Plantas como biofactoras

Aitor Snchez Hernndez Estefana Lozano Andrs Aroa Martnez Vzquez

ndice
Recursos energticos de origen vegetal Recursos qumicos de origen vegetal Produccin de enzimas de inters Produccin de protenas recombinantes Transferencia de la planta al microorganismo Modificacin del genoma Transferencia del microorganismo a la planta

Introduccin
Las plantas son un recurso energtico, qumico y gentico.
La biomasa derivada de plantas provee como mucho el 11-15% de la energa a nivel global. Ej. Conversin de materiales vegetales como lignocelulosa a alcoholes, y en pequea escala incluso biogs.
Durante siglos, las plantas han sido una fuente valiosa de productos qumicos y actualmente existe una moda de utilizacin de productos qumicos de plantas en la industria farmacutica, cosmtica y de qumica fina en bajas cantidades pero con un alto valor.

El potencial de las plantas como recurso gentico es muy obvio, especialmente en vista del hecho de que se ha centrado la atencin y la preocupacin en la disminucin de la diversidad vegetal, particularmente en los trpicos y subtrpicos, y en las escasos conocimientos genticos que tenemos de la mayora de los cultivos de alimentos bsicos.

Recursos energticos de origen vegetal.

Hay varias maneras en las que los materiales vegetales pueden ser usados como sustratos para la produccin de energa:
Por combustin directa para obtener calor, o para producir vapor para mover
mquinas y turbinas que producen electricidad.

Conversin o extraccin de combustibles y productos

qumicos de los productos primarios obtenidos de las plantas (metano, etanol).

Recursos energticos de origen vegetal.

Los componentes tiles de la biomasa son:
Azcares: Las plantas que producen altos niveles de azcar incluyen la caa de azcar, la remolacha azucarera y el mijo.

Almidn: Los productos vegetales que contienen almidn son los cereales,
particularmente las races del maz, el arroz y el trigo, as como la patata y otros cultivos como la batata y la yuca. Lignocelulosa: Sin lugar a dudas, la principal fuente de biomasa para los diferentes procesos biotecnolgicos vendr de los derivados de lignocelulosa de las industrias de la agricultura y la silvicultura. La lignocelulosa contiene tres componentes qumicos principales: lignina, -celulosa y una coleccin de polisacridos conocidos colectivamente como hemicelulosa.

Recursos energticos de origen vegetal.

PRODUCCIN DE METANO:
Estos sistemas operan en mbito local en la India y China, donde se estima que ocho millones estn en funcionamiento, y que sirven para producir una fuente barata de combustible de alta energa.

Recursos energticos de origen vegetal.

PRODUCCIN DE METANO:

Recursos qumicos de origen vegetal.

La mayora de los compuestos de importancia comercial son metabolitos secundarios producidos por las plantas como consecuencia de las diferentes etapas de diferenciacin de la clula, tejido y rganos. Los sustitutos sintetizados no son tan eficaces como las sustancias naturales.

El cultivo de tejidos vegetales tiene aplicaciones particularmente importantes para ciertas industrias como la farmacutica y alimentaria que requieren sustancias especficas altamente purificadas. Estos pueden ser producidos por:

La biosntesis de grupos especficos de compuestos en cultivos celulares de

especies ya conocidas.

La biotransformacin de los compuestos especficos a los de un tipo ms

deseable (valioso) aprovechndose de enzimas especficas en clulas vivas.

USO DE CULTIVOS CELULARES VEGETALES PARA LA BIOSNTESIS DE COMPUESTOS VEGETALES.

A Favor: Independencia frente a factores ambientales. Mayor control. La calidad del producto podra ser asegurado con el uso de lneas celulares. Podra liberar tierras para la produccin de cultivos alimentarios y comerciales. Facilita el procesamiento posterior y los pasos de recuperacin del producto. Se pueden conseguir nuevas rutas de sntesis a partir de lneas celulares aberrantes o mutantes. Puede ser ms adecuado en casos en que las plantas sean difciles o costosas de cultivar. Tienen la capacidad de biotransformar sustratos especficos a productos ms valiosos por medio de enzimas.

