UNIVERSIDAD AUTNOMA DE SINALOA FCQB

Juana Aurelia Snchez Alarcn MARZO 2011

Los mtodos espectroqumicos se clasifican en cuatro categoras basados en la:

1.

Absorcin: atmica y molecular. Luminiscencia: Fluorescencia, Fosforescencia,

Quimioluminiscencia, atmica y molecular.

2.

3.

Dispersin

4.

Emisin:

atmica

Proceso de absorcin de la luz

Bsicamente, cuatro autores han abordado a lo largo de la historia el estudio de esta cuestin:

Pierre Bouguer (1729), Johann Lambert (1760), Felix Bernard ( 1852) y August Beer (1852).
Sus conclusiones se resumen en una ecuacin que se conoce como LEY DE LAMBERT-BEER. A= - Log I/Io = -Log T= Ebc

Las medidas cuantitativas se basan en la LEY DE LAMBERTBEER, que relaciona en determinadas condiciones, la absorcin de la radiacin con la concentracin de un compuesto en disolucin. El matemtico Francs LAMBERT estableci en el siglo XVIII, las bases de la fotometra: La intensidad de una radiacin

monocromtica presenta una disminucin atravesar un espesor de un material.

despus

de

Igualmente BEER , fsico alemn del siglo XIX, estableci una ley que permite calcular la cantidad de radiacin transmitida por un compuesto en disolucin en una matriz absorbente, despus de su paso a travs de un determinado espesor.

As resulta la Ley de Lambert-Beer:

A=bc

LEY DE LAMBERT - BEER

potencia del haz antes de atravesar el recipiente Absortividad molar

Absorbancia total medida a la longitud de onda l

P0 A T, l = log =ebc P
camino ptico potencia del haz luego de atravesar la muestra

concentracin molar de las especies absorbentes

P = Transmitancia (T) P0

A = -log T

Absorbancia

Io
Lmpara Selector

I
Celda de muestra

1)

A= - log T

2)

A= ebc
Ley de Beer

Los mtodos basados en la absorcin requieren dos medidas de potencia: una antes de que el haz haya pasado a travs del medio que contiene el analito (Po), y la otra despus (P). La Transmitancia y la Absorbancia son los dos trminos utilizados en la espectrometra de absorcin y se relacionan por la razn de Po y P

Transmitancia (T): es la fraccin de la luz incidente que pasa a travs de la muestra . La transmitancia es una medida de la cantidad de luz no absorbida.

T= P/ Po

o % T = P/ Po x 100
de la atenuacin o

Absorbancia (A): Es una medida disminucin de la potencia del haz.

A= -Log T = -Log P/ Po = Log Po / P

ABSORTIVIDAD MOLAR

Es la propiedad caracterstica de las especies, que indica cuanta luz se absorbe a una longitud de onda dada.

DEPENDE DE: ESPECIE ABSORBENTE LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO

UNIDADES
L /mol.cm = L mol-1 cm-1.

TERMINO Y SIMBOLO

DEFINICION

NOMBRE Y SIMBOLO ALTERNATIVO Intensidad de la radiacin I, Io Densidad ptica D, extincin E Transmisin T L, d

Potencia radiante P, Po Energa que incide, por cm y por segundo Absorbancia A Transmitancia T Camino ptico de la radiacin b Absortividad a Log P/Po P/Po Espesor o longitud de la celda A/ bc

Coeficiente de extincin k

Absortividad molar

A/bc

Coeficiente de extincin molar

P/Po 1 0.1 .01

%T 100 10 1

A 0 1 2

La solucin a estudiar est en algn tipo de cubeta.

La interaccin entre la cubeta y la radiacin provoca prdidas de potencia en cada interfase por reflexin, dispersin, alguna absorcin. Para compensar estos efectos se compara la potencia del haz que se transmite a travs de la solucin del analito, con la que atraviesa una cubeta idntica que contiene el blanco *
* blanco : consistente en el disolvente y otros constituyentes de la muestra excepto la especie absorbente.

Para medir la absorcin realmente se hacen dos medidas de la cantidad de luz absorbida a una determinada l. En la primera, se mide la cantidad de luz absorbida cuando se coloca un blanco (potencia incidente P0). En la segunda, se coloca en el paso ptico la disolucin absorbente y se mide la potencia que llega al transductor tras atravesar la sustancia absorbente (potencia transmitida, P).

Al poner inicialmente la disolucin blanco en la cubeta la potencia de la radiacin transmitida representa la radiacin incidente, menos las prdidas por reflexin, dispersin, absorcin de la cubeta, etc., es decir una potencia incidente corregida, P0 . Cuando el blanco se sustituye por la muestra y suponiendo que las prdidas por reflexin, dispersin, absorcin de la cubeta, etc., son idnticas de una medida a otra, la potencia transmitida ser P, lo que permite conocer realmente la Transmitancia. Se obtiene as una absorbancia experimental que se aproxima en gran medida a la absorbancia real de la solucin: A= -Log P/ Po
-Log

Disolucin absorbente

/P

blanco

PROPIEDADES de la LEY de BEER

La ley de Beer rige el proceso de absorcin en cualquier regin del

espectro electromagntico, ya sea absorcin de radiacin visibleultravioleta, absorcin de rayos X, absorcin de rayos g, etc.

