UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEAR CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA DE ALIMENTOS PS-GRADUAO EM CINCIA E TECNOLOGIA DE ALIMENTOS DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA

DE ALIMENTOS PROFESSORA: EVNIA ALTINA T. DE FIGUEIREDO

Cronobacter spp. (anteriormente Enterobacter sakazakii)

fia Suely Santos da Silva de Almeida

Fortaleza 2013

Introduo
So patgenos emergentes associados a surtos de meningite, enterocolite necrosante e septicemia em neonatais em diversos pases. A taxa de mortalidade relatada varia de 40 a 80% e os sobreviventes apresentam sequelas neurolgicas severas. O desenvolvimento da infeco est associado ao consumo de frmulas infantis desidratadas.

Mudana de Nomenclatura
At 1980, Cronobacter Enterobacter cloaceae) spp. (literatura -

Em 1980, Farmer et al. definiram uma nova espcie, Enterobacter sakazakii, com base em experimentos de hibridizao de DNA, produo de pigmento, reaes bioqumicas e suscetibilidade aos antimicrobianos. Em 2007, Iversen et al. publicaram um extenso estudo utilizando cepas padro de E. sakazakii isolados de diferentes origens e representantes de espcies relacionadas.

WARNKEN, 2010

Mudana de Nomenclatura
As cepas de E. sakazakii foram separadas em grupos a partir de perfis obtidos por amplificao de fragmentos polimrficos fluorescentes de DNA (f-AFLP), ribotipos e anlise de seqncias gnicas completas de 16S rRNA.

PCR em tempo real - consiste em amplificar cpias de DNA in vitro, usando os elementos bsicos do processo de replicao natural do DNA. o mtodo para rpida amplificao de sequncias especficas de DNA.

WARNKEN, 2010

Mudana de Nomenclatura
A hibridizao DNA-DNA revelou cinco genomoespcies cujos perfis fenotpicos foram determinados. A partir dos resultados obtidos, os autores propuseram a reclassificao de E. sakazakii como um novo gnero, Cronobacter, dentro da famlia Enterobacteriaceae. Atualmente o gnero Cronobacter pertence famlia Enterobacteriaceae e composto por cinco espcies e trs subespcies: C. sakazakii, C. turicensis, C. malonaticus, C. muytjensii, C. genomospecies I, C. dublinensis subsp. dublinensis, C. dublinensis subsp. lausannensis e C. dublinensis subsp. lactardi.
WARNKEN, 2010

1. Organismo
Bactria gram-negativa;

Mveis, com peritrquios;

Forma: bastonete;

flagelos

CHEN, 2013

1. Organismo
Patognica, no formadores de esporos; Anaerbios facultativos; Doenas Transmitidas por Alimentos (crianas e adultos imunocomprometidos); Sobrevive em condies de pouca umidade em alimentos por longos perodos (frmulas infantis em p)

CHEN, 2013

1. Organismo
So capazes de se multiplicar na faixa de temperatura de 4547C. A termotolerncia parece variar de acordo com a cepa 12 cepas de Cronobacter spp. sobreviveram em frmulas infantis reidratadas, mantidas a 58C e encontraram dois fentipos de resistncia. Capazes de se multiplicar em frmulas infantis durante estocagem sob refrigerao e de aderir aos equipamentos usados para preparo de alimentao infantil, possibilitando que esses se tornem reservatrios dos patgenos.
Breeuwer et al. (2003)

1. Organismo

O gnero Cronobacter parece ter natureza ubqua e seu reservatrio primrio ainda no foi determinado.
Iversen e Forsythe (2004) sugerem que esses microorganismos no faam parte da microbiota normal dos humanos ou dos animais e apontam a gua, o solo e os vegetais como as principais fontes ambientais.

2. Doena Mortalidade
10% a 80% / 40 a 80 %

Risco: recm-nascidos (casos fatais so frequentemente associados com bebs prematuros ou de baixo peso ao nascer.
Nos ltimos anos, a mortalidade mais elevada tem sido em bebs nascidos a termo saudveis que desenvolveram septicemia.
CHEN, FDA, 2013

Dose infecciosa
No determinada, mas os cientistas tm especulado uma estimativa razovel, semelhante ao da Escherichia coli O157: H7 (isto , baixo; por exemplo, 10 a 100 organismos).

H pouca informao sobre o nmero de organismos em pacientes doentes, no sendo possvel, desenvolver uma curva de dose-resposta para estabelecer a "dose infecciosa". Contudo , possvel que um pequeno nmero de clulas presentes na frmula para lactentes pode causar a doena..
( MARLER, 2011)

Incio dos Sintomas

Bebs: dentro de poucos dias.
Adultos: raros, assim como as fontes de alimentos geralmente no foram determinados.

