de las permeasas especficas en la membrana (o junto a ella) se encuentran las enzimas y componentes del transporte de electrones y fosforilacin oxidativa (recordemos que en eucariotas las mismas estn en las mitocondrias) all se realiza la sntesis de componentes de la pared celular y de las cpsulas. lugar de excrecin de exoenzimas. sede del centro de replicacin del ADN punto de anclaje de los flagelos.
Proteinas transportadoras
Cpsula
Capa externa, de naturaleza polisacrida en muchas bacterias
como Streptococcus pneumoniae, Xantomonas. En Bacillus la cpsula es de naturaleza polipeptdica (Ac. poliglutmico).
Flagelos
Apndices de gran tamao.
Naturaleza proteica (Flagelina) Motilidad
de los flagelos) vara entre especies, y reviste inters en la determinacin taxonmica: Monotricas: bacterias con un flagelo polar. por ejemplo Vibrio cholerae. lofotricas.penacho e flagelos en un polo por ejemplo, en Helicobacter pylori hay de 6 a 8 flagelos. Dos penachos de flagelos, uno en cada polo: bacterias anfitricas. Flagelos repartidos por toda la superficie: bacterias peritricas. (Por ejemplo, Escherichia coli posee unos 10 flagelos, mientras que Proteus mirabilis posee cientos, dando aspecto muy denso a la disposicin de stos).
Endosporas Bacterianas
Espora de Bacillus megaterium . Cubierta de espora (SC), extremo germinativo (G) capa externa del cortex: (OCL) cortex: (Cx) pared celular (GCW), membrana plasmtica (PM), y nucleoid (n)
Proceso de Esporulacin
una divisin asimtrica (1), durante la cual el futuro protoplasto de la espora recibe el material nuclear correspondiente. A diferencia de una divisin comn, el estrangulamiento del protoplasto de la clula materna no es seguido por el de la pared celular entre los dos protoplastos hijos (2). a posteriori el protoplasto de la futura espora es rodeado por la membrana citoplasmtica de la otra clula resultante de la divisin, siendo finalmente englobada por la misma (ver esquema).
Esporulacin
rodeada por dos membranas citoplasmticas que intervendrn en la fase final de la espora sintetizando la membrana del protoplasto de la espora sintetiza hacia el exterior la pared celular la membrana del protoplasto procedente de la otra clula sintetiza hacia el interior el cortex de la espora, compuesto de un glucopptido similar a la murena pero con mayor cantidad de enlaces transversales. esta otra clula forma en algunos casos el exosporio, que rodea a la espora como una envoltura suelta.
Propiedades de la Espora
no presentan actividad metablica gran resistencia al efecto del calor gran resistencia al efecto de las radiaciones gran resistencia al efecto de los productos qumicos La resistencia a los efectos del calor se atribuye al bajo contenido de agua (aprox. 15%) y al contenido de cido dipicolnico. La resistencia al efecto de las radiaciones se atribuye a la presencia de puentes disulfuro, resultante de la presencia de cistena en las protenas de la cubierta externa. La resistencia al efecto de los productos qumicos debe atribuirse a la impermeabilidad que presenta en esos casos la cubierta de la espora.
Fimbrias
Son filamentos delgados,
huecos, rectos, localizados en la superficie celular. Naturaleza proteica: Pilina. Funcin: a) Adhesina: Fijacin a receptores especficos. b) Sexual: Durante la Conjugacin
Respiracin Bacteriana
a)
b)
Proceso mediante el cual un compuesto se oxida utilizando como aceptor de electrones al oxgeno (R. aerobia), o a compuestos inorgnicos como SO4-, H2S, NO3-,fumarato etc.(R. anaerobia). Objetivo: Obtencin de energa. Mecanismo de obtencin de energa: Fosforilacin a nivel de sustrato (fermentacin). Fosforilacin Oxidativa: Cadena Transportadora de electrones: NADH, Quinonas, Citocromos, etc.
Respiracin Bacteriana
Bact. Aerobias estrictas: Mycobacterium tuberculosis. b) Bac. Microaerfilas: (5% de O2, 5-10% CO2, 85% H2). Helycobacter pylori. c) Bac. Anaerobias Facultativas: Escherichia coli, Staphylococcus sp. d) Bac. Anaerobias estrictas: carecen de peroxidasas, catalasas y SOD. Cl. tetani, Cl. botulinum etc.
a)
Nutricin Bacteriana
Las bacterias requieren nutrientes para su crecimiento y
multiplicacin. Macronutrientes: Se requieren en grandes cantidades: Azcares, Aminocidos, Ac. Grasos, cidos orgnicos, bases nitrogenadas, compuestos aromticos, P, S, PO3K, Mg, Ca. Micronutrientes: se requieren en pequeas cantidades: Co, Zn, Mo, Cu, Mn, etc. Factores de Crecimiento: Vitaminas y aminocidos
Nutricin Bacteriana
a) b)
Tipos de Nutricin: Fotoauttrofos: Usan Luz y CO2. Quimioauttrofos: Oxidan compuestos inorgnicos como fuente de energa y CO2. c) Fotohetertrofos: usan luz como fuente de energa y compuestos orgnicos. d) Quimiohetertrofos: usan compuestos orgnicos para obtener energa y carbono.
Crecimiento Bacteriano
Definicin: Aumento en el n de clulas en una
poblacin. La bacterias se multiplican por fisin binaria. Tiempo de Generacin: Tiempo necesario para que la bacteria se divida en dos clulas Ejem: E. coli: 20, S. aureus 25 y M. tuberculosis 18 horas.
Curva de Crecimiento
A)
B) C) D)
Fase Lag o de Retraso. Fase Exponencial o Log: Fase Estacionaria: Fase de Muerte:
D
B A
Crecimiento Bacteriano
Fase Lag o letargo: las bacterias se estn adaptando a las condiciones ambientales para iniciar su crecimiento, lo que requiere de la sntesis de nuevas enzimas y protenas especficas.
Exponencial o Fase Log: las bacterias se dividen ilimitadamente, porque las condiciones ambientales son ptimas y no existe ningn tipo de limitacin para su desarrollo. Estacionaria: el crecimiento experimenta una reduccin por el agotamiento de los nutrientes y por la acumulacin de desechos metablicos producidos por las propias bacterias, que les resultan letales. Finalmente el aumento del nmero de individuos se detiene por completo, alcanzando la fase estacionaria mxima, y luego comienza a disminuir. Declinacin o muerte: la mortalidad de la poblacin aumenta sostenidamente, lo que determina su extincin.
destruir al microorganismo. Esterilizacin: Destruye toda forma de vida. Desinfeccin: Destruye o disminuye a microorganismos vegetativos. Desinfectante: Sustancia que inhibe o destruye a los m.o.
Control de Microorganismos
Asepsia: Procedimnientos usados para prevenir
el desarrollo de m.o en un medio determinado. Antisptico: Sustancia que reduce la cantidad de m.o patgenos que contaminan la superficie corporal. Antimicrobianos: Sustancias producidas por m.o o qumicas capaces de inhibir o destruir a los m.o.