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Dr.

Amrico Leyva Rojas

Los virus son los responsables de numerosas enfermedades en los seres humanos; como trmino medio una persona sufre al ao unas cuantas infecciones vricas y a lo largo de su vida unas 200, con lo que supone un grave perjuicio econmico por el coste en asistencia mdica y medicamentosa, as como falta de productividad de los pacientes en sus respectivas ocupaciones. Los virus de bacterias se llaman bacterifagos, otros virus infectan animales y vegetales. Los bacterifagos proporcionan a los microbilogos un modelo para el estudio de los virus y de la biologa molecular.

INTRODUCCIN
Al comienzo los virus fueron descritos como agentes filtrables. Su pequeo tamao les permite pasar por los filtros diseados para retener a las bacterias, a diferencia de lo que ocurre con la mayor parte de las bacterias, hongos y parsitos, los virus son unos parsitos intracelulares obligados y para replicarse dependen de la maquinaria bioqumica de la clula anfitriona. Asimismo, la replicacin de los virus ocurre ms por ensamblaje de sus componentes individuales que por fisin binaria.

INTRODUCCIN
El virus ms simple est formado por un genoma de cido desoxirribonucleico (ADN) o cido ribonucleico (ARN) empaquetado dentro de un cascarn protector de protenas y, en algunos virus, una membrana. Los virus carecen de la capacidad de producir energa o sustratos, no pueden fabricar sus propias protenas ni tampoco son capaces de replicar su genoma independientemente de la clula anfitriona. Para utilizar la maquinaria bioqumica de la clula, el virus debe adaptarse a las reglas bioqumicas que la gobiernan.

INTRODUCCIN
La mutacin y la seleccin han optimizado la estructura fsica y la gentica de los virus para que puedan infectar al ser humano y otros organismos anfitriones. Para conseguirlo, el virus debe ser capaz de transmitirse en unas condiciones ambientales potencialmente adversas, debe atravesar la piel u otras barreras protectoras del anfitrin, adaptarse a su maquinaria bioqumica para poder replicarse y escapar de los fenmenos de eliminacin originados por la respuesta inmunitaria del organismo anfitrin.

DIFERENCIAS ENTRE VIRUS. BACTERIAS, MICOPLASMAS, CLAMIDIAS Y RICKETTSIAS


Virus
Acidos nucleico Fisin binaria Enzimas metenergtico Ribosomas Replicacin en medios inertes Tamao ADN o ARN No No No* No 20-300 um

Rickettsias Clamidias
Ambos + + + No 1 um Ambos + + No 300 um

Micoplas mas
Ambos + + + + 250 um.

Bacterias
Ambos + + + + 0.7 10 um

Algunos virus poseen ribosomas de origen celular. Por ejemplo arenavirus.

Propiedad Crecimiento en medio artificial Divisin binaria Contiene: DNA + RNA DNA o RNA Reproduccin por AN aislado Variacin de tamao Sistema energtico Ribosomas Contiene ac. Murmico
1. 2. 3.

Bacteria S S S No

Mollicutes S S S No

Rickettsias No S S No

Clamidias No S S No

Virus No No No S

No
S S S S3

S
S S S No

No
S S S S

No
S S S S

S1
No No No2 No

No es una propiedad absoluta, slo la presentan los virus RNA positivos y los DNA virus. Los arenavirus incluyen ribosomas en sus partculas, pero no son funcionales. Hay excepciones.

Familia de virus Parvovirus Papovavirus Adenovirus Hepadnavirus

Envolvura No No No Si

Simetra de la cpside Icosadrica Icosadrica Icosadrica Icosadrica

Tamao de la partcula (nm) 22 55 75 42

DNA PM (x106) 2 3a5 23 1.5

Estructura del DNA* TS, lineal TD, circular superenrollado TD, lineal TD, circular incompleta

Virus importantes en medicina Virus B19 Virus del papiloma Adenovirus Virus de la hepatitis B Virus del herpes simple, virus de varicela-zoster, citomegalovirus y virus de Epstein-Barr Virus de la viruela y virus de la vaccinia

Herpesvirus

Si

Icosadrica

100+

100 a 150

TD, lineal

Poxvirus

Si

Compleja

250x400

125 a 185

TD, lineal

* TS, tira sencilla; TD, tira doble + La nucleocpside de los herpesvirus tiene 100 nm, pero su envoltura vara de tamao. El virus entero puede ser tan grande como 200 nm de dimetro.

FAMILIA

ESTRUCTURA DEL VIRIN

ESTRUCTURA Y PESO MOLECULAR DEL GENOMA

MIEMBROS REPRESENTATIVOS

Parvovirus

Cbica, desnuda

cu lineal (1-3x106)

Hepatitis B

Cbica, con cubierta

cd ciruclar (2x106), brecha en una cadena; protena unida cd circular (3-5 x 106)
cd lineal (20-25x106); protena unida cd lineal (80-130x106)

Papovavirus Adenovirus Virus del herpes

Cbica, desnuda Cbica, desnuda Cbica, con cubierta

Poxvirus

Helicoidal, con cubierta

cd lineal (160-200x106)

Virus diminuto de ratn; adenovirus relacionados Virus de la hepatitis B en seres humanos, virus de la hepatitis woodchuck Papilomavirus, poliomavirus (ratn), SV40 (mono) Virus de la enfermedad respiratoria humana y animal Tipos de virus del herpes simple 1 y 2; virus de la varicela zoster; citomegalovirus; virus de Epstein-Barr; virus del herpes humano 6, virus del herpes humano 8 (sarcoma de Kaposi Viruela; vaccinia; molusco contagioso; virus de fibroma y mixoma de conejo

Abreviaturas: cu, de cadena nica; cd, de cadena doble.