La

absorbancia es una propiedad aditiva, es decir, en disoluciones que contengan ms de una especie absorbente la absorbancia total es la suma de las absorbancias individuales de cada especie absorbente. Suponiendo que no haya interaccin entre las distintas especies absorbentes (es decir, que estas sean independientes entre s), la absorbancia total para un sistema absorbente multicomponente 1, 2, 3,... n, cuyas absorbancias individuales sean A1, A2, A3,....An viene dado por: A TOTAL = A i = A1 + A2 + A3 +.......... + An

PROPIEDAD ADITIVA DE LA ABSORBANCIA

LA ABSORBANCIA TOTAL DE UNA MUESTRA A UNA LONGITUD DE ONDA DETERMINADA ES LA SUMA DE LAS ABSORBANCIAS DE CADA UNO DE SUS CONSTITUYENTES A DICHA LONGITUD DE ONDA.

A T, l =
1,6 1,4 1,2 1,0 0,8

A
i

i,l

0,6 0,4 0,2 0,0 0 200 400 600 800

longitud de onda (nm)

A = A1 + A2 + A3 + ........... + An = 1 b c1 +

2 b c2 + 3 b c3 + ......... + n b cn

Alcance de la ley de Beer:

Realmente la ley de Beer, A = e b C, es una ley experimental. Para que se cumpla es necesario varias condiciones, que:

1.- La radiacin sea monocromtica.* 2.- Las especies disueltas actan independientemente unas de otras en el proceso de absorcin. (No interaccionen entre s)

3.- La incidencia del haz sea perpendicular a la superficie absorbente.

4.- Las concentraciones de las especies absorbentes estn en el rango de 10-2 a 10-7 M

Una radiacin monocromtica (mismo color) significa que est constituida por fotones de una sola clase. Es decir, de la misma E y n.

DESVIACIONES DE LA LEY DE BEER La relacin lineal entre la absorbancia y el paso ptico, b, se cumple siempre. Para un paso ptico constante se suelen encontrar desviaciones a la proporcionalidad directa entre la A medida y la C de la especie absorbente. 1.-Desviaciones Fundamentales o Intrnsecas. Estas desviaciones pueden representar limitaciones reales de la ley de Beer. (no se cumple alguno de los supuestos de dicha ley enumerados previamente)

2.- Desviaciones Instrumentales: Ocurren como consecuencia de la forma de realizar las medidas.
3.- Desviaciones qumicas: como resultado de los cambios qumicos asociados a las variaciones de concentracin.
Absorbancia
A B

Concentracin

Las desviaciones de la Ley de Beer pueden ser positivas (curva A) o negativas (curva B).

Curva de calibracin
A b s o r b a n ci a

Concentracin

Intervalo de Concentracin Aplicable

Se pueden dividir en:

1. Intrnsecas o Reales: Concentracin.

2. Aparentes: a) Instrumentales b) Qumicas

c) Otras causas

1.

Desviaciones intrnsecas o Reales: Concentracin. La ley de Beer describe bien el proceso de absorcin en disoluciones diluidas de la especie absorbente (concentracin <10-2 M). A concentraciones elevadas, la ley de Beer presenta desviaciones. Al elevar la concentracin aumenta el grado de interaccin mutua entre las especies absorbentes, alterando su capacidad de absorcin a una longitud de onda determinada.* Como la magnitud de la interaccin depende de la concentracin, la aparicin de este fenmeno da lugar a desviaciones de la linealidad entre la absorbancia y la concentracin. *Al cambiar la l a la que ocurre la absorcin, cambia e

Un efecto similar se encuentra, en medios que contienen concentraciones de absorbente bajas pero concentraciones altas de otras especies, especialmente electrlitos. La estrecha proximidad de los iones al absorbente altera la absortividad molar de ste por interacciones electrostticas. Estas desviaciones se reducen por DILUCIONES.

2a. Limitaciones o desviaciones instrumentales de la ley de Beer. Son desviaciones accidentales, ocurren como consecuencia de la forma en que se realizan las medidas de absorbancia o por un mal funcionamiento del espectrmetro. CAUSA DE LA DESVIACION USO DE RADIACION POLICROMATICA FORMA DE EVITARLA ESCOGER LA REGION EN EL MAXIMO DE ABSORCION (Donde no hay cambios grandes en la absorcin en funcin de la longitud de onda)

FLUCTUACIONES DE LA POTENCIA DE LA FUENTE DE RADIACIN

LUZ ERRTICA O PARSITA

USAR UN REGULADOR USAR UN INSTRUMENTO DE DOBLE HAZ

ENCERRAR LOS COMPONENTES DEL MONOCROMADOR EN UNA CAJA PINTADA DE NEGRO. UTILIZAR UN OBTURADOR O PLACA NEGRA PARA IMPEDIR EL PASO DE LUZ AL DETECTOR CUANDO NO EST LA CELDA.

