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Universidad Cooperativa de Colombia Medicina Veterinaria y Zootecnia

Silvia Carolina Caldern Daz Sergio Vargas Laura Juliana Guerrero

Inmunologa Dirigido a : Doc. Paola Hernndez

Inmunohistoquimica
grupo de tcnicas de inmunotincin que permiten demostrar una variedad de antgenos presentes en las clulas o tejidos utilizando anticuerpos marcados. Estas tcnicas se basan en la capacidad de los anticuerpos de unirse especficamente a los correspondientes antgenos. Esta reaccin es visible slo si el anticuerpo est marcado con una sustancia que absorbe o emite luz o produce coloracin.

Caractersticas
Tcnica verstil Se puede demostrar la presencia de antgenos subcelulares Doble marcado: permite la deteccin simultanea de dos antgenos y por lo tanto ha una comparacin relativa Permite detectar el tipo de organismo infeccioso, clulas progenitoras de una neoplasia, o presencia de respuesta inflamatoria. Pueden detectar como mnimo 1000 molculas de antgenos por clula

FUNDAMENTO

Fundamento

Las tcnicas inmunohistoqumicas enzimticas permite una localizacin ms precisa de las reacciones, ya que la tincin es permanente, estable, puede contrastarse y puede ser evaluada con microscopio de luz. El material as estudiado puede archivarse por aos sin prdida de la intensidad de la reaccin.

1
Se utiliza un anticuerpo primario y especifico que reconoce el antgeno de inters
Anticuerpo anti-A

2
Anticuerpo anti-A

Y un anticuerpo secundario que se une especificamente al primario

Peroxidasa

Anticuerpo anti-A

El anticuerpo secundario solo estara acoplado a un cromgeno Que permite la visualizacin de antgeno anticuerpo
Colorante soluble Peroxidasa Colorante insoluble

Anticuerp o anti-A

Anticuerpo anti-A

TECNICAS INMUNOHISTOQUIMICAS

La fluorescencia es una forma de luminiscencia entendindose sta ltima como la emisin de la luz que se produce a partir de una fuente de energa no trmica y bajo el efecto de una excitacin.

FLUORESCENCIA PRIMARIA O AUTOFLUORESCENCIA


Es aquella que presenta determinadas sustancias de forma espontnea sin necesidad de ser modificadas; por ejemplo la lmina elstica de las arterias muestra autofluorescencia en determinadas condiciones.

FLUORESCENCIA SECUNDARIA
Esto se puede hacer mediante tincin histoqumica con sustancias fluorescentes llamadas fluorocromos o uniendo fluorocromos a antgenos dirigidos a anticuerpos tisulares. De este ltimo procedimiento se sirven las tcnicas de inmunofluorescencia.

Etapas de la Tcnica
Obtencin de las clulas o tejidos Fijacin Unin con anticuerpos Deteccin de la recreacin antgeno-anticuerpo

Obtencin de clulas y tejidos


Cultivos celulares que crecen en un soporte de vidrio Centrifugado de clulas en suspensin colocadas en un portaobjetos Frotis de tejido Cortes de tejido

Fijacin
Ideal: inmovilizar al antgeno sin modificarlo Mantener la estructura celular Permitir el acceso de los anticuerpos Realidad: Muchos epitopes son enmascarados o alterados y los anticuerpos pueden no reconocerlos

Fijadores mas utilizados

Unin con anticuerpos


La aplicacin directa de anticuerpos policlonales o monoclonales sobre secciones tisulares permite la localizacin microanatmica de su expresin y su correlacin con los parmetros morfolgicos, aumentando la sensibilidad y especificidad del estudio y proporcionando informacin adicional esencial en muchos casos.

Unin con anticuerpos


Anticuerpos Policlonales
Un buen suero tiene mltiples anticuerpos contra diferentes epitopes Producen una fuerte seal El exceso de anticuerpos puede producir una inhibicin alosterica

Unin con anticuerpos


Anticuerpos Monoclonales
Trabaja bien en clulas o tejidos bien fijados La mayora no funciona con paraformaldehido Existe reaccin cruzada Es mejor la obtencin de anticuerpos de cultivo y no de liquido asctico

Utilidad diagnostica
La inmunohistoqumica tiene utilidad diagnstica en identificacin de diferenciacin y de marcadores pronsticos de neoplasias (marcadores tumorales). Por ejemplo, es posible la identificacin de los productos de oncogenes y de genes supresores de tumores con anticuerpos monoclonales; la identificacin de marcadores de diferenciacin para melanocitos (melanoma), carcinomas, vimentina para sarcomas y leuocitos (linfomas).

Inmunomarcacin de membrana: CD31 en clulas plasmticas reactivas. E-caderina en carcinoma mamario ductal infiltrante. CD117 en seminoma clsico. CD138 en mieloma de clulas plasmticas. Distrofina, marcacin submembranal en msculo esqueltico . EMA membrana y acentuacin paranuclear en linfoma anaplsico de clulas grandes. CD15 positivo granular en regin paranuclear. CD30, clulas de Reed-Sternberg con marcacin membranosa y paranuclear

Linfoma no Hodgkin difuso de clulas grandes con matriz fibrilar y formacin de pseudosrosetas. Izquierda H&E, derecha CD20. Las clulas se agregan formando pseudorosetas y las membranas son marcadas con CD20.

CUANTIFICACION DE RESULTADOS.
Negativo: total negatividad o menos del 50% cells diana, <intnsidad q el control.
Positividad debil (+/-): >50% <intensidad q el control. Positivo(+): >50% =o> intensidad q el control.

Ventajas y Desventajas
o o Desventajas: Presencia de reaccin inespecfica algunos reactivos son potencialmente carcingenos. Tratamiento de la muestra. Infraestructura necesaria. Personal capacitado. Ventajas: Costo relativamente bajo resultados en mucho menor tiempo Pone en evidencia Ag en el propio tejido. La relacin estructural entre las clulas es ms sencilla de evaluar. Visualizacin en M.O

Bibliografa
http://www.slideshare.net/juliolarenas/clases-de-inmunohistoqumica http://www.slideshare.net/CristianCampos19/introduccininunohstoqumica http://escuela.med.puc.cl/publ/patologiageneral/Patol_125.html http://www.youtube.com/watch?v=QNXfrBewxfM
http://www.lopezcorrea.com/3/index.php?option=com_content&view=ar ticle&id=88:inmunohistoquimica&catid=40:articulos-medicos http://escuela.med.puc.cl/publ/patologiageneral/Patol_125.html