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 Hibridização Subtractiva Supressiva (“Suppression Subtractive

Hybridization”-SSH) foi desenvolvido por Diatchenko et al (1996) e


Gurskaya (1996) para gerar uma biblioteca de cDNA subtraído.

 Este método baseia-se em uma técnica conhecida como reacção de PCR


supressiva, a qual combina a normalização e a subtracção de cDNAs em
um único procedimento.

www.evrogen.com/products/Mint/Mint.shtml
 É uma técnica que permite comparar duas populações de mRNA e obter
clones de genes que estão a ser expressos diferencialmente em dois
tecidos.

www.pac.dfo-mpo.gc.ca/.../pages/pmdoy_e.htm
Aumentar a abundância de cDNAs diferencialmente expressos e simplificar a
análise dos cDNAs subtraídos da biblioteca.

www.rbej.com/content/4/1/12
RNA mensageiro

cDNA

Digestão com
RsaI

Ligação dos
adaptadores

Subtracção

Adaptado de Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:6025–6030.


 Apesar de ter sido inicialmente desenvolvida para identificar genes
relacionados com doenças humanas a Hibridização Supressiva
Subtractiva possui outras aplicações; permitindo identificar genes
diferencialmente expressos nos mais diversos organismos.

Exemplos:
 Isolamento de genes diferencialmente expressos em vários tipos de
cancro (Bangur et al., 2002).
 Identificação de genes induzidos na resposta à infecção de plantas
por patógenos (Santos et al.,2003).
 Identificação e isolamento de genes induzidos pelo stresse biótico e
abiótico (Mahalingam et al.,2003).
 Detecção das diferenças no conteúdo gênico entre membros de
uma espécie bacteriana (Akopyants et al.,1998).
 Permite a detecção de transcritos pouco abundantes.

 Requer um único ciclo de subtracção dos cDNAs e a sua


normalização .

 Permite um enriquecimento dos cDNAs diferencialmente expressos


superior a 1000 vezes.

 Pode ser aplicada em screening diferencial de uma grande


quantidade de bibliotecas subtractivas.
 Permite a comparação entre apenas duas amostras.

 Pode gerar clones falsos positivos.

www.btinfo.blogspot.com
 Akopyants N, Fradkov A, Diatchenko L, Hill JE, Siebert PD, Lukyanov SA, Sverdlov ED & Berg
DE. PCR-based subtractive hybridization and differences in gene content among strains of
Helycobacter pylore. Proceeding of National Academy of Sciences of the United States of
America, v.95, p. 13108-13113, 1998.
 Bangur CS, Switzer A, Fan L, Marton MJ, Meyer MR, Wang T. (2002). Identification of genes
over-expressed in small cell lung carcinoma using suppression subtractive hybridization and
cDNA microarray expression analysis. Oncogene. 21:3814-3825.

 Diatchenko, L.,. Lau Y.-F. C, Campbell A. P., Chenchik A., Mogadam F., Huang B., Lukyanov
S., Lukyanov K., Gurskaya N., Sverdlov E. D. and Siebert P. D.. 1996. Suppression subtractive
hybridization: a method for generating differentially regulated or tissue-specific cDNA probes
and libraries. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:6025–6030

 Gurskaya, N. G., Diatchenko L., Chenchik A., Siebert P. D., Khaspekov G. L., Lukyanov K. A.,
Vagner L. L., Ermolaeva O. D, Lukyanov S. A., and Sverdlov E. D.. 1996. Equalizing cDNA
subtraction based on selective suppression of polymerase chain reaction: cloning of Jurkat cell
transcripts induced by phytohemaglutinin and phorbol 12-myristate 13-acetate. Anal. Biochem.
240:90–97.
 Mahalingam R, Gomez-Buitrago A, Eckardt N, Shah N, Guevara-Garcia A, Day P,
Raina R & Fedoroff NV. Caracterization the stress/defence transcriptome of
Arabidopsis. Genome Biology, v.4, n.3, p. 1-14, 2003.

 Santos CV Dos, Delavault P, Letousey P & Thalouarn P. Identification by


suppression subtractive hybridization and expression analysis of Arabidopsis thaliana
putative defence genes during Orobanche ramose infection. Physiological and
Molecular Plant Pathology, v.62, p.297-303, 2003.

 http:www.btinfo.blogspot.com

http:www.evrogen.com/products/Mint/Mint.shtml

 http://www-rbej.com/content/figures/1477-7827-4-12-4.gif

 http:www. sci.pac.dfo-mpo.gc.ca/shelldis/pages/pmdoy e.htm