En Contra: Tienen un metabolismo y crecimiento lento (en comparacin con bacterias). Precisan de biorreactores especficos para no daar la estructura celular relativamente frgil. Es difcil comparar los rendimientos con sistemas vegetales completos.

Produccin de protenas de inters en plantas

1
Enzimas

5
Protenas estructurales

2
Vacunas

4
Biofrmacos

3
Anticuerpos

Produccin de enzimas de inters

Enzimas empleadas en muchos procesos industriales producidas de forma estable en plantas. Se utilizan en las industrias del papel, la madera, elaboracin de detergentes, produccin de alimentos y piensos para animales. Se necesitan cantidades elevadas de enzimas. Es necesario que su coste sea bajo.

Produccin de enzimas de inters

Glucanasa - amilasas Xilanasa Fitasa Quimosina
Lacasa
Produccin de etanol, industria textil y de papel, piensos para animales. Tabaco, cebada, Arabidopsis

Hidrlisis del almidn, clarificacin de vinos y zumos, industria de detergentes. Semillas de soja, frutas ctricas Eliminacin de lignina residual, bioconversin de paredes celulares, mejora de la digestibilidad para piensos de animales. Tabaco, guisante Elaboracin de piensos para animales, liberacin del P de los fitatos. Tabaco, soja

Elaboracin de queso Tabaco, patata

Industria textil (decoloracin de fibras), clarificacin de zumos. Maz

Produccin de enzimas de inters

Enzima
- amilasa - amilasa

Origen del gen

Bacillus licheniformis Bacillus licheniformis

Cultivo
Tabaco Vicia narbonensis

- amilasa
Fitasa Fitasa

Bacillus licheniformis
Aspergillus niger Aspergillus niger

Guisante
Tabaco Soja

(1,3-1,4)glucanasa
(1,3-1,4)glucanasa

Ruminococcus flavefaciens
Bacillus amyloliquefaciens/ Bacillus macerans Clostridium thermocellum Clostridium thermocellum Ruminococcus flavefaciens

Tabaco
Cebasa

(1,4)xilanasa (1,4)xilanasa (1,4)xilanasa

Tabaco Guisante Tabaco

Protenas recombinantes
Por qu emplear plantas para la produccin de protenas recombinantes?
Porque ciertas protenas requieren una serie de modificaciones posttraduccionales como la glicosilacin o la fosforilacin.

Obtencin de PR por sntesis qumica imposible necesitamos utilizar sistemas vivos plantas Son ms baratos, ms fciles de almacenar y ms seguros que los de origen animal o los producidos por MO. Destaca la produccin de: Anticuerpos y fragmentos de anticuerpos Antgenos (para elaborar vacunas) Protenas estructurales (colgeno) Otros biofrmacos (hormonas, interfern, antitumorales, enzimas, .)

Protenas de inters biosanitario

Vacunas

Anticuerpos

Biofrmacos

Protenas estructurales

Vacunas
Gracias a la tecnologa recombinante del ADN es posible la identificacin y el aislamiento de los genes de organismos patgenos que codifican para la sntesis de antgenos. Introducimos los genes en plantas y somos capaces de fabricar una biofactora . El antgeno producido en la planta puede purificarse para su administracin va parenteral o puede realizarse la expresin en plantas o tejidos comestibles . Esto son las vacunas comestibles.
Introducir los genes en plantas. Identificar y aislar los genes que codifican para la sntesis de antgenos

BIOFACTORA

1. Purificacin del antgeno va parenteral 2. Expresin en plantas o tejidos comestibles va oral

Vacunas comestibles

Vacunas comestibles

Facilidad de administracin y almacenamiento Eliminacin de la purificacin

Reduccin de costes

Muy interesantes para su aplicacin a gran escala en pases subdesarrollados o para vacunaciones
masivas en caso de epidemias o ataques terroristas.

