El sistema del complemento

Va clsica

El sistema del complemento

Va alternativa

El sistema del complemento

Va de las lectinas

Protena de unin a Manosa

El sistema del complemento

Va de las lectinas

El sistema del complemento

Funciones

Funcin ltica

Fortalecimiento de la respuesta inflamatoria

Neutralizacin de virus

Opsonizacin

Eliminacin de complejos antgenoanticuerpo.

El sistema del complemento

Fijacin de complemento
La presencia de anticuerpos para un antgeno determinado se puede medir por la capacidad de los complejos antgeno-anticuerpo para fijar el complemento Esta prueba slo funciona con los anticuerpos que fijan complemento (IgG e IgM)

Factores que alteran la aglutinacin eritrocitaria

Tamao y propiedades fsicas de los anticuerpos
En condiciones isotnicas, los glbulos rojos no pueden acercarse entre s a una distancia menor de 50-100 A

Aglutinacin con anticuerpos tipo IgM

Si los anticuerpos son IgM, pueden unirse fcilmente a los eritrocitos y la aglutinacin se produce directamente

La sensibilizacin de eritrocitos por anticuerpos de tipo IgG difcilmente produce aglutinacin. La molcula de IgG es demasiado pequea para unirse a ms de un eritrocito a no ser que se introduzca algn facilitador de la reaccin

Aglutinacin con anticuerpos tipo IgG

Factores que alteran la aglutinacin eritrocitaria

Proporcin antgeno-anticuerpo
Efecto Prozona (exceso de anticuerpos)

Efecto Prozona Zona de equivalencia

Efecto Postzona Zona de equivalencia Estas reacciones de falsos negativos se pueden detectar mediante la repeticin de la prueba a una mayor dilucin de la muestra

Efecto Postzona

Factores que alteran la aglutinacin eritrocitaria

Temperatura
Los anticuerpos IgM reaccionan mejor a 25.4C
La especificidad trmica de la mayora de los anticuerpos se dividen en dos grandes categoras: los reactivos en "fro" (temperatura ambiente o menores) y los reactivos en "caliente" (30-37 C) Los anticuerpos IgG reaccionan mejor a 30-37 C La temperatura de la aglutinacin se determina por la naturaleza del antgeno y el tipo de reaccin y no por la clase de anticuerpo

La unin de los anticuerpos con antgenos que son carbohidratos (como los del sistema ABO) se produce mejor a bajas temperaturas
La unin con antgenos proteicos (antgeno Rh) se produce mejor a 37C

Factores que alteran la aglutinacin eritrocitaria

pH
Para la mayora de los exmenes rutinarios de sangre, de debe usar un pH alrededor de 7.0, los valores por debajo de 6 o superior a 8 reducen la reactividad de los anticuerpos La solucin salina almacenada tiene un pH entre 5.0 a 6.0, por lo tanto, es preferible usar solucin salina tamponada a 7.4

El tiempo de incubacin
El tiempo de incubacin vara para los diferentes anticuerpos utilizados para la deteccin de grupos sanguneos El tiempo de incubacin ptimo los sistemas de solucin salina, es de 3060 minutos a 37C Anticuerpos dbiles pueden requerir ms tiempo. Agentes de mejora tales como el polietileno glicol (PEG) puede reducir el tiempo de incubacin de 10 a 15 minutos a 37C

La fuerza inica
En solucin salina normal, los iones Na + y Cl- se agrupan alrededor de las molculas de los antgenos y anticuerpos, y neutralizan las cargas opuestas interfiriendo con su interaccin Una disminucin en la fuerza inica del medio aumenta la asociacin del antgeno con el anticuerpo

Factores que alteran la aglutinacin eritrocitaria

Ubicacin y densidad del antgeno en cada clula

Distancia entre los glbulos rojos en solucin salina

La ubicacin y densidad de los antgenos en cada clula puede permitir que algunos anticuerpos IgG causen aglutinacin directa Los antgenos A, B, M y N se encuentran en los bordes exteriores de la membrana celular de los eritrocitos y tienen alta densidad, permitiendo que los anticuerpos IgG los puedan entrecruzar