Familia Piconaviridae Reoviridae Togaviridae Orthomyxoviridae Paramyxoviridae Rhabdoviridae Retroviridae Arenavirudae Bunyaviridae Coronaviridae Parvoviridae Papovaviridae Adenoviridae Herpesviridae. Poxviridae

Genero Enetrovrus Rhinovrus Reo virus Alphavrus Influenzavrus Mobilvirus Lyssa virus Ninguno Arenavirus Bunyavirus Coronavrus Parvovrus Papillomavirus Mastadenovrus Herpesvirus Orthopovrus

Enfermedad causada Infecciones intestinales, Polio, Resfriados Infecciones intestinales y respiratorias Fiebre amarilla Gripe Sarampin, Pareras, Infecciones respiratorias Rabia Tumores de animales Meningitis Encefalitis Infecciones respiratorias Coinfecciones con adenovirus Verrugas Infecciones respiratorias Herpes genital, Herpes zoster, Varicela Viruela

cido nucleico RNA RNA RNA RNA RNA RNA RNA RNA RNA RNA DNA DNA DNA DNA DNA

Simetra 1 Icosadrica Icosadrica Icosadrica Helicoidal Helicoidal Helicoidal

Envoltura No No S S S S S S S si

Icosadrica Icosadrica Icosadrica Icosadrica Compleja

no No No S Cubierta compleja

Familia

Estructura del virin

Estructura y peso molecular del genoma

Miembros representantivos

Hepatitis B Picornavirus
Arenavirus Calicivirus Rabdovirus Retrovirus Togavirus Ortomixovirus Coronavirus Filovirus Bunyavirus Paramixovirus Reovirus

Cbica, con cubierta Cbica, desnuda Helicoidal, con cubierta Cbica, desnuda Helicoidal, con cubierta Cbica, con cubierta Cbica, con cubierta Helicoidal, con cubierta Helicoidal, con cubierta Helicoidal, con cubierta Helicoidal, con cubierta Helicoidal, con cubierta Cbica, desnuda

cu circular (-) (6 x 103) cu lineal (+) (2-3 x 106); protenas unidas 2 segmentos cu lineales (+/-) (3 x 106) cu lineal (+) (2.6 x 106) cu lineal (-) (3-4 x 106) cu lineal (+), diploide (3-4 x 106) cu lineal (+) (4 x 106) 8 segmentos cu lineales () (5 x 106) cu lineal (+) (5-6 x 106) cu lineal (-) (5 x 106) 3 segmentos cu lineales (+/-) (6 x 106) cu lineal (-) (6-8 x 106) 10 segmentos cd lineales (15 x 106)

Virus de la hepatitis humana Enterovirus humanos: virus de polio, coxsackievirus, ecovirus; rinovirus; virus de fiebre aosa de bovino; hepatitis A Virus de Lassa; virus de coriomeningitis linfoctica de ratn Virus de exantema vesicular; virus similares al Norwaik de seres humanos Virus de la rabia; virus de estomatitis vesicular bovina Virus tumoral de RNA de ratn, aves y gatos; virus visna de las ovejas; virus de inmunodeficiencia humana (leucemia de clulas T humanas y sndrome de inmunodeficiencia adquirida) Alfavirus: virus de Sindbis y virus del bosque de Semliki; flavivirus; virus del dengue y virus de la fiebre amarilla; virus de la rubola; virus de enfermedad mucosa Virus de influenza tipos A, B y C en ser humano, cerdo y caballo Virus respiratorio de ser humano; virus de diarrea de becerro; virus entrico de cerdo; virus de hepatitis de ratn Virus de Marburg y bola Virus de la fiebre del Valle de Rift; virus de bunyamwera; hantavirus Virus del sarampin; paperas; virus de la enfermedad de Newcastle; virus del moquillo canino Reovirus humanos; orbivirus; virus de la fiebre de garrapata de Colorado; virus de enfermedad africana del caballo; rotavirus humano

RICKETTSIAS CLAMIDIAS VIRUS VIROIDES VIRUSOIDES

PLASMIDOS Y EPISOMAS TRANSPOSONES ELEMENTOS DE INSERCIN

CLASIFICACIN
Los virus abarcan desde los parvovirus y picornavirus pequeos y de estructura simple hasta los grandes y complejos poxvirus y virus herpes. En ocasiones sus nombres revelan ya sus caractersticas, las enfermedades que causan o, incluso, el tejido o el lugar geogrfico donde fueron identificados por vez primera. Nombres como picornavirus (pico, pequeo; rna, cido ribonucleico) o togavirus (toga, manto en griego, refirindose a la envoltura membranosa que rodea al virus) describen la estructura del virus.

Definicin y propiedades de los virus


Los virus son agentes filtrantes.

