PASOS DE LA TCNICA HISTOLGICA

OBTENCIN DE MUESTRAS FIJACIN DESHIDRATACIN Y ACLARAMIENTO INCLUSIN CORTE MONTAJE TINCIN DE LOS CORTES

 OBTENCIN DE MUESTRAS
Todas las muestras de tejido, ya sea obtenidas de materiales quirrgicos,

necropsias, biopsias deben ser procesadas

adecuadamente para obtener buenos cortes histolgicos.

 OBTENCIN DE MUESTRAS

Se debe obtener toda la informacin posible del material a procesar.

 OBTENCIN DE MUESTRAS

En caso de ser necesario se debe realizar un examen y descripcin preliminar de los materiales y su adecuacin para un correcto procesamiento.

 OBTENCIN DE MUESTRAS

 FIJACIN
Tratamiento del tejido con sustancias qumicas que no solo retardan las alteraciones hsticas posteriores a la muerte, sino que conservan la configuracin normal del tejido.

 FIJACIN

Fijador:
Sustancia que detiene en forma rpida los procesos de autlisis y que, al mismo tiempo, conserva los tejidos, en lo posible, en el estado en que se encontraban en la vida.

 FIJACIN
TIPOS DE FIJADORES

Fsicos:
Desecacin: Extendidos, lquidos de punciones. Calor seco: Bacteriologa. Calor hmedo: Microqumica, Zoologa.

Fro: No es una verdadera fijacin. Detiene los

procesos de autlisis y necrosis, pero cuando deja de actuar los mismos se reanudan.

 FIJACIN
TIPOS DE FIJADORES

Qumicos:
Aldehdos (no precipitan protenas y no contrae estructuras) .
Mercuriales (precipitan protenas y txico por sus vapores). Alcoholes (precipitan protenas). Agentes oxidantes (precipitan protenas y txico por sus vapores). Picratos (precipitan protenas).

 FIJACIN
TIPOS DE FIJADORES

Qumicos:
Aldehdos (formaldehido/glutaraldehido): Son los ms utilizados. Los tejidos son fijados por uniones cruzadas en las protenas, al reaccionar con los

grupos amino.
La Formalina (formaldehido al 40%), se utiliza normalmente al 10%, en una solucin bufferada.

 FIJACIN

 FIJACIN

No debe olvidarse que:

Un defecto de fijacin no puede ser subsanado. Es intil hacer un estudio histolgico de un material mal fijado.

 DESHIDRATACIN
Se obtiene por medio de un reactivo anhidro pero vido de agua:

Alcohol Etlico. Alcohol Isoproplico. Alcohol Butlico. Acetona

 ACLARADO
Se debe embeber la pieza con una sustancia miscible con el alcohol y la parafina:

Xileno. Tolueno. Benceno.

 INCLUSIN
La parafina penetra en los vasos, en los espacios intercelulares y tambin en el interior de las clulas embebiendo el tejido y haciendo ms fcil la obtencin de cortes con el micrtomo.

Procesador Automtico

Procesador Automtico

CONFECCIN DEL TACO

Obtencin del bloque de parafina de forma regular, para ser cortado con el micrtomo.

 CONFECCIN DEL TACO

 CORTE
Micrtomo Rotativo.

Micrtomo de Deslizamiento.
Micrtomo de Congelacin.

Cristato.

Micrtomo Rotativo.

Micrtomo Rotativo.

Micrtomo Rotativo.

Cristato

Cristato

 EXTENSIN
Utilizar portaobjetos limpios y preparados con el adhesivo adecuado. Se realiza en agua tibia (38oC).

Precaucin: el preparado debe quedar bien extendido y sin pliegues.

Rotular.

 EXTENSIN
Luego de escurrir el exceso de agua llevar a estufa (60 C) no ms de dos horas.

 TINCIN DE LOS CORTES

Los colorantes pueden agruparse en tres clases principales: Colorantes que diferencian los componentes bsicos y cidos de la clula (hematoxilina y eosina). Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular. Sales metlicas que se precipitan en los tejidos y forman depsitos de metales en ellos.

Colorantes empleados con mayor frecuencia en histologa:

HEMATOXILINA
Acta como un colorante BSICO que se asocia y tie componentes CIDOS de la clula como estructuras aninicas (que posean fosfatos, sulfatos y/o carboxilos ionizados)

EOSINA
Colorante CIDO (predomina densidad de carga negativa), que se asocia y colorea estructuras catinicas (componentes BASICOS) del citoplasma y matriz extracelular
- Filamentos citoplasmticos. - Componentes membranosos intracelulares. - Fibras extracelulares (por sus aminocidos bsicos ionizados). Color: rosado

- Heterocromatina y nuclolos - ARN ribosomal, - Matriz extracelular (por los sulfatos de los GAGs). Color: azul o violeta

 TINCIN DE LOS CORTES

La reaccin de los grupos aninicos con un colorante bsico se denomina BASOFILIA (que tiene afinidad por lo bsico)

La reaccin de los grupos catinicos con un colorante cido se denomina EOSINOFILIA (que tiene afinidad por lo cido)

Coloracin con Hematoxilina

Coloracin con Eosina

Coloracin Hematoxilina-Eosina

Basfilo (azul)

Acidfilo (rosado)