Objetivo general

Diferenciar morfolgicamente a las amibas parsitas de las comensales y describir las caractersticas histopatolgicas ocasionadas por Entamoeba histolytica.

 Objetivos conductuales
1. 2. 3. 4. 5. 6. Describir las caractersticas morfolgicas de los Trofozoitos vivos de E. histolytica. Describir la morfologa de Trofozoitos de las amibas de vida libre. Diferenciar por sus caractersticas morfolgicas a los Trofozoitos de E. histolytica, de los de las amibas comensales del hombre. Observar el fenmeno de eritrofagocitosis. Practicar la tcnica de tincin Tricrmica de Gomori para amibas. Diferenciar las lesiones histopatolgicas de la amibiasis intestinal y heptica. Diferenciar por sus caractersticas morfolgicas a los quistes de E. histolytica y de otras amibas intestinales.

7.

PHYLUM: Sarcomastigophora SUBPHYLUM: Sarcodina CLASE: Lobosea ORDEN: Amoebida

SUBORDEN: Tubulina
GENERO: Entamoeba Endolimax Iodamoeba

Protozoario comensal del intestino grueso Puede invadir la mucosa intestinal y diseminarse por va hemtica (amebiasis extra intestinal) Pertenece al subphylum Sarcodina, que incluye a los protozoarios mviles dotados de pseudpodos

Presenta dos formas o fases de desarrollo: Quiste y Trofozoito Trofozoito (fase invasiva) y Quiste (fase infectante)
Su microhbitat es en el colon sobre la superficie de las glndulas de Lieberkuhn Los mecanismos de transmisin son: 1. Contaminacin por alimentos 2. Persona a Persona

Trofozoito
Ectoplasma

Membrana citoplasmtica hialina, transparente casi sin granulaciones Muy granulosa que contiene los organelos celulares Esfrico con una acumulacin de cromatina, pequeo y puntiforme llamado endosoma. Mide de 20-40 m de dimetro Prolongaciones del ectoplasma y proporcionan movilidad al parsito

Endoplasma

Ncleo

Pseudpodos

Quiste
Quiste de E. histolytica
Es redondo u oval Mide de 10-25 m Posee pared lisa de 0.6 m Resistente a jugos gstricos, factores ambientales externos y cifras habituales de cloro del agua Posee 4 ncleos La dosis infectante es de 2000 a 4000 quistes

Factores de Virulencia Adhesin Dao a membrana celular Lisis Fagocitosis Digestin de las clulas ingeridas

Patologa Origina de lceras Formacin de amebomas Produccin de abscesos

Respuesta inmune protectora 1. Mucus intestinal 2. Inmunidad Humoral (IgA, complemento) Celular (Polimorfonucleares, Macrfagos, Linfocitos)

Mecanismos de evasin de la respuesta inmune Mimetismo antignico Formacin de casquete Supresin de la inmunidad celular Produccin de sustancias antiinflamatorias Resistencia al complemento

Trofozoito o forma vegetativa Tamao Movilidad Seudpodos Inclusiones 15 50 m Perezosa, rara vez progresiva y direccional Cortos, romos y granulosos; de formacin lenta Bacterias y otros materiales; raras veces eritrocitos

Ncleos
Membrana nuclear

Raras veces visible

Gruesa; cara interna tapizada de gruesos granos de cromatina Grande y de situacin excntrica

Cariosoma

Quiste Tamao Forma Citoplasma 10 33 m Esfrica Pardo amarillento

Glucgeno
Ncleos

Masa central indefinida pardo oscura y de borde indistinto

De 1 a 8; membrana nuclear refringente y granulosa; cariosoma excntrico

 Parsito comensal.
Distribucin geogrfica: Mundial. Localizacin en el husped: Luz del coln y el ciego. Marcador de contaminacin fecal.

 Trofozoitos
8 a 10 m Motilidad no progresiva Cariosoma grande e irregular Citoplasma granular grueso y vacuolado

 Quistes
5 a 10 m Forma elptica o esfrica Cuatro ncleos Cariosoma definido Carece de cromatina perifrica Citoplasma puede contener glucgeno difuso

Es una ameba parsita no patgeno, que se encuentra comnmente en el intestino grueso de personas, cerdos y otros mamferos. Esta ameba recibe su nombre genrico gracias a la vacuola de glucgeno, evidente en su fase qustica y que al teirse con lugol pareciera ser su nico contenido

Trofozoitos Trofozoitos de I. butschlii Miden entre 4 y 20 m de dimetro Forman seudpodos hialinos y su movimiento es sumamente lento El citoplasma puede contener bacterias, pero no eritrocitos. El ectoplasma y la endoplasma a menudo son difciles de distinguir Se identifican a partir de las heces El ncleo es bastante grande, contiene un gran endosoma con grnulos

Quistes

Quistes de I. butschlii Variados en cuanto a forma: los hay ovalados, piriformes o esfricos y miden de 6 a 15 m Con una tincin temporal con lugol es evidente observar la vacuola de glucgeno de tono caf rojizo. Presenta un solo ncleo con endosoma central Con la tincin de hematoxilina frrica, el citoplasma se observa gris azulado y una gran zona clara que corresponde al espacio que ocupaba la vacuola de glucgeno

Fig. 2 Quistes de I. butschlii

PHYLUM: Sarcomastigophora
SUBPHYLUM: Sarcodina CLASE: Lobosea ORDEN: Amoebida SUBORDEN: Acanthopodina