Los virus son parsitos intracelulares obligados.


Los virus no son capaces de producir energa

independientemente de una clula anfitrin. Los genomas vricos pueden ser de ARN o de ADN, pero no de ambos. Los virus poseen una morfologa de cpside sin envoltura con envoltura. Los componentes de los virus se ensamblan y no se replican por divisin.

1. Los virus son partculas elementales con vida y lnea

2. 3. 4.

5.

germinal propia, formados por un solo tipo de cido nucleico y protenas (glico y/o lipo). Son parsitos absolutos y agentes infecciosos generalmente causantes de enfermedad. Unidades infecciosas que contienen RNA o DNA encerrado en una cubierta protectora. Unidades infecciosas con independencia gentica que contienen RNA o DNA como genoma asociado a macromolculas, fundamentalmente polipptidos, que definen su estructura y capacidad de asociarse a la clula que infectan. Son sistemas bioqumicos complejos.

Tambin las hay ms simples o ingeniosas como:


a)

Un virus es un paquete proteico o liproteico de cido nucleico genmico. Un virus es un virus (Lwoff). Los virus son las vctimas de la ignorancia a las que se les atribuye ser la causa de cualquier enfermedad.

b) c)

Queda como un ejercicio individual elegir aquella definicin que ms se adapte a la imagen mental evocada por la palabra virus. Eso s, no hay que olvidar que la elegida debe diferenciarlos claramente de otros microorganismos o agentes infecciosos.

Consecuencias de las propiedades de los virus


Los virus no son seres vivos. Para soportar las condiciones de la naturaleza los

virus deben ser infecciosos. Los virus deben ser capaces de utilizar los procesos de las clulas del anfitrin para producir sus componentes (ARN mensajero vrico, protenas y copias idnticas del genoma). Los virus deben codificar cualquier proceso que no les proporcione la clula infectada. Los componentes del virus deben autoensamblarse.

Componentes del virin bsico

ADN

o
ARN

Protenas estructurales

Enzimas + y cido nucleico = -protenas de adherencia

Nucleocpside

Virus de cpside sin envoltura

Nucleocpside

Glucoprotenas y membrana

Virus con envoltura

EL VIRIN
El virin (la partcula vrica) contiene un genoma de cido nucleico envuelto en una capa de protenas (cpside) o en una membrana (envoltura). Asimismo, el virn puede contener ciertas enzimas accesorias u otras protenas para facilitar la replicacin inicial en la clula. La cpside o las protenas de fijacin del cido nucleico pueden asociarse al genoma y formar una nucleocpside, que puede ser la misma del virin o bien estar rodeada de una envoltura. El genoma del virus est formado por ARN o ADN. El ADN puede ser monocatenario o bicatenario, lineal o circular. El ARN puede ser de sentido positivo (+) (como el ARN mensajero [ARNm] o de sentido negativo (-) (anlogo al negativo de una fotografa), bicatenario (+/-) o de doble sentido (conteniendo regiones de ARN + y unidas por sus extremos).

a)

b)

Virus DNA:

Virus RNA:

Propiedades de los viriones de los virus ADN humanos


Genoma* Familia Poxviridae Herpesviridae Masa molecular x 106 Daltons 85-140 100-150 Naturaleza bc, lineal bc, lineal Forma De ladrillo, con envoltura Icosadrica, con envoltura Icosadrica Esfrica, con envoltura Icosadrica Virin Tamao (nm) 300 x 240 x 100 Cpside, 100-110 Envoltura, 120-200 70-90 42 45-55 ADNpolimerasa+ + +

Adenoviridae Hepadnaviridae Polyoma y papilloma viridae Parvoviridae

20-25 1,8 3-5

bc, lineal bc, circular bc, circular

+ + -

1,5-2

mc, lineal

Icosadrica

18-26

bc, bicatenario; mc, monocatenario. * El genoma es invariablemente una sola molcula + Polimerasa codificada por el virus Polimerasa presente en el virin Aunque la molcula circular es de doble cadena en la mayor parte de su longitud, contiene una regin con una sola cadena. Transcriptasa inversa.

Propiedades de los viriones de los virus ARN humanos


Genoma* Familia Paramixoviridae Ortomixoviridae Coronaviridae Arenaviridae Rhabdoviridae Filoviridae Bunyaviridae Retroviridae Reoviridae Picornaviridae Togaviridae Masa molecular x 106 Daltons 5-7 5-7 6-7 3-5 4-7 4-7 4-7 2 x (2-3) 11-15 2,5 4-5 Naturaleza mc, mc, -, seg mc, + mc, -, seg mc, mc, mc, mc, + bc, seg mc, + mc, + Forma Esfrica Esfrica Esfrica Esfrica De proyectil Filamentosa Esfrica Esfrica Icosadrica Icosadrica Icosadrica Tamao (nm) 150-300 80-120 80-130 50-300 180 x 75 800 x 80 90-10 80-110 60-80 25-30 60-70 Virin Polimerasa en el virin + + + + + + + + +

Envoltura
+ +

++ ++ + + ++ +

Flaviviridae
Calciviridae

4-7
2,6

mc, +
mc, +

Esfrica
Icosadrica

40-50
35-40

+
-

bc, bicatenario; mc, monocatenario; seg, segmentado; + o -, polaridad del cido nucleico monocatenario. * Algunos virus con envoltura son pleomrficos (en ocasiones filamentosos) + Sin protena matricial El genoma posee dos molculas idnticas de ARN monocatenario Transcriptasa inversa.

