QUMICA APLICADA MDULO 8

Frederica Sampaio 2013

Os microrganismos podem ser encontrados em todo o lado. De modo a obter e manter uma cultura pura/um meio puro, necessrio assegurar a ausncia de quaisquer organismos indesejveis (contaminantes).

Esterilizao do meio de cultura e Utilizao de tcnicas de assepsia, que evitam a ocorrncia de contaminaes durante a manipulao de culturas puras e meios de cultura estreis.

Pode ser efetuado: atravs da induo da morte dos microrganismos viveis

atravs da inibio do crescimento dos microrganismos.

Agentes antimicrobianos que destroem ou tornam bactrias ou fungos inviveis so designados bactericidas ou fungicidas. Agentes antimicrobianos que inibem o crescimento bacteriano ou de fungos so bacterostticos ou fungistticos.

Pode ser alcanado por: - descontaminao, - desinfeo e - esterilizao

Podem ser usados: - mtodos fsicos, ou - mtodos qumicos.

POR AGENTES FSICOS o calor, a filtrao radiao (radiao no-ionizante, como a UltraVioleta, e radiao ionizante, como os raios X e os raios ).
POR AGENTES QUMICOS cido Benzico; cido Srbico; Dixido de Enxofre; Sais e Acares; Nitritos e Nitratos; cido Actico e Lctico, entre outros. Antibiticos e outros agentes quimioterpicos.

Esterilizao de um qualquer material ou equipamento consiste na destruio ou remoo de todas as formas de vida, patognicas ou no, a ele associadas. Para a obteno e manuteno de uma cultura pura, recorre-se tanto esterilizao do meio de cultura como do material de laboratrio a utilizar no seu manuseamento. Agentes fsicos de esterilizao: - o calor, - a filtrao - radiao

Realiza-se em autoclave dos mtodos mais eficazes de destruio de microrganismos Resulta da desnaturao das protenas e da desestabilizao da membrana citoplasmtica.

Ocorre quando as clulas so sujeitas a temperaturas superiores temperatura mxima de crescimento dos microrganismos em causa.

Efetua-se em autoclave.

Cmara com vapor de gua saturado presso de 1 atm acima da presso atmosfrica, a que corresponde, em locais ao nvel do mar, uma temperatura de ebulio da gua de 121C.

No laboratrio de Microbiologia, usual sujeitar o material a esterilizar a 121C (1 atm; presso relativa) durante 15 minutos, de modo a assegurar a morte de todas as formas de vida microbianas, incluindo a dos endsporos bacterianos, mais resistentes ao calor que as clulas vegetativas.

Os endsporos bacterianos so as formas mais resistentes de vida Clulas vegetativas de bactrias - mortas de 5-10 min a 60-70 oC Clulas vegetativas de fungos - mortas de 5-10 min a 50-60 oC Esporos de fungos - mortas de 5-10 min a 7080 oC

O calor hmido utilizado para matar os microrganismos pode ser utilizado na forma de:
vapor, gua fervente, gua aquecida a temperaturas abaixo do seu ponto de ebulio (100 oC)

 na esterilizao de meios de cultura que no contenham componentes termolbeis

na esterilizao de material de plstico e de vidro a utilizar nos trabalhos experimentais de Microbiologia na descontaminao de roupas e instrumentos mdicos e cirrgicos na descontaminao de diversos materiais, reutilizveis ou descartveis, contaminados com culturas de clulas viveis, antes de serem lavados ou colocados no lixo.

Envolve a remoo de clulas de microrganismos de solues lquidas ou de gases ao atravessarem membranas filtrantes. As membranas filtrantes podem ser de vrios materiais (as mais vulgares, so acetato de celulose ou de policarbonato) e tm dimetros de poro muito pequenos (usualmente 0,2 m) onde as clulas microbianas ficam retidas.

Exemplo de um sistema de filtrao usado para a esterilizao por filtrao.

Esterilizao de meios de cultura com componentes que possam sofrer alterao por ao do calor (por ex. vitaminas, antibiticos, acares, aminocidos).
Esterilizao de solues de vitaminas, de agentes quimio-teraputicos, soros (entre outros), na indstria farmacutica. Concentrar clulas microbianas a partir de volumes grandes de amostras lquidas, como acontece na anlise bacteriolgica de guas

A maior parte dos vrus so suficientemente pequenos para atravessarem os poros destas membranas filtrantes, pelo que esta tcnica no assegura a esterilidade total das solues ou gases filtrados.

O tamanho dos poros do filtro que retm ou no os microrganismos :

bactrias - 0.5 a 1.0 m (geral) leveduras - 1.0-5.0 m x 5-30 m

O ar que circula em cmaras de fluxo laminar

de segurana ou em salas limpas

frequentemente sujeito a filtrao atravs de filtros de elevada eficincia (High Efficiency Particle Air HEPA- Filter) que permitem a reteno de pelo menos 99,999% das clulas e esporos

microbianos ou outras partculas presentes no ar.

Clulas microbianas vegetativas quando dessecadas interrompem a sua atividade metablica, levando a um declnio na populao total vivel.
No processo, chamado liofilizao, os microrganismos so submetidos desidratao extrema em temperaturas de congelamento mantidas em ampolas fechadas a vcuo

Agente antimicrobiano um composto qumico, natural ou sinttico, que mata um microrganismo ou inibe o seu crescimento.
Os agentes antimicrobianos variam em relao sua toxicidade seletiva.