Hidratacin Tensin superficial Potencial Zeta

Mtodos para mejorar la reaccin de antgeno-anticuerpo

Fsicos
Junta a las clulas y aumenta las posibilidades de asociacin entre los anticuerpos y antgenos. Si se aplica con demasiada fuerza, puede fusionar las clulas y causar falsos positivos Incrementa las posibilidad del encuentro de los anticuerpos con sus antgenos

Centrifugacin

Agitacin

Mtodos para mejorar la reaccin de antgeno-anticuerpo

Qumicos
Albmina Enzimas La antiglobulina humana

Aumenta la constante dielctrica del medio reduciendo el potencial zeta. Tambin afecta la tensin superficial entre las clulas causando que las clulas recubiertas de anticuerpos aglutinen. No provoca la aglutinacin de las clulas no recubiertas

La papana-cistena es la enzima proteoltica ms utilizadas en grupos sanguneos

Otras incluyen la bromelina, ficina, y la tripsina

Provoca aglutinacin de los eritrocitos recubiertos de anticuerpos, llenando el vaco entre las molculas de IgG y produciendo su aglutinacin

Reacciones de antgeno-anticuerpo
Neutralizacin

Los anticuerpos pueden inhibir o neutralizar in vivo la accin txica de las toxinas o la accin infecciosa de bacterias intracelulares y los virus.

Reacciones de antgeno-anticuerpo
Opsonizacin
Las partculas antignicas son recubiertas por anticuerpos cuyas regiones Fc son a su vez reconocidas por receptores especficos de los neutrfilos y los fagocitos mononucleares estimulando la fagocitosis de las partculas.

Reacciones de antgeno-anticuerpo
Activacin del complemento por IgM e IgG

C1q se une a la regin Fc de inmunoglobulinas unidas a antgenos, desencadenando la activacin del complemento que culmina con la lisis celular.

Reacciones de antgeno-anticuerpo
Citotoxicidad dependiente de anticuerpos
Los linfocitos citotxicos expresan receptores de baja afinidad para Fc IgG que solo se unen a IgG agregada en superficies reconocidas por los anticuerpos e inducen la muerte de la clula reconocida por los anticuerpos.

Reacciones de antgeno-anticuerpo
Citotoxicidad dependiente de anticuerpos mediada por eosinfilos
Los Eosinfilos tienen receptores para regiones Fc de IgA e IgE , al reconocerlos exocitan grnulos con contenido letal para parsitos y helmintos que son insensibles a otras clulas efectoras.
Eosinfilos destruyendo a un protozoario

Reacciones de antgeno-anticuerpo
Hipersensibilidad inmediata desencadenada por IgE
Los mastocitos y los basfilos expresan receptores para Fc de IgE (FcRI) de alta afinidad que pueden ser ocupados por monmeros de IgE en ausencia del antgeno e inducir una respuesta de hipersensibilidad.

Reacciones de antgeno-anticuerpo
Inmunidad en las mucosas mediada por IgA
La IgA es transportada a travs de las barreras mucosas y es secretada a la luz intestinal donde neutraliza posibles patgenos o toxinas derivadas de ellos y evita la invasin a estratos ms profundos.

Reacciones de antgeno-anticuerpoc
Transferencia de inmunidad pasiva al feto y al neonato por IgA e IgG
Los mamferos durante la vida fetal o recin nacidos no son capaces de responder eficazmente a los microorganismos. Por el contrario, en esta etapa su organismo se encuentra aprendiendo a reconocer a los antgenos propios para respetarlos despus del nacimiento Durante el desarrollo fetal, las IgG maternas son capaces de atravesar la placenta y pasar a la sangre del feto. Las madres en periodo de lactancia secretan Ig A (e Ig G en algunas especies) al calostro y a la leche. Estas IgA protegen la cavidad gastrointestinal y educan al sistema inmune del neonato. El neonato es capaz captar mediante receptores especficos Inmunoglobulinas de la luz intestinal y transferirlas a la sangre. De esta forma, la madre transfiere al feto y neonato toda su experiencia inmunolgica antes de que desarrolle la propia para defenderse de los agentes patgenos