Tamaos relativos de virus y bacterias

Estructura del virus cpside sin envoltura


Componente Protena

Propiedades Es estable ante los siguientes factores ambientales: Temperatura cido Proteasas Detergentes Desecacin Es liberada de clula por lisis

Estructura del virus: con envoltura


Componentes
Membrana Lpidos Protenas Glucoprotenas Propiedades

Es lbil (se altera) ante los siguientes factores ambientales: cido Detergentes Desecacin Calor Modifica la membrana celular durante la replicacin Es liberada por gemacin y lisis celular

Nucleocapside ADN ARN Protenas Informacin gentica Infectividad

Nucleoide

Cpside

Proteccin del nucleoide Unin a receptores celulares Determinantes antignicos Proteccin del nucleide

Envoltura

Lipoprotenas

Unin a receptores celulares Determinantes antignicos en glicoprotenas

Propiedad Tipo de cido nucleico Proteinas Membrana lipoprotenica Ribosomas Mitocondrias Enzimas Multiplicacin por fisin binaria

Virus DNA o RNA, pero no los dos Algunas Envoltura presente en algunos virus. Ausentes* Ausentes Ninguna o unas cuantas No

Clula DNA y RNA Numerosas Membrana celular presente en todas las clulas. Presentes Presentes en clulas eucariontes Numerosas Si (la mayora de las clulas)

Las arenavirus tienen algunos ribosomas no funcionales

Pasos de la replicacin de los virus


1. Reconocimiento de la clula diana 2. Unin 3. Penetracin 4. Prdida de envoltura 5. Sntesis macromolecular a. Sntesis de ARN mensajero precoz (ARNm) y protenas no estructurales: genes para enzimas y protenas de unin del cido nucleico b. Replicacin del genoma c. Sntesis de ARNm tarda y protenas estructurales d. Modificacin postraduccin de la protena 6. Ensamblaje del virus 7. Gemacin de los virus con envoltura 8. Liberacin del virus

Ejemplos de protenas de adherencia vricas


Familia de virus Picornaviridae Adenoviridae Reoviridae Togaviridae Rhabdoviridae Rinovirus Adenovirus Reovirus Rotavirus Virus del bosque Semliki Virus de la rabia Virus VAP Complejo VP1-VP2-VP3 Protena fibrosa -1 VP7 Complejo E1-E2-E3 gp Protena G gp

Ortomixoviridae
Paramixoviridae Herpesviridae Retroviridae

Virus de la gripe A
Virus del sarampin Virus de Epstein-Barr

HA gp
HA gp gp350 y gp220

Virus de la leucemia murina Gp70 Virus de la inmunodeficiencia humana gp120

Gp, glucoprotena; HA, hamaglutinina; VAP, protena de adherencia al virus

Ejemplos de receptores vricos


Virus Virus de EpsteinBarr Virus de la inmunodeficiencia humana Rinovirus Virus de la poliomielitis Virus del herpes simple Linfocito B Linfocito T cooperador Clula diana Receptor* Receptor CR2 del complemento C3 (CD21) Molcula CD4 y corrector quimiocina ICAM-1 (protena de superfamilia de inmunoglobulinas) Protena de superfamilia de inmunoglobulinas Mediador de la entrada del virus herpes (HvEA), nectina 1

Clulas epiteliales Clulas epiteliales Numerosas clulas

Virus de la rabia

Neurona

Receptor de acetilcolina, NCAM (molcula de fijacin celular neural)


cido silico Antgeno P de los eritrocitos (globsido)

Virus de la gripe A Parvovirus B19

Clulas epiteliales Clulas precursoras de la serie eritroide

ICAM-1, protena de superfamilia de inmunoglobulinas * Tambin pueden existir otros receptores para estos virus

GENTICA VRICA
En los genomas vricos ocurren con facilidad mutaciones espontneas, con lo que aparecen cepas vricas nuevas con propiedades diferentes a los virus parentales o virus salvajes (wild-type virus). Estas variantes pueden identificarse por sus secuencias de nucletidos, sus diferencias antignicas (serotipos) o por las diferencias en sus propiedades estructurales o funcionales. La mayor parte de las mutaciones no presentan efectos ni resultan nocivas para el virus. Las mutaciones de los genes esenciales provocan la inactivacin del virus, pero las mutaciones de otros genes pueden producir la aparicin de resistencias a los frmacos antivirales o bien modificar la antigenicidad o patogenicidad del virus.

VECTORES VRICOS PARA EL TRATAMIENTO


Los virus manipulados genticamente pueden constituir unos excelentes sistemas de administracin de genes extraos. Los virus pueden emplearse para realizar un tratamiento de sustitucin de genes, como vacunas para favorecer la inmunidad frente a otros genes y tumores, o pueden actuar como asesinos dirigidos a determinados tumores. Las ventajas de la utilizacin de los virus radican en que pueden ser fcilmente amplificados por replicacin en las clulas adecuadas y en que se dirigen a tejidos diana especficos para introducir el ARN o el ADN en el interior de las clulas. Entre los virus que se estn desarrollando como vectores figuran los retrovirus, los adenovirus, los virus del herpes simple, virus adenoasociados (parvovirus) y poxvirus (por ej., el virus de la vaccina y el virus de la viruela de los canarios) e, incluso, algunos togavirus.