Vacunas comestibles
Inconvenientes asociados:
Concentracin de antgeno Concentracin homognea Resistente a jugos gstricos e intestinales Induccin de tolerancia oral

Control muy estricto de los cultivos y plantas

Vacunas
Enfermedad Papiloma humano Sarampin Rabia Hepatitis C Hepatitis B Clera Patgeno Virus Virus Virus Virus Virus Bacteria (Vibrio colerae) Sistema vegetal Tabaco Tabaco Tabaco, espinaca Tabaco Patata, tabaco, lechuga Patata

Diarrea del viajero

Infecciones pulmonares Infecciones nosocomiales Ttanos Carbunco

Bacteria (Escherichia coli)

Bacteria ( Pseudomonas aeruginosa) Bacteria (Staphylococcus aureus) Bacteria (Bacillus anthracis)

Patata
Caup (juda) Tabaco, caup

Bacteria (Clostridium tetani) Tabaco Tabaco

Produccin de vacunas en plantas transgnicas destinadas al tratamiento de enfermedades animales o humanas.

Vacunas
Vacunas contra patgenos
Bacterias y virus Antgenos Plantas de tabaco, caup

Vacunas autoinmunes

Vacunas antitumorales
Cncer de mama y melanoma Antgenos tumorales Plantas de tabaco

Frenar la RI alterada
(diabetes tipo I)

Tolerancia oral Plantas de alrgenos

Produccin de anticuerpos
Es posible sintetizar en plantas anticuerpos monoclonales (planticuerpos) para su utilizacin teraputica en animales y seres humanos. Se ha conseguido expresar en las plantas IgG, IgA completos, construcciones quimricas de IgG-IgA, IgG e IgA segregables, fragmentos de cadena pesada, anticuerpos de cadena sencilla (regin variable).

Produccin de anticuerpos
Es necesario introducir todos los genes que intervienen en la sntesis y el ensamblaje de anticuerpos en la planta que se desea usar como biofactora.
Para ello existen dos estrategias:

1.Introducir los genes que codifican para las cadenas en distintas plantas realizar
cruzamientos entre las plantas seleccionar las que posean todos los transgenes deseados.

2. Coinfeccin de la planta con distintos

vectores vricos vegetales los transcritos vricos se inoculan en las hojas de la planta progreso de la infeccin sntesis de anticuerpos.

Produccin de anticuerpos
Es necesario dirigir su sntesis al RE para que se produzca un ensamblaje adecuado de los distintos componentes del anticuerpo y se realice una glicosilacin adecuada.

Estos anticuerpos no presentan ninguna diferencia en sus parmetros clnicos mas significativos (ensayos de neutralizacin, estabilidad de secreciones mucosas) con los obtenidos a partir de cultivos de clulas de mamferos.

Expresin y acumulacin en diversos tejidos vegetales.

Expresin en tejidos verdes (hojas) mayor productividad.

Expresin en semillas y tubrculos simplifica la purificacin.

Produccin de anticuerpos
Evidencias del xito de la inmunoterapia pasiva empleando anticuerpos
monoclonales producidos y purificados a partir de plantas transgnicas.

Ej. Un anticuerpo monoclonal quimrico (IgG-IgA) dirigido contra un antgeno a la superficie celular de Streptococcus mutans (caries dental). Este anticuerpo producido en tabaco fue aplicado tpicamente a los dientes de varios voluntarios y se observ que era tan eficaz como un IgG producido en ratn para prevenir la recolonizacin de las encas por Streptococcus mutans.

Lucha frente a enfermedades vegetales (de origen vrico) mediante la

clonacin y la expresin en la planta de anticuerpos generados frente al virus en un mamfero modelo.