PHYLUM: Sarcomastigophora
SUBPHYLUM: Sarcodina CLASE: Lobosea ORDEN: Schizopirenida GENERO: Naegleria

GENERO: Acanthamoeba

Tamao del Trofozoito

10 15 m

Tamao del quiste

Seudpodos Flagelos Quistes Membrana nuclear Ubicacin

7 15 m
Buloso (2 veces su cuerpo), se mueven rpidamente en diferentes direcciones Presentes Pared delgada, esfrico Intacta durante la divisin Piscinas sin o poco cloro, lagos artificiales y piscinas temperadas

Antecedentes Periodo de incubacin Puerta de entrada Comienzo

Individuos jvenes y sanos. Reciente historia de natacin en lagos o piscina 3 7 das Neuroepitelio olfatorio Rpido

Extensin al sistema Directo nervioso central

Curso clnico Signos y sntomas Liquido cefalorraqudeo Agudo (<7 das) Cefalea, fiebre, alteraciones alucinaciones, coma. mentales,

Purulento, aumento de protenas, aumento de Polimorfonucleares

 Parsito de vida libre. Distribucin geogrfica mundial. Enfermedades: encefalitis amebiana granulomatosa, infecciones nasofarngeas y cutneas y queratitis. Localizacin en el husped: cerebro, piel, ojos, pulmones y posiblemente otros rganos.

 Trofozoitos
15 a 30 m Prolongaciones delgadas en forma de espinas (acantpodos) Citoplasma granular, contiene vacuolas Ncleo grande sin cromatina perifrica

 Quistes

Doble pared 13 a 25 m Exoquiste puede ser rugosa o lisa Endoquiste tiene forma estrellada, globular u ovoide Un ncleo con un cariosoma de gran tamao

 Material
Porta y cubreobjetos Pipetas Pasteur Bulbo para gotero Vasos de precipitados Tubos de Kahn Gradillas algodn Aplicadores de madera Lanceta estril

Reactivos y soluciones
Solucin salina al 0.85% Alcohol iodado Alcohol etlico al 70%, 90% , 96% y absoluto cido actico Xilol Resina sinttica Aceite de inmersin Colorante de Gomori PVA (alcohol poli vinlico) Detergente extrn Hipoclorito de sodio al 1% AMA (azul de metileno amortiguado)

 Material biolgico
Cultivo axnico de E. histolytica. Preparaciones fijas y teidas con Trofozoitos y quistes de E. histolytica, Entamoeba coli, Endolimax nana, Iodamoeba butschlii. Cortes de intestino e hgado con E. histolytica. Concentrados de quistes de E. histolytica, Entamoeba coli, Endolimax nana. Cultivo axnico de Naegleria fowleri y de Acanthamoeba culbertsoni.

Observar las preparaciones fijas de las amibas proporcionadas

Observar las lesiones causadas por E. histolytica en intestino e hgado

Observar concentrados de quistes de amibas intestinales

Observar a mayor aumento las estructuras de los Trofozoitos y determinar las medidas

Realizar extensiones en portaobjetos del cultivo proporcionado , fijar con metanol y teir con Giemsa

Naegleria gruberi Observar a 40x los Trofozoitos a partir de medio de cultivo axnico

Acanthamoeba cultbersoni Observar la morfologa de los Trofozoitos a 20x y 40x

Fijar el cultivo con formaldehdo al 10% durante 20 minutos

Realizar extensiones en portaobjetos, fijar con metanol y teir con Giemsa

Observar al microscopio las preparaciones fijas y teidas de Naegleria fowleri y Acanthamoeba culbertsoni

Observar a 100x las estructuras de los Trofozoitos y determinar las medidas

La observacin de la morfologa se har con el microscopio invertido y en el mismo contenedor del medio de cultivo

Objetivos seco dbil y seco fuerte: Trofozoitos de E. histolytica a partir de los medios de cultivo. Tamao, tipo de seudpodos y desplazamiento, estructuras amebianas: membrana, ectoplasma hialino, endoplasma granuloso, ncleo y vacuolas.

1 gota de sangre + 1ml de cultivo de amibas

Incubar durante 1 min a temperatura ambiente

Objetivos seco dbil y seco fuerte: Aglutinacin de los eritrocitos sobre la superficie del parsito y la eritrofagocitosis.

1 gota de AMA + 1ml de cultivo de amibas

Incubar durante 20 min a 28C 1 gota de AMA + 1ml de cultivo de amibas

Objetivos seco dbil y seco fuerte: Detalles del ncleo de la amiba Distribucin de la cromatina sobre la membrana nuclear y localizacin del cariosoma (axial o perifrico)

Fijacin de trofozoitos de amibas

Homogeneizar al momento y extender con aplicador de madera sobre un portaobjetos.

Agregar PVA en una proporcin 1:1 mezclar y dejar actuar 30min

600 rpm por 5min

Dejar secar durante 1hr en una estufa a 37C.

Alcohol etlico 70% por 5 min (2 veces)

Eliminar el bicloruro mercrico, con alcohol etlico al 70% iodado

Diferenciar: Con alcohol etlico al 90%cido (10 seg.)

Colorante de Gomori (1min.)

Lavar con alcohol etlico al 70% por 5 min

Deshidratar 8 seg. con alcohol etlico al 96%

Deshidratar con alcohol etlico absoluto por 30 seg.

Deshidratar con Xilol por 2 min.