BASES BIOGENTICAS
a)En la siguiente discusin se presentan las bases biolgicas y

genticas de estos fenmenos, con particular atencin a tres temas. 1. Los distintos virus tienen estructura gentica muy diferente y esta diversidad se refleja en sus procedimientos de replicacin. 2. Por su tamao pequeo, los virus han logrado un grado muy alto de economa gentica. 3. Los virus dependen en buena medida de las funciones de la clula husped y por lo tanto son difciles de combatir en el campo mdico. Sin embargo, presentan pasos singulares en sus ciclos de replicacin que constituyen blancos potenciales para la terapia antiviral. La ventaja de la construccin de la partcula viral a partir de subunidades protenica idnticas es doble: 1) reduce la necesidad de informacin gentica y 2) favorece el autoensamblaje; es decir, no se requieren enzimas ni energa. De hecho, se han acoplado partculas virales funcionales en un tubo de ensayo mediante la combinacin de cido nucleico purificado con protenas tambin purificadas, en ausencia de clulas, fuente energtica y enzimas.

PROTENAS VIRALES
b) Las protenas virales desempean varias funciones importantes. Las de la capsides protegen el material gentico y median la adherencia del virus a receptores especficos en la superficie de la clula husped. Esta interaccin de las protenas virales con el receptor celular es el principal determinante de la especie y de la especificidad de rgano. Algunas de las protenas interiores se asocian con el cido nucleico, por ejemplo, cido nucleico polimerasas, que son esenciales para la replicacin. Las protenas similares a las histonas tienen una funcin reguladora o pueden neutralizar la carga negativa del cido nucleico durante el ensamblaje de la partcula viral y tambin se localizan internamente.

Calor. La mayora se inactivan a 56C durante 30 min. a 100C en pocos segundos. Fro. Dada su estabilidad frente a bajas temperaturas, muchos virus pueden almacenarse a 40 C o preferiblemente a 70 C; algunos son parcialmente inactivados en el proceso de congelacin y descongelacin. Sequedad. Variable; algunos sobreviven a sta, mientras que otros quedan inmediatamente inactivados. Radiacin ultravioleta. Los inactiva. Cloroformo y ter. Los virus con envoltura lipdica son inactivados, mientras que el resto son resistentes. Este procedimiento se utiliza como criterio de clasificacin de los virus. Agentes oxidantes. Los virus son inactivados por formaldehido, cloro, yodo y perxido de hidrgeno. Fenoles. La mayora son relativamente resistentes.

Los virus pueden afectar a las clulas de tres maneras: Muerte celular. La infeccin es letal y mata a la clula causando un efecto citoptico (ECP). Transformacin celular. La clula no muere, pero es transformada en otra con caracteres de malignida (clula cancerosa).

Infeccin latente. El virus permanece en el interior de la clula en estado de actividad potencial, pero n produce efecto detectable sobre su funcin.

Adherencia y penetracin por el virin precursor Desnudamiento del genoma viral Sntesis* de mRNA temprano** Sntesis de protena viral temprana Replicacin del genoma viral Sntesis de mRNA viral tardo Sntesis de protena viral tardo Sntesis de protena viral tardo Ensamblaje de la progenie viral Liberacin de viriones de la clula
* En algunos casos, el genoma viral es fundamentalmente equivalente al mRNA; por tanto, no se requiere sntesis temprana de mRNA. ** Temprano se define como el periodo anterior a la replicacin del genoma. No todos los virus muestran una distincin entre funciones tempranas y tardas. En general, las protenas tempranas son enzimas, en tanto que las tardas son componentes estructurales del virus.

INVASION E INFECCION POR VIRUS

Por lo general, el ciclo de multiplicacin viral se divide en las siguientes fases: a) adsorcin a la clula husped, b) penetracin o entrada, c) rotura de la cubierta para liberar el genoma, d) produccin de los componentes del virin, e) ensamblaje y f) liberacin de la clula. Esta serie de sucesos, en ocasiones con ligeras variaciones, describe lo que se llama respuesta productiva o ltica; empero, ste no es el nico resultado posible de la infeccin viral, Algunos virus entran a un tipo de relacin muy distinto con la clula husped, en el cual no se producen nuevos virus, la clula sobrevive y se divide y el material gentico viral persiste de forma indefinida en estado de latencia. Este resultado de una infeccin se denomina respuesta no productiva, a la cual tambin se da el nombre de lisogenia en el caso de bacterifagos y ciertas veces se vincula con transformacin oncgena por virus animales. (El uso del trmino transformacin debe diferenciarse de la transformacin del DNA bacteriano). El efecto de una infeccin depende de la combinacin especfica virus-husped y otros factores, como el entorno extracelular, la multiplicidad de la infeccin y la fisiologa y estado de desarrollo de la clula. Los virus que slo pueden penetrar en relacin productiva se denominan virus lticos o virulentos. Los virus que pueden establecer ya sea una relacin productiva o no productiva con sus clulas husped se conoce como virus templados. Algunos virus templados pueden reactivarse o "inducirse" para salir del estado de latencia e ingresar a la respuesta productiva. El hecho de que la induccin ocurra depende de la combinacin especfica virus-husped, la fisiologa de la clula y la presencia de estmulos extracelulares.

