aislamiento y recuento de bacterias Anaerobias

Anaerobios Caractersticas generales

Son incapaces de desarrollar en contacto con el oxgeno Son exigentes para crecer, necesitan vitaminas y cofactores. Forman parte de la flora normal del hombre y de los animales. Producen infecciones. Incluyen a varios gneros de cocos y bacilos, grampositivos y gramnegativos. Anaerobios estrictos: requieren un 0% de oxgeno para crecer Anaerobios aerotolerantes: sobreviven hasta con 0,5% de oxgeno

Bacterias Anaerobias Efecto txico del oxgeno

Efecto txico directo Formacin de anin perxido y superxido Oxidacin de enzimas esenciales que contengan grupos SH-

Inhibicin del metabolismo de flavoprotenas y NADH oxidasa

Imposibilidad para alcanzar potenciales redox bajos Dficit o ausencia de catalasa y/o superxido dismutasa (presente en aerotolerantes)

Cocos Gramnegativos Anaerobios

Gnero Veillonella V. parvula

Cocos Grampositivos Anaerobios

Gnero Peptostreptococcus P. anaerobius P. magnus P. micros P. asaccharolyticus

Bacilos Grampositivos Anaerobios

Gnero Actinomyces A. israelii A. odontolyticus A. viscosus Gnero Eubacterium E. lentum E. aerofaciens Gnero Lactobacillus L. cassei L. bulgaricus L. yoghurtii

Bacilos Gramnegativos Anaerobios

Gnero Bacteroides B. fragilis B. thetaiotaomicron Gnero Porphyromonas P. gingivalis P. endodontalis Gnero Prevotella P. melaninogenica P. bivia Gnero Fusobacterium F. nucleatum F. necrophorum

Obtencin de atmsfera anaerobia

Sistemas anaerobios para el cultivo de bacterias anaerobias

1.- Tcnica en jarra anaerobia Con catalizador: a-Evacuacin-reemplazo b-Mtodo del sobre generador de gas descartable Sin catalizador: Fijacin del O2 por limaduras de Fe 2.- Tcnica de la cmara anaerobia de guante

3.- Tubos con pelcula de agar con siembra por estras en medios PRAS.

Tcnica en jarra anaerobia

La jarra GasPak usa un catalizador en fro compuesto de bolitas de almina cubiertas de paladio, que no requieren calentamiento. El catalizador en fro es ms conveniente para usar y no tiene riesgo de explosin. El catalizador en fro de paladio puede ser inactivado en la jarra por la produccin de SH2 u otros productos voltiles de las bacterias. Se recomienda reemplazarlo por uno nuevo o uno reactivado cada vez que se utiliza la jarra.

1.- En la tcnica de anaerobiosis por evacuacin-reemplazo se extrae el aire de la jarra hasta 51-61 mm Hg, luego se lava con corriente de N2. Este procedimiento se repite dos veces. Por ltimo se llena la jarra con una mezcla anaerbica de N2:85%, CO2:5% e H2:10%. 2.- En la tcnica del sobre generador de gases se emplean sobres conteniendo, por ejemplo, cido ctrico o tartrico, bicarbonato de sodio y borohidruro de sodio. En el momento de utilizarse se corta el extremo del sobre y se hidrata con un volumen de agua, luego se cierra inmediatamente la jarra.

Cmara anaerobia de guante

Una cmara anaerobia de guante es un sistema anaerobio autoabastecido que permite procesar muestras y realizar la mayor parte de las tcnicas bacteriolgicas para aislamiento e identificacin de bacterias anaerobias sin exposicin al aire. Pueden construirse de diferentes materiales, incluyendo acero, acrlico o fibra de vidrio.

Medios PRAS en tubos arrollados

Esta tcnica utiliza medios PRAS: medios previamente reducidos y anaerbicamente esterilizados.

- El medio se envasa en tubos con tapn de caucho butlico bajo gas libre de O2 y se esterilizan y mantienen en ambiente anaerbico
- Se enfran en una mquina giratoria lo que resulta en una capa fina de agar en la superficie interna de los tubos - El sistema requiere el agregado de un agente reductor, como L-cistena en la frmula del medio de cultivo. - Permiten la inspeccin de las colonias en cualquier momento sin la exposicin al O2.

Identificacin

Anaerobios Esporulados

Caractersticas generales

Son incapaces de desarrollar en contacto con el oxgeno

Resisten hasta 120C, la desecacin y cambios de pH

Forman parte de la flora normal del hombre y de los animales. Se los encuentra ampliamente distribuidos en el agua, el suelo y las plantas Producen infecciones oportunistas. Su accin se manifiesta por la produccin de potentes exotoxinas.

Incluyen al gnero Clostridium con varias especies.

Anaerobios Esporulados Clasificacin

Neurotxicos

Clostridium tetani

Clostridium botulinum
Clostridium perfringens

Histotxicos

Clostridium septicum
Clostridium difficile

Enterotxicos

Clostridium perfringens

Clostridium tetani

Clostridium tetani

Se encuentran en el suelo e intestino del hombre y animales.

Las esporas ingresan a travs de heridas.

Al alcanzarse el potencial redox adecuado la espora germina .

La forma vegetativa produce una exotoxina (tetanoespasmina).

La toxina difunde por va neural hasta las neuronas motoras .

En SNC bloquea la liberacin de glicina y GABA. A nivel perifrico inhibe la liberacin de acetilcolinesterasa dando como resultado la estimulacin incontrolada de los msculos esquelticos.

El paciente muere por parlisis de los msculos respiratorios .

Clostridium tetani

Caractersticas Medio de cultivo

Colonia 1 TSN

Colonia 2 TSN

Clostridium Sp. Gelosa sangre

Forma
Tamao Color Borde Superficie Elevacin Luz trasmitida Luz reflejada Aspecto Consistencia

Amiboide
5 mm Beige lobulado Lisa Convexa Opaca Mate Hmeda Butirosa

Circular
2 mm Amarillo Entera Lisa Convexa Opaca Mate Hmeda Butirosa

Irregular
4 mm Beige Filsamentosa Rugosa Plana Opaca Mate Seco Dura

Accin sobre el medio

ninguna

Ninguna

Ninguna

Caracterstica Forma Agrupacin Tincin de Gram Presencia de endoesporas

Colonia 1 Ovoide Aislado Negativo No

Colonia 2 Coco Racimo Positiva No Si

Clostridium Sp. Bacilos Aislados Positivo

Dilucin

Nmero de tubos positivos

NMP/ml o g

10^-1 10^-2 10^-3

1 0 0

3.6