Reacciones antgeno-anticuerpo in vitro

Pruebas para determinar la reaccin antgeno-anticuerpo in vitro
Aglutinacin/Hemaglutinacin Aglutinacin

Prueba de aglutinacin semi-cuantitativa

Efecto prozona en paciente N 6

EECTO PROZONA EN PACIENTE N 6

Efecto prozona

Reacciones antgeno-anticuerpo in vitro

Aplicaciones de las pruebas de aglutinacin
Determinacin de los tipos de sangre o de anticuerpos a los antgenos de grupo sanguneo

Para evaluar las infecciones bacteriana. Un aumento en el ttulo de anticuerpos a una bacteria en particular, indica una infeccin con este tipo de bacterias

Hemaglutinacin
Hemaglutinacin pasiva La prueba de aglutinacin slo funciona con los antgenos de particulados. Sin embargo, es posible poner en evidencia la presencia de anticuerpos para antgenos solubles recubriendo eritrocitos con dichos antgenos (antgeno viral, un polisacrido o hapteno)

Reacciones antgeno-anticuerpo in vitro

Aplicaciones de las pruebas de aglutinacin
Coombs directo
Prueba de Coombs (anti-inmunoglobulina humana)

Coombs indirecto

Prueba directa de Coombs: Cuando los anticuerpos unen eritrocitos no siempre se traduce en la aglutinacin. Con el fin de detectar la presencia de anticuerpos no aglutinantes unidos a los glbulos rojos, simplemente se aade un segundo anticuerpo dirigido contra la inmunoglobulina que los recubre. Esto induce el entrecruzamiento de los anticuerpos resultando en aglutinacin

Coombs indirecto: Se utiliza para saber si una muestra de suero tiene anticuerpos no aglutinantes contra eritrocitos. Esta prueba se realiza mediante la incubacin de los eritrocitos con la muestra de suero, posteriormente se lavan los anticuerpos no unidos y luego se aade la anti-inmunoglobulina que induce el entrecruzamiento de los anticuerpos y la aglutinacin

Reacciones antgeno-anticuerpo in vitro

Aplicaciones de las pruebas de aglutinacin

Inhibicin de hemaglutinacin

Aglutinacin en ltex

Reacciones antgeno-anticuerpo in vitro

Aplicaciones de las pruebas de precipitacin
Inmunodifusin radial: En la inmunodifusin radial el anticuerpo se incorpora en el gel de agar y el antgeno se colocan en los agujeros perforados en el agar a diferentes diluciones A medida que el antgeno se difunde en el gel, reacciona con el anticuerpo y cuando se alcanza el punto de equivalencia se forma un anillo de precipitacin El dimetro del anillo es proporcional al logaritmo de la concentracin de antgeno ya que la cantidad de anticuerpos es constante

Reacciones antgeno-anticuerpo in vitro

Aplicaciones de las pruebas de precipitacin
Inmunoelectroforesis: Se coloca una mezcla de antgenos en un pozo perforado de un gel de agar y se someten a electroforesis a fin de que se separen de acuerdo a su carga Despus de la electroforesis, se corta un canal en el gel y se aaden los anticuerpos

Como los anticuerpos se difunden en el agar, cuando se produce una reaccin antgeno-anticuerpo, se generan lneas de precipitacin en la zona de equivalencia

Reacciones antgeno-anticuerpo in vitro

Aplicaciones
ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay): En esta tcnica el antgeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo acoplado a una enzima capaz de generar un producto detectable por un cambio de color. Tambin se puede detectar el anticuerpo primario que reconoce al antgeno con un anticuerpo secundario que est acoplado a la enzima. La aparicin de color debida a la reaccin enzimtica se mide por espectrofotometra cuyo valor representa indirectamente la cantidad de antgeno o anticuerpo en muestra

