DETERMINACION DE COCAINA EN PELO POR EL METODO DE CROMATOGRAFIA DE GASES

El pelo de las personas crece aproximadamente a una velocidad de un Centmetro por mes. As por ejemplo, si se analiza el primer centmetro del pelo cercano a la raz y El resultado es positivo, esto indicar que la persona consumi droga durante el mes anterior con Una frecuencia, y en una dosis tal, que han hecho posible la acumulacin suficiente para ser Detectada.

DETERMINACION DE COCAINA EN PELO POR EL METODO DE CROMATOGRAFIA DE GASES la deteccin de metabolitos de cocana en el cabello es una alternativa a las opciones actuales de los mtodos en orina y sangre. O, si se quiere, es un mtodo complementario que ofrece ventajas especficas:

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El anlisis de cabello para detectar drogas va en relacin con el crecimiento de ste pudiendo determinar el consumo en trminos de varios meses. Ampla, por tanto, la ventana de deteccin y proporciona informacin sobre el tiempo de consumo.

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En el presente estudio se implement un mtodo analtico de cromatografa de gases con detector de espectrometra de masas (GC-MS), de tipo cualitativo para la deteccin de cocana, a travs de su metabolito benzoilecgonina, utilizando cabello de cadveres consumidores de cocana como matriz biolgica.

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Se analizaron 64 muestras de cabello procedentes de 16 cadveres de la morgue del Instituto de Medicina Legal Mediante prueba confirmatoria en orina por espectrofluorimetra se estableci previamente que eran consumidores de cocana al menos durante los cuatro ltimos das antes de su fallecimiento.

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CRITERIOS DE INCLUSIN. Consumidor de cocana. Largo mnimo de cabello de 4 cm. Prueba presuntiva para cocana en orina positiva por inmunoensayo. Prueba confirmatoria en orina positiva para benzoilecgonina (espectrofluorimetra).

DETERMINACION DE COCAINA EN PELO POR EL METODO DE CROMATOGRAFIA DE GASES Procedimiento Analtico. Todos los reactivos y solventes utilizados fueron de grado cromatogrfico y analtico: HCl, buffer fosfato, Diclorometano, acetato de etilo, HFIP

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Cada mechn de cabello fue previamente sometido a lavado para su descontaminacin externa, en la siguiente forma: Se adicion 2 ml. de Diclorometano a 35 C por 5 minutos (2 veces). El cabello ya lavado se dejo secar a temperatura ambiente. Corte Seriado del Cabello. Para obtener el perfil retrospectivo del consumo de cocana, se procedi de la siguiente manera: Cada mechn de cabello de cada uno de los cadveres fue medido en segmentos de 1 cm. de longitud cada uno. El primer centmetro corresponde al ms prximo a la raz. A su vez, cada segmento (cada centmetro) fue cortado con tijera en pequeos trozos de aproximadamente 1 mm. y colocados en un tubo de ensayo con tapn de rosca.

EXTRACCIN.
Las muestras fueron sometidas a un procedimiento de extraccin de la benzoilecgonina mediante hidrlisis cida, de la siguiente manera:

EXTRACCION
Se adicion 1 ml. de HCl 0.1 N (tapar) a cada uno de los tubos. Se calent en estufa a 50 C durante 24 horas. Al contenido del tubo se le adicionaron 6 ml de buffer fosfato hasta alcanzar pH 9.0 Se adicion 6 ml del solvente de extraccin: Diclorometano.

EXTRACCION
Se coloc en mezcladora durante 12 horas. Se procedi a separar la capa acuosa (capa superior) de la capa orgnica (capa inferior), que es el solvente. Y, se llev a sequedad por evaporacin.

DERIVACIN.
Se adicionaron 100 l4 de 1, 1, 1, 3, 3, 3 hexa fluoro isopropanol (HFIP). Se calent en tubo tapado a 80C durante 30 minutos. Se enfri a Temperatura ambiente, destapando el tubo. Se evapor el derivado a una temperatura de 65 C.

RECONSTITUCIN.
El residuo se reconstituy con 150 l de Acetato de etilo. La alcuota se coloc en un vial de 3 ml con columna interna de 200 l.

Mtodo Instrumental: Cromatografa de gases con detector de espectrometra de masas (GCMS).

Se enfri e inyect la alcuota en un cromatgrafo Agilent Technologies 6890 acoplado a un detector selectivo de masas Agilent Technologies 5973 inert. La columna capilar utilizada Columna cromatogrfica PE-17 entrelazada 50% fenil y 50% metil polisiloxano (30 metros x 0.32 mm. Dimetro Interno, 0.25 m5 Grosor de Pelcula).

MTODO INSTRUMENTAL: CROMATOGRAFA DE GASES CON DETECTOR DE ESPECTROMETRA DE MASAS (GCMS). La temperatura del puerto de inyeccin 230 C, en la modalidad sin divisin de flujo (splitless), 0.75 minutos la interfase a 280C.

MTODO INSTRUMENTAL: CROMATOGRAFA DE GASES CON DETECTOR DE ESPECTROMETRA DE MASAS (GCMS).

El horno fue programado con una temperatura inicial de 100C con un incremento de 25C por minuto hasta alcanzar 235 C, temperatura que se mantiene por 20 minutos. El gas transportador Helio de extrema pureza se us a una velocidad de flujo de 50 ml/minuto.

MTODO INSTRUMENTAL: CROMATOGRAFA DE GASES CON DETECTOR DE ESPECTROMETRA DE MASAS (GCMS).

Se utiliz el modo SIM (monitoreo de masa de un solo in), con 4 iones para identificar la benzoilecgonina. Los iones utilizados en el monitoreo fueron: 77, 82, 124 y 168. Por ser estos los iones de la benzoilecgonina que se encuentran en mayor abundancia. El tiempo de retencin de la sustancia fue de 16.999 minutos.

Anlisis de los Datos Obtenidos de la Deteccin del Consumo Cocana en el Cabello Mediante Cromatografa de Gases con Espectrometra de Masas.
El procedimiento del cromatgrafo de gases con espectrometra de masas fue concluyente: detect la presencia de cocana en el cabello a travs de su metabolito benzoilecgonina, aportando un dato de naturaleza cualitativa: el espectro de masas que expresa la presencia de los iones monitoreados de la sustancia en forma gaseosa.

LA IDENTIFICACIN DE LA BENZOILECGONINA SE ESTABLECI DE ACUERDO A LOS SIGUIENTES PARMETROS:

El tiempo de retencin de la sustancia en los distintos ensayos fue similar: 16.999 minutos. Todos los iones utilizados en el monitoreo aparecieron en el mismo tiempo de retencin. En el modo de exploracin de la relacin masa carga se obtuvo un espectro de la sustancia problema similar al estndar de referencia.

MTODO INSTRUMENTAL: CROMATOGRAFA DE GASES CON DETECTOR DE ESPECTROMETRA DE MASAS (GCMS). Con el mtodo de cromatografa de gases con espectrometra de masas, utilizando el cabello como matriz alternativa, es posible determinar en el tiempo el uso crnico de la droga dependiendo de la longitud del cabello.