Cultivo Puro

Tcnicas de aislamiento Mantenimiento y preservacin de cultivos puros Morfologa macroscpica Morfologa microscpica

Definicin
El cultivo puro representa las condiciones artificiales para el

desarrollo de las bacterias y otros microorganismos y las

condiciones impuestas a los microorganismos mediante el manejo del laboratorio.

Para determinar las caractersticas de especies concretas de microorganismos, es imperativo que el organismo se aisl y se desarrollo en el laboratorio como un cultivo libre de otras especies.

Mtodo para aislar cultivos puros.

Tcnica de siembra por estras en placa Tcnica por difusin en placa

Tcnicas de aislamiento

Tcnica de la placa vertida

Tcnica del enriquecimiento del cultivo Tcnica de las diluciones en serie

Aislamiento de una sola bacteria

Tcnicas de siembra por estras en placa

Con un asa bacteriolgica, se pasa una porcin de la muestra a

la superficie de un medio de cultivo hecho a base de agar y se

siembra en el medio por estras en cuadrantes.

Tcnicas de siembra por difusin en placa

Para sembrar por difusin en placa, por lo comn se usa una

varilla de cristal estril para esparcir la muestra.

Esta operacin hace posible adelgazar la muestra de tal manera que en la superficie del agar quedan las bacterias separadas

unas de otras.

Tcnicas de siembra en placa

Una porcin de una colonia que se pase a un medio de cultivo en tubo viene a ser un cultivo puro.

Despus de una incubacin apropiada, el desarrollo de cada cultivo se

observa al microscopio o mediante cultivo para verificar que es puro.

Tcnica de la placa vertida

El principio de la tcnica de la placa vertida es la dilucin (adelgazamiento) de la muestra en tubos.

El medio se mantiene al estado lquido a una temperatura de 45 52 C para permitir que el inculo se distribuya

adecuadamente en el medio.

Esta tcnica se hace en forma cualitativa o cuantitativa.

Tcnica de la placa vertida

Tcnica del enriquecimiento del cultivo.

El principio de esta tcnica, es procurar un ambiente de cultivo diseado (medio de composicin conocida y condiciones especficas de incubacin) que pueda favorecer el desarrollo de cierto tipo concreto de bacterias que necesitemos pero que no sea adecuado para las dems

Tcnica del enriquecimiento del cultivo.

Los medios de enriquecimiento se usan generalmente cuando el tipo de bacteria que queremos aislar se encuentra en muy pequeas cantidades y se desarrolla con mayor lentitud que muchas de las otras especies presentes en el inculo.

Tcnica del enriquecimiento del cultivo.

Tcnica de las diluciones en serie.

Se realiza mediante diluciones seriadas.

Se basa en cuando la muestra est muy diluida contendr solamente la bacteria que buscamos.

O dependiendo de la dilucin realizada se aislara el microorganismo adecuado.

Tcnica de las diluciones en serie.

Dilucin 10-1 a 10-3 10-4 a 10-6 10-7 a 10-10

Tipo de microorganismo Hongos Levaduras Bacterias

Para el aislamiento de microorganismos se puede aplicar la tcnica de aislamiento por estra o por extensin en superficie (se trasfiere de 0.1 a 0.5 ml.)

Tcnicas de Siembra
a) Siembra por inoculacin o agitacin: Con una asa bacteriolgica, esterilizada, se toma cantidad de inculo, se introduce en el centro del medio lquido, agitndose, no tocar la pared del tubo b) Siembra por estra (en tubos de agar inclinado): Muestra de material en asa de siembra, deslizar en zigzag, empezar por superficie ms profunda

c) Siembra por picadura: Asa recta, tomar muestra, sembrar en agar semislido, forma vertical d) Siembra por dispersin-agotamiento: Asada de la muestra, sembrar en medi slido, en placa Petri e) Siembra por vertido en placa: Diluciones en varios tubos, pipeta 1cc de muestra o dilucin, agregar en placa Petri estril, se agrega medio licuado, mantener a 55C, movimientos rotatorios, solidificar

Morfologa y crecimiento de las colonias

Las colonias son masas visibles de clulas que se forman por divisin de una o varias clulas. El desarrollo de colonias sobre superficies de agar permite al microbilogo identificar las bacterias porque las especies forman a menudo colonias con una forma y aspecto caracterstico. El tamao, forma, textura y color de una colonia es propio de cada organismo. La morfologa de la colonia de una bacteria puede variar segn el medio en que crezca la bacteria.

Colonias de bacterias

Serratia marcescens Cultivada en Agar MaConkey

Pseudomonas aeruginosa Cultivada en Agar Tripticasa-soja Shigella flexneri Cultivada en Agar MacConkey Colonias de Bacillus subtilis que han crecido en medios con pocos nutrientes