Virus
Influenza A Reovirus Adenovirus Epstein-Barr Herpes simple Herpes humano 7 HIV Coronavirus humano Rinovirus humano Sarampin Virus de la polio Virus de la rabia SV40 Vaccinio

Receptor
Acido silico cido silico Receptor EGF Integrina.s CR2 Sulfato de heparina CD4 CD4 CXCR4 y CCR5 Aminopeptidasa N ICAM-1 CD46 PVR Receptor de acetilcolina MHC I Receptor EGF

Funcin celular
Glucoprotena Glucoprotena Sealizacin . Enlace con la matriz extracelular Receptor de complemento Glucoprotena Superfamilia de las inmunoglobulinas. Superfamilia de las inmunoglobulinas Quimiocinas receptoras Proteasa Superfamilia de las inmunoglobulinas Regulacin de complemento Superfamilia de las inmunoglobulinas Sealizacin Superfamilia de las inmunoglobulinas : Sealizacin

Abreviaturas. EQF. factor de crecimiento endotelial; HIV. Virus de inmunodeficiencia humana: ICAM, molcula de adhesin intercelular; MHC. complejo mayor de histocompatibilidad; PVR, receptor del virus de la polio.

1. Tcnicas microscpicas: * Microscopio ptico. Para observacin del efecto citoptico de los virus sobre cultivos celulares, Microscopio electrnico. 2. Tcnicas de cultivo y aislamiento de virus: Tcnicas de inoculacin en animales de laboratorio. Tcnicas de inoculacin en embrin de pollo. Tcnicas de cultivo celular. 3. Tcnicas inmunolgicas: * Reaccin de fijacin del complemento. * Mtodo RIA. * Mtodo ELISA. * Hemaglutinacin e inhibicin de la hemaglutinacin. * Determinacin de la inmunoglobulina M. * Reacciones de neutralizacin.

Salvo raras excepciones, el diagnstico de laboratorio de las infecciones virales es lento, de modo que por lo general el paciente se encuentra ya en fase de convalecencia al obtener el resultado. Pero, aunque el diagnstico de laboratorio se encuentra limitado en cada caso particular, es de gran importancia en la investigacin mdica y epidemiolgica. El virus de la viruela es una excepcin, ya que tiene un rpido diagnstico, lo que facilita notablemente el control de las epidemias. El diagnstico de laboratorio se basa en tres tcnicas fundamentales: * Aislamiento del virus en histocultivos. * Serologa, o demostracin de anticuerpos frente al virus. (niveles) * Demostracin directa del virus o de antgenos vricos a partir de frotis de las lesiones. (intra/extracelulares).

El cultivo de virus es un prerrequisito esencial para su estudio. Generalmente no se utiliza al husped natural, sino que se recurre a animales de laboratorio o a cultivos de clulas in vitro. La multiplicacin de los virus en ambos sistemas permite el desarrollo de distintos aspectos virolgicos: aislamiento, identificacin, multiplicacin, cuantificacin y determinacin de las propiedades biolgicas, bioqumicas y serolgicas.

Durante la primera mitad del siglo pasado predominaba el misticismo en el desarrollo de cultivos de clulas in vitro. El xito dependa de condiciones experimentales muy precisas. Por mucho tiempo slo se lograba el crecimiento de clulas de cortes de tejidos extirpados de animales y mantenidos en cogulos formados por extractos de esos tejidos y plasma o suero del mismo animal. Las contaminaciones bacterianas impedan una continuidad en el crecimiento.

Para mantener las mismas condiciones fisiolgicas, de presin osmtica, pH, as como las concentraciones adecuadas de iones inorgnicos esenciales, in vitro como in vivo, se precisa una solucin de sales equilibrada (Balanced Salt solution, BSS) que es la base de todos los medios de cultivo qumicamente definidos. Algunos medios contienen glucosa que proporciona los hidratos de carbono necesarios. Los medios que se emplean en cultivo celular son los siguientes: BSS de Hanks. BSS de Earle, con mayor capacidad tampn que el anterior. BSS suplementado con vitaminas, aminocidos, y otros nutrientes para formar medios sintticos. Los medios disponibles en el mercado ms utilizados en virologa son: N 199. BME: Medio Basal de Eagle. MEM: Mnimum Esential Mdium. Contiene las concentraciones ptimas de nutrientes esenciales, vitaminas, aminocidos, es el ms utilizado. Se conserva a 4C. Se sabe que la luz fluorescente va en detrimento de los medios de cultivo, porque provoca la formacin de fotoproductos txicos derivados de la riboflavina y triptfano presentes en el medio. Por lo que se recomienda que el medio lquido se conserve en la oscuridad.