RESPUESTA NO LINEAL DEL DETECTOR (CAMBIOS EN LA SENSIBILIDAD)

EFECTO DE LA RADIACION POLICROMATICA EN LA LEY DE BEER

Si la medida se realiza en la zona del espectro donde no hay grandes variaciones de absorbancia con la longitud de onda (banda A), e no vara mucho a lo largo de la banda, es decir, e constante y a pesar de que la luz es policromtica se cumple la ley de Beer. Sin embargo, si la medida se realiza en una zona donde existen grandes variaciones de la absorbancia con la longitud de onda (banda B), e vara a lo largo de la banda y se encuentran desviaciones de la ley de Beer.
Banda A B

Absorbancia

Banda

Banda Absorbancia Banda B

Concentracin

Longitud

de onda

Esta es otra razn importante por la cual la medida de la absorbancia en espectrofotometra debe realizarse en el mximo de la lnea de absorcin del analito ,donde los cambios de la Absorbancia con cambios de la l es mnima.

2b. Limitaciones o desviaciones qumicas de la ley de Beer.

Su origen es una reaccin qumica que modifica la concentracin de la especie absorbente.

Las desviaciones qumicas de la ley de Beer se producen si la especie absorbente participa en un equilibrio qumico que modifica la concentracin de la misma en el momento de la medida.
Las desviaciones son aparentes ya que la concentracin real del analito es diferente de la concentracin analtica (o total) de dicha especie en la disolucin. Ej, muchos equilibrios son dependientes del pH y un caso clsico es el observado en las disoluciones no amortiguadas de K2Cr2O7 en las que se produce el equilibrio de hidrlisis (al disolver la sal en agua): Cr2O7 2+ H2O 2 CrO4 2+ 2 H+ [1]

Sistema que viene regido por la correspondiente constante de equilibrio [CrO4 2-]2 [H+]2 Keq = ---------------------[2] 2[Cr2O7 ]
Si se prepara una disolucin de K2Cr2O7 disolviendo la sal slida en agua: CT = [Cr2O7
2-

] + [CrO4 2-]

[3 ]

Limitaciones o desviaciones qumicas de la ley de Beer.

La constante de equilibrio se puede expresar: [Cr2O72-] eq [H+]2eq ------------------- = ---------[CrO4 2-]2 eq Keq

[4] (ecuacin [3]) y de la [H+]

Las [CrO42-] y [Cr2O72-] en el equilibrio dependen de CT (ecuacin [4]).

El CrO42- (amarillo) absorbe a 372 nm y el Cr2O72- (naranja) absorbe a 350 y 450 nm si se preparan los patrones simplemente por dilucin con agua se observarn desviaciones aparentes de la ley de Beer.
Anlogamente, cualquier cambio de pH originar modificaciones de las concentraciones relativas de ambas especies y por lo tanto habr desviaciones de la linealidad.

En estos equilibrios dependientes del pH, el pH deber ser ajustado (tamponado) de modo que se asegure que el equilibrio se desplace en una determinada direccin.
Por ejemplo, Si la disolucin se hace francamente cida, todo el Cr(VI) estar como Cr2O72- y se observa el cumplimiento de la ley de Beer a 350 y 450 nm. Por el contrario, si el sistema se hace fuertemente alcalino, el Cr(VI) estar todo como CrO42- y se cumplir la ley de Beer a 372 nm.

c) Otras causas de desviacin de la ley de Beer. La variacin de la temperatura puede influir claramente en el espectro y sobre el establecimiento del equilibrio qumico. Sin embargo, para oscilaciones pequeas de temperatura (e.g. 5 C, en torno a la temperatura ambiente del laboratorio) no se suelen observar variaciones significativas de la absorbancia. Los fotoefectos, tales como fluorescencia, dispersin no corregida, reacciones fotoqumicas, etc. tambin causan desviaciones de la ley de Beer El detector las puede registrar como una disminucin de la absorcin caracterstica de las especies absorbentes en la muestra.

El disolvente puede influir en el espectro de absorcin de las especies. En general, el espectro de una sustancia se desplaza a longitudes de onda ms largas (se rebaja DE ) al aumentar la polaridad del disolvente y si vara la l variar e.

ABSORBANCIA ?
Muestra Problema

Espectro de Absorcin
A b s o r b a n ci a 25 mM

5 mM

l Max
Longitud de onda (nm)

Azul de metileno
A b s o r b a n ci a

l Max

En general un compuesto puede absorber en la regin VIS si contiene al menos 5 grupos cromoforos conjugados y grupos auxocrmicos.

Longitud de onda (nm)

660 nm