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Existen numerosas formulaciones de medios de cultivo que por lo general son muy similares Porqu?
Elementos Concentraciones(% peso seco) 45 44 6 1.6 1.0 0.5 0.2 0.2 0.1 0.015 0.01 0.002 0.004 0.0005 0.00007

Carbn ( C ) Oxigeno (O ) Hidrgeno ( H ) Nitrgeno ( N ) Potasio ( K ) Calcio ( Ca ) M agnesio ( M g) Fsforo ( P ) Azufre ( S ) Cloro ( Cl ) Hierro ( Fe ) Boro ( B ) M anganeso (M n) Zinc ( Zn ) M olibdeno (M o)

Elementos minerales de una planta

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Sales inorgnicas

Macronutrientes

Micronutrientes

N, K, P, Ca , S ,Mg
Concentracin: mayores

Fe, Mn,Zn ,B,Cu,Mo,Co

Concentracin: menores

(mM o mg)

(M)

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Carbohidratos o fuentes de energa

Aminocidos y amidas

Compuestos Orgnicos

Sustancias hormonales

Vitaminas

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Sacarosa

Lactosa

Fuentes de carbono

Glucosa

Fructuosa

Concentraciones: 20 - 80 g/L

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Auxinas: AIA; AIB; ANA; 2,4-D Citoquininas: 6-BAP; Kinetina Sustancias Hormonales Acido giberlico (GA3) Acido abscisico (ABA)

Concentraciones: 0.1 - 10 mg/L

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Tiamina(B1) Piridoxina (B6) Vitaminas

Acido nicotnico
Acido ascrbico

Concentraciones: 0.1 - 10 mg/L

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Glicina

L-arginina
Aminocidos y amidas

L-tirosina

L-asparagina

Concentraciones: 1 - 100 mg/L

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Complejos naturales

Complejo

Concentracin ms utilizada
0-18 % 500 mg/L 30- 3000 mg/L 15-30 % 500-1000mg/L 3-30 % 150g/L

Agua de Coco Extracto de Malta Hidrolizado proteico (casena, pertona y triptona) Jugo de Tomate Extracto de Levadura Jugo de Naranja Pulpa de Pltano o Banano

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Sustancias antioxidantes

Antioxidantes

Concentracin

Cianuro de Potasio 5 mM Acido ascrbico 10 - 50 mg/L L- cistena 25 - 100 mg/L Tiourea 5 - 8 mM Peroxido de Hidrgeno 5% Policlar 0.7 % Polivinilpirrolidone (PVP) 0.001 - 0.7 %

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Material de soporte.

Papel de filtro

Phytagel Agentes gelificantes: Agar Gelrite

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Componentes del medio de cultivo

Sales inorgnicas. Macroelementos (N,F,K,Ca,Mg). Microelementos (Cu,Zn, Mo, Mn, B,Fe,Co)

Compuestos orgnicos. Reguladores del crecimiento citoquininas, giberelinas, etileno, otros). (auxinas,

Fuente de carbono (sacarosa, fructuosa, glucosa). Vitaminas (tiamina, biotina, niacina, otras). Aminocidos (glicina, csteina) Otros (inositol, antibiticos)

Medio de cultivo

Soporte. Papel de filtro , gelrite, agar .

Compuestos naturales.
Agua de coco, extracto de levadura , extracto de malta.

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Equipos necesarios: Balanzas analticas y de platos. Phmetro. Autoclave. Equipo de flujo laminar en determinados casos. Refrigerador domstico. Destilador de agua. Desionizador de agua. Mechero de gas o agitadormagntico con calentamiento. Pipetas. Probetas. Matraz volmetrico. Vasos de Precipitados (Beaker). Erlenmeyer o frascos de conserva de cristal transparente. Tubos de Ensayos. Frascos para almacenar soluciones. Campana desecadora para guardar materiales hidroscpicos. Dosificador automtico para repartir el medio, aunque en pequea escala se puede hacer de forma manual. Filtro miliporo para la esterilizacin de sustancias termolbiles. Papel de aluminio. Placas de Petri.

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Aspectos que deben tenerse en cuenta :

1. Preparacion de Soluciones Madres . 2. Ajuste de pH

3.Dilucin del agar y distribucin del medio: 4. Pureza del agua: 5.Esterilizacin del medio de cultivo: 6.Tiempo de almacenado

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1.- Aadir el volumen correcto de cada una de las soluciones de

macro y micronutrientes y dems soluciones a un matraz aforado. Para medir volmenes mayores de 10 mL usar una probeta volumtrica; los volmenes pequeos deben ser medidos con pipetas y utilizando una para cada solucin si es posible, para evitar contaminaciones en las mismas. 2.- Pesar y aadir el mioinositol, si el medio lo requiere. 3.- Aadir el agua de coco u otro aditivo. 4.- Pesar y aadir la sacarosa o el equivalente. 5.-Enrazar aproximadamente a 990 mL con agua desionizada. 6.-Medir pH y ajustar. 7.- Vaciar el medio a un matraz y ajustar el volumen total a 1 L. Transferir el medio a un envase adecuado.

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8.- Si el medio es slido, aadir agar, segn la concentracin requerida. En este caso de ser lquido repartir directamente. 9.- Diluir el agar en el medio, calentando con estufa de gas o plancha elctrica hasta ebullicin. 10.- Dejar refrescar alrededor de 10 minutos y aadirle el 2,4-D. Si el medio lo lleva. 11.- A continuacin repartir en los frascos de cultivo, taparlos y esterilizarlos en autoclave. 12.- Colocar los frascos en un lugar limpio, para que se enfren y solidifiquen, si contienen agar. En caso de suplementar los medios de cultivo con sustancias termolbiles, estas despus de filtradas(filtromillipore 0.22), son aadidas al medio esterilizado, pero menos caliente, se tapa y se agita para hacer la mezcla homognea. A continuacin se reparte en los recipientes de cultivo anteriormente esterilizados, con cuidado de no mojar la boca del frasco ya que puede provocar contaminacin. Todo esto se tiene que hacer bajo cmara de flujo laminar.

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Tiempo mnimo requerido para la esterilizacin en autoclave.

VOLUMEN DE MEDIO POR FRASCO ESTERILIZACIN. (mL)

TIEMPO MINIMO DE (minutos)

20 50 75 200 250 500 1000 1500 2000

15 20 25 30 35 40

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Medios de cultivo
MS (1962)

Utilizacin
cultivo de tejidos en tabaco
(1962)

en muchas especies de plantas(micropropagacin)

B5 Gamborg et al(1968) SH Schenk and Hildebrandt(1972)

especies monocotiledneas
Induccin y cultivo de callos de plantas monocotiledoneas y dicotiledneas

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Causas de variabilidad:

Influencia de distintas hormonas empleadas sobre el material hereditario.

Los medios de cultivo condicionan la regeneracin de las plantas. Para el cultivo de meristemos y pices no existe un medio universal, sin embargo el medio propuesto por Murashige y Skoog(1962) con algunas modificaciones ingredientes ha sido el ms frecuente utilizado, reportndose su utilizacin en la mayora de las especies propagadas in vitro (Kartha,1981). Hu y Wang (1983) reportan que el 85 % de los medios de establecimiento se utilizan citoquininas.

Normalmente cuando se emplean pices no se adicionan auxinas al medio aunque estas pueden estimular el crecimiento.