El cultivo celular es la tcnica idnea y la ms utilizada actualmente para el cultivo y aislamiento de virus, pues presenta muchas ventajas sobre la inoculacin en animales vivos y en embrin de pollo. Los cultivos celulares son de tres tipos segn las clulas que lo constituyen: a) Cultivos primarios: Se obtienen clulas que proceden de un organismo vivo. Estas clulas se obtienen por fragmentacin del tejido y dispersin de las clulas de forma apropiada para obtener una monocapa en la que se reproducirn los virus. Se pueden emplear clulas de rin de mono o de rin embrionario humano. Las clulas as obtenidas tienen una pequea capacidad de reproduccin aunque solamente se pueden emplear durante 2-3 semanas. b) Lneas celulares diploides: Constituidas por subcultivos obtenidos a partir de cultivos celulares primarios. Se reproducen rpidamente y no se pueden exceder de 50 subcultivos. Ejemplo de estos son las clulas fbroblsticas embrionarias. c) Lneas celulares continuas o heteroploides: Son obtenidas a partir de tumores humanos malignos o de clulas animales tales como rin de mono, rin de hmster, etc. Ejemplo de ellas son: lneas HeLa, Vero, K-13. En las clulas de rin de mono rhessus pueden aislarse, a travs de cultivos primarios, virus como Adenovrus, Echovrus, virus de la poliomelitis, virus Coxackie B, virus de la Parainfluenza, virus de las paperas, virus respiratorio sincitial. En clulas de pulmn humano, a travs de lneas celulares diploides, se pueden aislar virus como; Adenovirus, virus del Herpes simple, virus de la poliomelitis, virus Coxackie B, virus respiratorio sincitial. En clulas de pulmn humano, a travs de lneas celulares diploides, se pueden aislar como: adenovirus, virus del Herpes simple, virus de la poliomelitis, virus Coxackie B, virus respiratorio sincitial.

Antes de la generalizacin del cultivo tisular se utilizaron abundantemente los huevos frtiles de gallina. En la actualidad este procedimiento ha perdido vigencia al quedar reemplazado por el aislamiento del virus mediante el citado cultivo tisular. Existen tres vas principales de inoculacin Esquema de embrin de pollo, que muestra las vas de inoculacin para el aislamiento vrico. 1. En el interior de la membrana corioalantoidea. 2. En la cavidad amnitica. 3. En la cavidad alantoidea. Se utilizan embriones comprendido entre los 7 y los 12 das; la edad ptima para cada va de inoculacin depende del desarrollo de los distintos tejidos; as, por ejemplo, la cavidad amnitica tiene su mximo a los 10 12 das.

Sitio de accin

Medicamentos eficaces

Acciones tempranas (entrada o desnudamiento del virus)


Sntesis de cido nucleico por DNA y RNA polimerasas virales

Amantadita, rimantadina
Aciclovir, ganciclovir, vidarabina, idoxuridina, trifluridina, foscarnet, azidotimida, dideoxiinosina,. Didesoxicitidina y ribavirina En investigacin Interfern y metisazona Fase experimental

Otras enzimas especficas de virus Sntesis de proteinas dirigida de virus Escisin de polipptidos precursores

Ensamblaje de partcula, incluyendo la protena de la matriz.


Liberacin de la partcula por germinacin.

En investigacin
Manipulacin gentica

Agente Virus Viroide Virusoide Prin

cido Nucleico DNA o RNA RNA RNA NO?

Cpside SI NO NO Part. Prot.

Agente Envoltura Patgeno SI o NO NO NO NO SI SI SI SI

RESUMEN DE AGENTES ANTIVIRALES:


Mecanismo de accin Inhibicin del descubrimiento y penetracin virales Agente antiviral Amantadina Rimantadina Flu A Flu A Espectro vial

Inhibicin de neuraminidasa
Inhibicin de polimerasa de DNA viral

Oseltamivir Zanamivir
Aciclovir Fanciclovir Penciclovir Valaciclovir Ganciclovir Foscarnet Cidofovir Trifluridina

Flu A, Flu B Flu A, Flu B


HSV, VZV HSV, VZV HSV HSV, VZV CMV, HSV, VZV CMV, HSV resistente CMV HSV, VZV

Mecanismo de accin

Agente antiviral

Espectro vial

Inhibicin de transcriptasa inversa viral

Cidovudina Didesoxiinosina Didesoxicitidina Estavudina Lamivudina Nevirapina Delavirdina Efavirenz Saquinavir Indinavir Ritonavir Nelfinavir Lopinavir Interfern a

HIV HIV HIV HIV HIV, HBVb HIV HIV HIV HIV HIV HIV HIV HIV HBV, HCV, HPV

Inhibicin de proteasa viral

Inhibicin de sntesis proteica

Inhibicin de polimerasa de RNA

Ribavirina

RSV, HCVb, fiebre de Lassa


CMV

Inhibicin antisentido de sntesis Fomivirsn de mRNA viral

Basndose en aspectos clnicos , podemos dividir de la siguiente manera : a) INFECCIONES LOCALES .- Aqu las lesiones celulares y la multiplicacin del virus solo afectan el foco inicial, el virus puede afectar primero una clula y luego pasar de una clula a otra. b) INFECCIONES OCULTAS .- Pueden ocurrir muchas infecciones, de tipo tanto citoltico como de estado estable, sin que aparezca sntomas. Estas infecciones son importantes en medicina, pues confieren inmunidad sin enfermedad clnica, se explican por la naturaleza del virus o el estado inmunolgico del husped c) INFECCIONES CON VIRUS LENTOS .- Se pueden definir como un grupo de entidades que "crecen provocar por virus para loe cuales los periodos de incubacin son muy largos y las expresiones clnicas de tipo patolgico son de progresin relativamente lenta. El signo principal de estas infecciones es la presencia de un agente viral oxenoma en un husped que, en ltima instancia, sufre lesiones celulares y tisulares por efecto del virus, as las respuestas inmunolgicas en el husped que normalmente son eficaces para eliminar los virus comentes no son estimuladas o resultan inoperantes, adems, en algunos casos puede producir verdadera lesin celular y tisular a consecuencia de la propia respuesta inmune, tales infecciones por virus lentos se han observado en el hombre y en los animales.