CHEN, FDA, 2013

Complicaes da Doena

Complicaes Neurolgicas Sistema Nervoso Central Meningite

Infeces Generalizadas Corrente Sangunea Septicemia

Enterocolite necrosante (NEC): caracterizada por necrose e pneumatose intestinal em que partes dos tecidos do intestino morrem, principalmente em bebs prematuros.
* O organismo tem sido associada a essas doenas, embora no tenha sido firmemente estabelecido como um agente causador.
CHEN, FDA, 2013

Sintomas
So muitas vezes graves e pode incluir: Ictercia (Refere-se cor amarela da pele e do branco dos olhos que causada pelo excesso de bilirrubina no sangue. A bilirrubina um pigmento normal, amarelo, gerado pelo metabolismo das clulas vermelhas do sangue. Grunhindo enquanto respira; Instabilidade da temperatura do corpo; Convulses; Abscesso cerebral; Hidrocefalia; Retardo do desenvolvimento e Irritabilidade.

CHEN, 2013

Durao dos sintomas

Entre os sobreviventes, a colonizao varia de 2 a 8 semanas.

Entre mortes, a morte pode ocorrer dentro de algumas horas a vrios dias aps os primeiros sinais de sepse aparecer.

Via de Entrada
A maioria das infeces so causadas por via oral, embora raros casos de infeco de ferida tambm tm sido relatados.

CHEN, FDA, 2013

Patognese
- A patognese da Cronobacter induzida por meningite neonatal e enterocolite no totalmente compreendido. - O organismo adere a superfcies celulares e se hospedam instantaneamente para reproduzir uma concentrao tima. - A adeso de clulas epiteliais por Cronobacter essencialmente no-fmbrias e outros fatores de virulncia no identificadas tambm podem contribuir para a ligao.

CHEN, FDA, 2013

3. Frequncia
- Poucos casos de infeco foram documentados, e o organismo raramente tem sido isolado de alimentos e amostras clnicas. - Desde 1958, houve 120 casos de infeco em crianas, com uma mdia de 5 casos relatados/ano, em todo o mundo. - Estudos epidemiolgicos sugerem uma taxa de infeco por Cronobacter de menos de 1% entre os pacientes com sintomas suspeitos. - Os dados no leva em conta a identificaes de falsonegativos.
CHEN, FDA, 2013

4. Fontes
Infeces em Recm-nascidos
Frmulas infantis em p contaminadas aw -0.2
Frmulas infantis em p reidratadas - no estreis Utenslios usados para o preparo

Sobrevivncia do Cronobacter em frmula infantil em p por at 2 anos tem sido relatada.

CHEN, FDA, 2013

4. Fontes
A formao de cpsulas de Cronobacter podem contribuir para a sua resistncia dessecao forte. Porque Cronobacter no sobrevive a pasteurizao utilizado na produo de leite em p; Tem sido sugerido que a contaminao ocorre principalmente devido a um ambiente contaminado ps-secagem ou adio de ingredientes que so sensveis ao calor, mas so adicionados aps o tratamento de pasteurizao. A contaminao pode ser mais provvel quando a frmula reconstituda mantida a temperaturas imprprias antes da utilizao ou para uma longa durao do que o sugerido pelo fabricante. O organismo tem sido encontrada em outros alimentos, mas apenas frmulas infantis em p tem sido associada a surtos de doenas.
CHEN, FDA, 2013

 Alguns estudos relataram uma taxa de contaminao de 10% a 15% dos produtos de frmulas infantis por Cronobacter , com menos de 1 UFC / 25 g em todas as amostras.
Estudos recentes isolou o organismo a partir de frmulas infantis, alimentos infantis em p, leite em p, produtos de queijo, e outros alimentos secos.

Associao a outros alimentos (rara)

PO CEREAIS ARROZ FRUTAS LEGUMES ESPECIARIAS ERVAS

QUEIJO LEGUMES LEITE CARNE PEIXE PRODUTOS DE LEGUMINOSAS

Isolado

Ambiente onde so processado estes alimentos.

5. Diagnstico

Para diagnosticar doenas associadas a Cronobacter necessria a identificao de cultura, isolados de tecidos, sangue, fluido cerebrospinal, ou aspiradas de urina.

CHEN, FDA, 2013

6. Pblico-Alvo
Recm-nascidos e lactentes; Infeces neonatais podem resultar do contato com Cronobacter no canal de parto ou por meio de fontes ambientais ps-nascimento;

Imunossupresso, parto prematuro e baixo peso ao nascer pode aumentar o risco de infeco.

CHEN, FDA, 2013

6. Pblico-Alvo
Aproximadamente 50% das crianas infectadas com Cronobacter tem menos de 1 semana de idade, e 75% das crianas infectadas tm menos de 1 ms de idade. Adultos so consideradas um grupo de baixo risco, no entanto, alguns casos de infeces em adultos imunocomprometidos e idosos tambm tm sido relatados.

Alm da doena aguda, estudos indicam que o paciente pode se tornar um portador entrico de Cronobacter spp., por um perodo de at 18 semanas.
CHEN, FDA, 2013

7. Anlise de Alimentos
Em 2002, a FDA desenvolveu um mtodo para a deteco de Cronobacter em frmula infantil em p, que envolve o caldo de enriquecimento, e plaqueamento em agar glicose bile violeta vermelho e Agar de Soja Trypticase.