Reacciones antgeno-anticuerpo in vitro

Aplicaciones
Inmunofluorescencia directa Inmunofluorescencia indirecta

En esta tcnica se utiliza un anticuerpo marcado con una molcula fluorescente (fluorocromo) para detectar la presencia de un antgeno presente dentro o sobre una clula o tejido En la inmunofluorescencia directa, el anticuerpo especfico para el antgeno est directamente marcado con el fluorocromo En la Inmunofluorescencia indirecta los anticuerpos especficos para el antgeno no estn marcados y se utiliza un segundo anticuerpo anti-inmunoglobulina marcado con el fluorocromo para detectar al anticuerpo primario

Reacciones antgeno-anticuerpo in vitro

Aplicaciones
Citometra de Flujo: Se utiliza para identificar y cuantificar a las clulas portadoras de un antgeno determinado. Las clulas en suspensin se marcan con anticuerpos ya sea marcados directamente con un fluorocromo o que se detectan con un anticuerpo secundario marcado. Despus, las clulas son analizadas en el citmetro de flujo

Potencial Z
Introduccin
En solucin salina, los eritrocitos se comportan como partculas electronegativas debido a los grupos carboxlicos de las sialo-glucoprotenas de la membrana eritrocitaria principalmente Iones positivos de sodio (Na+) son atrados por los eritrocitos, creando una doble capa de cargas positivas y generando una fuerte de repulsin inter-globular La nube de iones positivos que rodea a cada glbulo, se vuelve menos densa a medida que se aleja de la membrana (densidad de carga) La diferencia de potencial elctrico creada entre la doble capa de iones positivos (Na+) cerca del glbulo y el medio con iones de sodio y cloruro en equilibrio (neutro), se llama Potencial Zeta La fuerza de repulsin entre los eritrocitos en medio salino, depende del valor del potencial zeta

Densidad de cargas

Potencial Z
As, la aglutinacin entre los eritrocitos solo ocurre cuando la distancia entre ellos se reduce hasta un valor mnimo Esta distancia depende de los valores de dos fuerzas antagnicas: la tensin interfacial, que tiende a agregar a los glbulos rojos y la fuerza de repulsin, debida a los campos de cargas positivas creados alrededor de los glbulos (cargas iguales se repelen)
Tensin interfacial

En la ausencia de agentes aglutinantes, la fuerza de repulsin predomina y mantienen la suspensin globular estable (sin aglutinacin) en solucin salina
Fuerza de repulsin

Potencial Z
Valores elevados de Potencial Z impiden la unin de los anticuerpos

Para valores elevados del potencial, los glbulos rojos no se aglutinan, incluso en la presencia de anticuerpos especficos

El potencial Zeta puede ser cambiado de dos maneras:

Por la reduccin de la carga elctrica de la membrana eritrocitaria

Cambios en la composicin del medio

Tratamiento con enzimas

Bibliografa
1. Modern Blood Banking and Transfusion Practices. Denise M. Harmening 2. Inmunologa (de memoria). Rojas-Espinosa 3. Inmunologa (El sistema inmunitario en condiciones de salud y enfermedad). Charles A. Janeway 4. Inmunologa Celular y Molecular. Abul K. Abbas 5. Reactivos utilizados en la rutina del banco de sangre. Daniel G. Mautor 6. Understanding the immune system. U.S. Department of health and human services. National institute of health 7. Factores que intervienen en la reaccin antgeno-anticuerpo y clasificacin antignica eritrocitaria. Revista mdica del IMSS. Vol. 43 8. Factors affecting the antigen-antibody reaction. Roberto Reverberi. Blood Transfus 2007; 5: 227-240 9. El sistema del complemento. E. Garca Olivares 10. Serologa de los grupos sanguneos. Dr. Alisson Dos Santos

Gracias
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