Luz Mary Moreno Valentina Gonzlez Sara Gmez Rodrguez

Objetivos de la practica.

Es aprender sobre los conceptos de enzima y la actividad enzimtica teniendo una definicin mas amplia de catlisis en cuanto a las principales variables que determinan su comportamiento como tambin estudiar el papel de la amilasa salival en el proceso de digestin de los carbohidratos.

Qu son las enzimas y la actividad cataltica?

Las enzimas son protenas que catalizan reacciones qumicas en los seres vivos. La actividad cataltica es la capacidad del catalizador de acelerar o disminuir una reaccin. se compone por tres partes: soporte, fase activa, selectividad.

Caractersticas generales (catalizadores)

Caractersticas especiales (enzimas) Son catalizadores selectivos y especficos. Son molculas que se pueden regular y controlar al igual que su actividad. Acoplan reacciones: Aprovechan la energa de la reaccin exergnicas e impulsan reacciones endergnicas.

Se requieren pocas cantidades. No se consumen en la reaccin. No afectan la posicin de equilibrio

Propiedades de las enzimas.

Aumentan la velocidad de reaccin:

De 106 to 1012 veces vs sin enzima. An ms rpido que los catalizadores qumicos.

Condiciones de reaccin:
Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC) pH neutro (5-9), la mayora 6.5 7.5 Presin atmosfrica normal

Capacidad de regulacin: Por concentracin de sustrato Por concentracin de enzima Por inhibidores competitivos (semejantes al sustrato) Por inhibidores no competitivos (modificacin covalente de la enzima) Por regulacin alostrica Alta especificidad de reaccin: Interaccin estere especfica con el sustrato No hay productos colaterales

Aspectos sobre las enzimas.

1.La enzima y su sustrato 2. Unin al centro activo 3. Formacin de productos

Variables que afectan la actividad cataltica.

La actividad cataltica de las enzimas se ve influenciada por varios factores: concentracin del sustrato y de la enzima, la ausencia o presencia de cofactores, inhibidores y efectores, el aumento o disminucin de la temperatura y las variaciones del pH.

Efecto del pH sobre la actividad enzimtica.

Actividad enzimtica y variacin la T

Vo

37 85 Temperatura oC)

Actividad enzimtica en funcin de la concentracin de sustrato

Sobre el sustrato y la digestin

Generalidades del almidn:

El almidn funciona como fuente de energa. Sus propiedades fsicas ayudan a mejorar la textura y la aceptabilidad de los alimentos. El almidn es un polmero de glucosas, unido por enlaces glicosdicos, y formado por dos compuestos diferentes: la amilosa (10 20 %) y la amilopectina (80 90 %).

Granos de almidn en clulas de patata visto con escner de barrido

Estructura del almidn.

La alfa- amilosa es un polmero lineal de alfa(1->4)Dglucopiranosa

La amilopectina esta ramificada y consta de residuos de alfa(1>4)D-glucopiranosa enlazadas entre s por uniones alfa(1->6)

Digestin del almidn

Como carbohidrato de la dieta humana para ser absorbido a travs de la pared intestinal su digestin e hidrlisis es realizada por enzimas digestivas ubicadas en boca (amilasa salival, estomago (amilasa mas HCl) e intestino delgado ( amilasas pancreticas ( y ).

Mecanismo de accin y tipos de amilasa.

-Amilasa: Acta a lo largo de cualquier punto de la cadena de los carbohidratos y su pH ptimo est entre 6.7 y 7.2.

-Amilasa: Acta desde el extremo no reductor de la cadena, catalizando la hidrlisis del segundo enlace y rompiendo dos unidades de glucosa (maltosa) y tiene un PH optimo de 12
Amilopectina Amilopectina
-amilasa
-amilasa

-maltosa ++ Dextrinas Dextrinas -maltosa

-Amilasa: Actua en enlace glucosdico en el extremo no reductor de la cadena de amilosa y amilopectina liberando glucosa. A diferencia de las otras amilasas, esta forma es ms eficaz en medios cidos y su pH ptimo es de 3.

Objetivos.
Comprender la forma como diversos factores influyen sobre la actividad cataltica de las enzimas. Evaluar la dependencia que puede presentar una reaccin enzimtica con respecto a la acidez del medio, a la temperatura y a la concentracin de la enzima.

Materiales y reactivos.

Soluciones buffer 0.1 M, as: De citrato con pH 3.0, De fosfato con pH 5.0, De fosfato con pH 7.5, De borato con pH 9.0, De borato con pH 10.0 y de Borato con pH=11. Solucin de amilosa (almidn) al 1 %. Solucin de NaCl al 0.9 %. Solucin de lugol : 5 mmoles de 2 por litro de K (30 g/L). Solucin de amilasa salival diluida en agua en proporcin 1 en 4.

Sobre la actividad de la enzima amilasa.

EVALUACION DEL CAMBIO DE pH

Mezcle por inversin.
Agregue 3 gotas de lugol. Pasados 5` tome 1mL del tubo con pH=7.

Disponga de 8 tubos de ensayo. Calcule el porcentaje de reaccin.

Sino aparece coloracin azul en el tubo con pH=7 adicione 3 gotas de lugol incluido el blanco.

Excepto al 8 agregue 1 mL de solucin .

Observe el grado de intensidad .

Se realizara sobre la reaccin de hidrlisis de la amilosa.

Prepare 5 soluciones acuosas de amilasa salival en diferentes proporciones.
Si no se aprecia coloracin, agregar 3 gotas de lugol y agotar por inversin 20

EVALUACIN CAMBIO DE CONCENTRACIN DE LA ENZIMA.

Observar el grado de intensidad de color azul claro en cada tubo.

Disponga de 3 tubos de ensayo con 4 mL de almidn y 2 mL de NaCl

Tomar de cada tubo 1 mL de solucin y agregar 1 gota de lugol.

Coloque los tubos en bao termostatizado a 37C durante 10

A cada uno de los tubos agregue una solucin de amilasa salival y mezcle por inversin

EVALUACIN DEL CAMBIO DE TEMPERATURA.

Se realizara sobre la actividad de la enzima amilasa.

Disponga de 4 tubos con 4mL de almidn y 2mL de NaCl. Coloque los tubos en los baos previamente preparados y dejarlos durante 10.

Preparar un bao de: hielo a 4C, un termostatizado a 37C y uno de agua hirviendo a 94C

A cada uno de los tubos agregue 3 gotas de lugol. Agite y observe los resultados

Mezcle por inversin y llevar a cada tubo a respectivo bao por 5 mas.

Agregue 1 mL de solucin de amilasa salival, 1 en 8.

Gracias.