Mtodo demorado e evidenciou fraca seletividade para o Cronobacter na presena da flora fundo concorrentes.

A FDA validou novo mtodo para a deteco de Cronobacter que utiliza tecnologia PCR em tempo real, melhorando significativamente o desempenho da deteco.
CHEN, FDA, 2013

8. Surtos

Dados Epidemiolgicos DTA Perodo de 2000 a 2011

Ministrio da Sade Secretaria de Vigilncia em Sade

Fonte: BRASIL, 2011

Fonte: BRASIL, 2011

Brasil
Ainda so poucos os relatos de infeco por Cronobacter spp. 1999 - O primeiro est relacionado a um surto ocorrido na Unidade de Neonatologia e no Centro de Terapia Intensiva no Hospital das Clnicas da UFMG; 2000 - O segundo, a um surto envolvendo quatro hospitais no Rio de Janeiro; 2003 - O terceiro relato descreve um caso de meningite por Cronobacter spp. em recm-nascido no Hospital Universitrio da USP.

Brasil
2004: A Anvisa proibiu, em todo o territrio nacional, o ingresso, a comercializao, a distribuio, a exposio ao consumo e o uso da frmula infantil/produto. Fabricado na Holanda: Leite Infantil com Ferro para Lactentes, em p das marcas Pregestimil e Enfamil Pregestimil A deciso, transitria e em carter de emergncia, foi tomada porque o Ministrio da Sade da Frana investigou a relao do consumo do produto e a ocorrncia de infeco causada pela bactria Enterobacter sakazakii.
WARNKEN, 2010

 Entretanto, os nmeros de casos relatados nos diversos pases provavelmente no refletem a realidade. Isso porque muitos laboratrios clnicos, independentemente do pas, no incluem a pesquisa rotineira de Cronobacter spp. e na maioria dos casos o relato das infeces por esses patgenos no obrigatrio.

Alm disso, muitos pases no dispem de um sistema oficial de informao

9. Tratamento
A meningite bacteriana em neonatos uma doena fatal de evoluo rpida, e como as defesas imunolgicas nos fluidos cerebrais destes indivduos so limitadas, os antibiticos devem ser rapidamente administrados para a erradicao do agente etiolgico.

A antibioticoterapia, o procedimento adotado no tratamento inicial de suspeita de infeco por Cronobacter spp.

Entretanto, vrios autores tm relatado o desenvolvimento de resistncia do microorganismo a essas drogas.

10. Referncias
CHEN, Yi. Cronobacter species. In: FOOD AND DRUG ADMINISTRATION. Bad bug book. Foodborne pathogenic microorganisms and natural toxins. Second Edition. Disponvel em: <http://www.fda.gov/Food/FoodborneIllnessContaminants/CausesOfIllnessBa dBugBook/default.htm>. Acesso em: 04 abr. 2013.
MARLER, B. What the Hell is Cronobacter sakazakii, formerly Enterobacter sakazakii? Food Poison Journal. Seattle, on December 24, 2011. Disponvel em: < http://www.foodpoisonjournal.com/food-recall/what-the-hell-iscronobacter-sakazakii-formerly-enterobacter-sakazakii/#.UWVhHDdae1t> Acesso em 05 abr. 2013. FOODBORNE ILLNESS Common bacteria and viruses that cause food poisoning. Cronobacter sakazakii. Disponvel em: < http://www.foodborneillness.com/enterobacter_sakazakii_food_poisoning/ > Acesso em 05 abr. 2013.

10. Referncias
WARNKEN, M. B. Cronobacter spp.: do isolamento pesquisa de marcadores de virulncia , 2010. Tese (Doutorado em Vigilncia Sanitria) Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade - Fundao Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, 2010. Disponvel em: < teses.icict.fiocruz.br/lildbi/docsonline/get.php?id=310 > Acesso em: 05 abr. 2013. BASSO, J. P. et al. Avaliao do mtodo ISO Modificado para deteco de Cronobacter sakazakii em alimentos. Laboratrio de Microbiologia, Centro de Cincia e Qualidade de Alimentos, Instituto de Tecnologia de Alimentos. Disponvel em: < www.iac.br/areadoinstituto/pibic/anais/2009/.../RE0901008.pdf > Acesso em: 05 abr. 2013. BRASIL. Ministrio da Sade. Dados epidemiolgicos: (DTA) perodo de 2000 a 2011. Secretaria de Vigilncia em Sade, 2011. Disponvel em: < http://portal.saude.gov.br/portal/arquivos/pdf/dados_dta_periodo_2000_2011_si te.pdf > Acesso em: 05 abr. 2013.

OBRIGADA!

A hibridao de DNA-DNA refere-se a uma tcnica da biologia molecular que determina o grau de semelhana gentica entre combinaes de sequncias de DNA