Uns atuam de forma no seletiva, com efeitos similares em todos os tipos de clulas, enquanto que outros so muito seletivos e muito mais txicos para determinado tipo de clulas.

a capacidade de interferir com o metabolismo celular.

Certos agentes qumicos txicos possuem uma toxicidade to grande que por vezes tm que ser diludos de modo a reduzir o seu efeito.

Em soluo mais diluda, estes agentes podem ser utilizados como desinfetantes ou como antispticos.

Desinfetantes so compostos qumicos que matam os microrganismos e que so usados na remoo de parte ou da totalidade dos microrganismos patognicos em objetos inanimados.
Antisticos so desinfetantes que matam os microrganismos ou inibem o seu crescimento e que so suficientemente no txicos para serem aplicados a tecidos vivos, podendo ser usados na higiene pessoal ou no tratamento de ferimentos superficiais.

No existe um nico composto qumico que seja ideal para todos os propsitos, pelo que importante conhecer algumas propriedades para que se possa escolher o mais adequado:
as vantagens que o agente apresenta quando utilizados em determinadas situaes as principais categorias de agentes qumicos antimicrobianos algumas das suas caractersticas e utilizaes prticas e como atuam nos microrganismos

Atividade antimicrobiana - a capacidade de uma substncia de inibir ou preferencialmente matar os microrganismos - Sempre a primeira exigncia.
Solubilidade - a substncia deve ser solvel em gua ou outros solventes (lcool) na quantidade necessria ao seu uso efetivo. Estabilidade - o armazenamento da substncia durante um perodo razovel no deve resultar numa perda significativa de ao antimicrobiana.

Ausncia de toxicidade - no deve prejudicar o homem ou os animais. Homogeneidade - as preparaes devem ser uniformes na sua composio (os componentes ativos devem estar presentes em cada aplicao). Inativao mnima por material estranho - alguns compostos qumicos antimicrobianos combinam-se facilmente com protenas, diminuindo a quantidade de substncia qumica disponvel para agir contra os microrganismos. Atividade em temperatura ambiente ou corporal no deve ser necessrio aumentar a temperatura alm daquela normal encontrada no ambiente, onde os compostos qumicos so utilizados.

Poder de penetrao - a ao antimicrobiana limitada ao local de aplicao, entretanto a ao na superfcie algumas vezes necessria.

Ausncia de poderes corrosivos e tintoriais - os componentes no devem corroer ou desfigurar metais, nem corar ou danificar os tecidos. Poder desodorizante - o desinfetante ideal deve ser inodoro ou apresentar um odor agradvel.
Capacidade detergente - um agente antimicrobiano que tem propriedades de detergente tem a vantagem de ser capaz de remover mecanicamente os microrganismos da superfcie que se encontra em tratamento.

Disponibilidade a baixo custo - o produto deve ser facilmente encontrado e de baixo custo.

PROPOSTA DE TRABALHO 1: (para 20 /02/2013) No local de estgio onde trabalha, faz-se esterilizao? SE SIM: - Fsica e/ou qumica? - Atravs de que mtodo(s)? - Contra que microrganismos? - Porqu? SE NO: - Porque no necessrio?

Certo material hospitalar ou de laboratrio termosensvel (ex. termmetros, seringas, placas de Petri de plstico e outros) no pode ser esterilizado atravs do calor.
COMO SE PROCEDE ENTO: esterilizao em equipamentos fechados (semelhantes a autoclaves) em que usado um composto qumico como por exemplo o xido de etileno, formaldedo, cido peractico ou perxido de hidrognio - esterilizao a frio.

Para diminuir a carga microbiana - normalmente em: superfcies de equipamentos, paredes, cho, em laboratrios, hospitais e na indstria alimentar. Em leses de pele para prevenir a infeo. Eliminao de microrganismos patognicos da gua potvel e de piscinas.

Certos compostos qumicos com ao antimicrobiana podem ser utilizados in vivo para matar os microrganismos causadores de uma dada infeo sem afetar o hospedeiro permitindo o controlo de doenas infeciosas - agentes antimicrobianos de uso teraputico.

- Possvel devido sua toxicidade seletiva.

-

o caso dos antibacteriana.

antibiticos

com

ao

Os agentes quimioteraputicos podem ser: molculas produzidas por microrganismos ou plantas com efeito contra outros microrganismos antibiticos - ou molculas com as mesmas propriedades mas sintetizadas quimicamente - agentes sintticos. Os agentes quimioteraputicos tm toxicidade seletiva, ou seja, capacidade para inibir ou matar bactrias ou outro microrganismos patognicos sem afetar adversamente o hospedeiro.

Cada agente ou grupo de agentes quimioteraputicos tem um espectro de ao antimicrobiana.

Os antibiticos com ao antibacteriana so especialmente teis no tratamento de doenas infeciosas causadas por bactrias patognicas. Podem ser divididos em vrias classes, de acordo com a sua estrutura qumica e com os seus alvos e modos de ao.

Escolha um antibitico disponvel no mercado e caracterize-o quanto: estrutura qumica Ao(s) alvo(s) Modo de ao Especificidade/ espectro de ao