Los virus forman una variedad especial de agentes infecciosos, que son parsitos nter celulares obligados. Estos se diferencian de los dems tipos de microorganismos por su: * Organizacin, * Composicin y * Mecanismo de duplicacin. La partcula viral completa se puede considerar como un fragmento bsico de subsnela gentica, de DNA RNA, rodeada de una capa protectora de protenas que son agentes de transmisin de una clula husped a otra. El espectro de enfermedades producidas va desde las infecciones virales agudas, en las cuales la interaccin de virus y respuesta inmune del husped origina aclaramiento del virus inmunidad, o bien diseminacin, infeccin y muerte, hasta formas ms crnicas de infeccin viral, en !as cuales tienen lugar una reproduccin viral prolongada, junto con respuesta inmune, causa de lesin y origen de enfermedad. Se lograron erradicar muchas infecciones virales empleando vacunas muy eficaces que estimulan las respuestas inmunolgicas especificas. Es probable que se dispongan pronto, en teraputica, de otros tipos de agentes que estimulan el sistema inmunolgico inespecfico, por ejemplo, inmunipotenciadores. 1

La multiplicacin de los virus en cultivos de clulas puede comprobarse por procedimientos bioqumicos o serolgicos que indican el incremento de macromolculas virales, como enzimas o antgenos, o de partculas virales. Sin embargo, para los cultivos que crecen adheridos a un soporte, los mtodos usados son ms sencillos y consisten en la evaluacin de alteraciones morfolgicas de las clulas, modificacin de sus membranas (hemadsorcin) o por fenmenos de interferencia viral.

La mayora de los virus producen alteraciones en las clulas donde multiplican, de modo tal que los cultivos infectados desarrollan con el transcurso del tiempo cambios en su morfologa, que ponen en evidencia la accin ejercida por el virus sobre la clula. Dichas alteraciones se conocen con el nombre de accin o efecto citoptico (ACP), siendo caractersticas de cada sistema virus-clula. Asimismo, los virus responsables de esos cambios son llamados citopatognicos.

Las alteraciones que generalmente se observan son: a) Destruccin de la monocapa; con redondeamiento y desprendimiento de las clulas debido a la muerte provocada por el virus. b) Formacin de clulas multinucleadas; llamadas sincicios o policariocitos. c) Desarrollo de cuerpos de inclusin; agrupaciones de macromolculas virales que se observan en el citoplasma o en el ncleo, donde el virus de rabia genera los corpsculos de Negri. d) Transformacin; el cultivo infectado presenta focos de clulas que crecen en varios planos, los que inducen tumores al ser inoculados en animales.

Los descubrimientos que posibilitaron simplificar el cultivo de clulas fueron: a) El uso de antibiticos para prevenir la contaminacin bacteriana. b) La eficacia de la tripsina, una enzima proteoltica que permite disociar las masas de tejido en sus clulas individuales. c) EL desarrollo realizado por Eagle de medios definidos que permiten el crecimiento de muchos cultivos celulares.

La virologa como toda ciencia biolgica experimental se ha visto beneficiada por la aplicacin de las tcnicas moleculares que ensea la ingeniera gentica. As es como en los ltimos aos se ha ido develando la intricada relacin del virus con la clula que parasita, en especial, la exquisita regulacin de los genes virales, que deviene en la produccin de nuevos virus. Este conocimiento ha permitido, por ejemplo, la sntesis de molculas antivirales que bloquean en forma especfica pasos de la replicacin, sin afectar al husped. Dentro de este contexto, los virus no slo han sido y son responsables de muchas enfermedades, sino que fueron las herramientas tiles que permitieron el desarrollo de las tcnicas moleculares, las que a su vez sirven para su estudio.

Dentro del campo de la virologa mdica, dichas tcnicas se aplican en el diagnostico virolgico en estudios de patogenia, anlisis epidemiolgico, en la produccin de vacunas. A la vez han permitido rastrear, en muchos casos, al agente responsable de infecciones emergentes. Los libros y los artculos que tratan sobre los virus se han enriquecido en nuevas terminologas (muchas de las cuales ni siquiera se han traducido), que reflejan el uso generalizado de las tcnicas moleculares. El estudiante de ciencias mdicas debe realizar un esfuerzo para adquirir los conocimientos bsicos que le permitan la cabal comprensin de algunas expresiones, como hibridacin molecular, sondas genticas, expresin de genes en organismos inferiores, transcripcin reversa, reaccin en cadena de la polimerasa y muchas otras.

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