Produccin de anticuerpos

Produccin de biofrmacos
Hormonas Interfern

Antitumorales

Productos sanguneos humanos

Enzimas

Reguladores del crecimiento

Produccin de protenas
El colgeno es una protena estructural muy utilizada en las industrias cosmtica, mdica y farmacutica (para la elaboracin de implantes, piel y cartlago artificial, injertos de huesos, etc.). Un producto muy relacionado es la gelatina que tiene aplicaciones: Estabilizante de vacunas Estabilizante de frmacos Elaboracin de cpsulas Con la expresin del colgeno en plantas se evitan los problemas asociados a su expresin en mamferos (rechazo en el caso de implantes, transmisin de enfermedades). Con la introduccin de genes que codifican para la sntesis del colgeno se ha conseguido expresar la protena en plantas de tabaco.

Recursos genticos.
La modificacin gentica de la planta da lugar a la expresin de una nueva protena que la planta no posea. Esta protena puede ser el producto de inters que se desea obtener, o bien puede ser una enzima que modifique una ruta metablica de la planta.

Agricultura molecular: Consiste en la aplicacin de la biotecnologa de plantas para introducir en una planta genes que codifican para determinadas protenas con inters biomdico o industrial para el hombre de modo que la planta sea capaz de producirlos. Ingeniera metablica: Consiste en la modificacin de las rutas metablicas de la planta para incrementar la sntesis de molculas deseable, bien mediante la introduccin de genes que codifican para enzimas que completan una ruta metablica existente en la planta, o genes que codifican para todas las enzimas de una ruta metablica que no posee la planta.

Transferencia de genes de plantas a microorganismos.

Mediante mecanismos de expresin de genes en bacteria se puede aumentar la expresin de protenas eucarioticas, que generalmente ocurre a niveles muy bajos en situaciones naturales. Podra existir tambin la posibilidad de hacer cambios precisos en polipptidos, por alteracin de la composicin de nucletidos. La mayora si no todos los genes clonados son insertados en microorganismos (E. Coli) porque los mtodos utilizados para manipular los clones en las bacterias estn muy bien practicados.

Produccin microbiana de productos de plantas.

Los nicos genes de plantas que se han expresado en E. Coli son los que codifican para:
-(prepro) taumatina. -subunidad grande de RuBisCO.

El aumento de la expresin de vectores se puede lograr por el uso de un elevado de plsmidos copia en su construccin, as aumenta la dosis de genes y por lo tanto la cantidad de producto obtenido. La terminacin de la transcripcin se logra por la incorporacin de un sitio de terminacin despus del gen clonado.

Problemas asociados de la expresin de DNA eucaritico en E.Coli

Problemas
La presencia en los genes de los eucariotas superiores de intrones. Distintas seales de transcripcin entre procariotas y eucariotas. El mRNA eucariotico no tiene el equivalente al sitio de unin de ribosomas de procariotas. Las clulas bacterianas no llevan a cabo las modificaciones posttraduccionales

Soluciones
-Clonacin de cDNA . -Uso de un gen artificial (cuando la secuencia es conocida). -Insercin de DNA construido adyacente a un promotor fuerte procariota en el vector de clonacin. -Fusin del gen extrao con la secuencia de unin al ribosoma (rbs) de un gen procariota. -Uso del rbs del gen eucariotico. -Todava no se sabe.

Modificacin de genes de plantas

El DNA eucariotico se puede insertar en un procariota en el cual la manipulacin es mucho ms fcil.

Las mutaciones puntuales se pueden hacer ahora de una manera muy precisa. La mutagnesis de oligonucletidos dirigida es el nico medio preciso para lograr la mutacin deseada.

El mtodo tiene ciertos requerimientos bsicos: el gen obviamente debe haber sido clonado y secuenciado, y la porcin precisa de la regin de DNA en la cual se va a hacer la alteracin debe ser conocida.

Transferencia de genes a plantas.

La tecnologa del DNA recombinante permite introducir en una planta material gentico procedente de otros organismos, consiguiendo que la planta modificada pase a expresar nuevas protenas o bien modifique la expresin de sus propias protenas.

La modificacin gentica puede ser estable transmisible a la descendencia y transitoria, que no se transmiten a la descendencia.

Transformacin gentica estable

Mediante la transformacin gentica estable se obtienen plantas modificadas genticamente en las que el material gentico introducido aparece en todas las clulas de la planta y se transmite a su descendencia.

Plantas transgnicas.
La principal ventaja es que la modificacin se transmite tanto por reproduccin sexual como por reproduccin asexual. Puede realizarse mediante la introduccin del material gentico en el ncleo celular o en los plastos. Es mas frecuente la transformacin del material nuclear.

Transformacin gentica

Transformacin de plastos
La transformacin de plastos es una tcnica relativamente nueva. Tiene ventaja frente a la transformacin nuclear en lo relativo a seguridad ambiental o los niveles de expresin. Los plastos poseen varias copias de un cromosoma circular de pequeo tamao denominado plastoma. No todos poseen la misma capacidad de expresar los genes que contienen, siendo los cloroplastos los mas eficaces.

El potencial de transformar cromoplastos de frutas y verduras presenta ventajas obvias para la obtencin de vacunas de subunidades comestibles.

Mtodos de transformacin estable.

Transformacin mediada por Agrobacterium. Microinyeccin. Transformacin biolistica.

Transformacin de protoplastos.

Transformacin transitoria
La expresin transitoria de genes de plantas implica la expresin de protenas recombinantes sin necesidad de transformacin del material gentico de la planta. Mediante distintos mtodos se consigue producir grandes cantidades de RNA mensajero, que se traduce a protenas en el citoplasma de parte de las clulas de la planta. Una vez traducido a protenas la planta lo degrada. Se utiliza para evaluar la funcionalidad de las construcciones que se utilizan para la transformacin estable, y para evaluar la calidad del producto que se obtiene.

Mtodos de transformacin transitoria

Agroinfiltracin Vectores virales

Optimizacin del rendimiento de las protenas recombinantes

Para conseguir un rendimiento elevado de protena recombinante es necesario :

-Optimizar todos los pasos implicados en su sntesis. -Asegurar su estabilidad una vez sintetizada protegindola de la degradacin.

Optimizacin de la sntesis
Para conseguir una sntesis elevada se optimiza la expresin gnica mediante un diseo cuidadoso del transgen que se va a introducir. Para ello se deben elegir de manera adecuada las secuencias reguladoras que son: -Las secuencias promotoras. -Las secuencias terminadoras. -Otras secuencias no traducidas como secuencias lder e intrones.

Proteccin contra la degradacin

La principal estrategia consiste en el direccionamiento de las protenas hacia compartimentos celulares. Esto se lleva a cabo mediante los pptidos seal.
Los compartimentos celulares que presentan un ambiente favorable para el almacenamiento de protenas son: -El retculo endoplasmtico -Vacuolas -Cloroplastos. Otra estrategia es su acumulacin en semillas mediante el uso de promotores especficos de semillas.

Bibliografa
Vacunas: Prevencin de enfermedades y proteccin de la salud. Biotecnologa bsica. Ratledge y Kristiansen. Avances recientes en Biotecnologa Vegetal e Ingeniera Gentica de Plantas. Antonio Bentez Burraco. Plant virus expression vectors set the stage as production platforms for biopharmaceutical proteins. Kathleen Laura Hefferon. http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0042682212003145 Assessment of the Evolution of Cancer Treatment Therapies. Manuel Arruebo et al. http://www.mdpi.com/2072-6694/3/3/3279/htm

Algunas imgenes: http://www.librosvivos.net/smtc/pagporformulario.asp?idIdioma=es&TemaClave=1063&pagina=4&est=0 http://www.vitonica.com/dietas/truco-saludable-agrega-semillas-al-desayuno http://elcuadernodecalpurniatate.blogspot.com.es/2012/09/una-enzima-muy-lenta-rubisco.html http://proyectogrupo4sesion2011.wikispaces.com/Definici%C3%B3n+de+T%C3%A9rminos++Transg%C3%A9nicos http://bloghemia.obolog.com/nadie-le-amarga-dulce-104893 http://wwwinformatizadas.blogspot.com.es/2012/10/las-celulas-micaela-masino.html