TEMA:

CULTIVO DE BACTERIAS ALUMNO: LAZARO FALCON, Kevyn LOPEZ RENTERA, Christian PALACIOS CORINA, Silver RAMOS CAMPOS, Oscar ASIGNATURA:

BIOMETALURGIA
SEMESTRE: VIII

Cerro de Pasco Per 2011

INTRODUCCION
Los mtodos del cultivo bacteriano son importantes en la industria minera en procesos de biolixiviacin los cuales son procesos que ayudan a recuperar metales de sulfuros primarios difcilmente recuperables de manera econmica .

Exclusivamente por mtodos qumicos dentro de los organismos importantes podemos citar a bacterias pertenecientes al gnero leptospirillum, sulfobacillus, acidithiobacillus y archaceas.

Caracterizado por ser quimiolito auttrofas, tienen movilidad por la presencia de flagelos y poseen respuestas quimiotaxis , para adaptarse a su medio ambiente.

EJEMPLO DE LA PLANTA MEXICANA DE CANANEA

Opera una mina de cobre de tajo abierto en una concentradoras de 80 000 TMD de cobre y 02 plantas con una capacidad de 55 000 TM anuales de ctodo de cobre recuperados en electrodeposicin.

Actualmente se extraen y recuperan cobre por el proceso de lixiviacin/biolixiviacin acida en terrenos a partir de menas de baja ley (0.15-0.3%) de Cu.

PROBLEMTICA ACTUAL DE MEXICANA DE CANANEA

Contienen principalmente sulfuros secundarios de cobre (Cu2S y CuS) se presenta minerales oxidados logrando extracciones de cobre cercanas al 65%.

Sin embargo la CuFeS2 en el mineral lixiviante disminuye consecuentemente la recuperacin de cobre a solo el 30% , debido a que su lixiviacin es refractaria en las condiciones actuales del proceso.

MEDIOS DE CULTIVO PARA EL CRECIMIENTO DE BACTERIAS

Para cada bacteria se necesita un ambiente bioqumico y biofsico apropiado.

El ambiente bioqumico (nutricional) se hace disponible como medio de cultivo.

El ambiente biofsico (reconocimiento) se hace disponible como medio diferencial.

MEDIO DE CULTIVO

Los medios de cultivo son empleados para el aislamiento y mantenimiento de cultivos puros de bacterias y tambin son utilizados para la identificacin de bacterias de acuerdo a sus propiedades bioqumicas y fisiolgicas.

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

Los medios lquidos son utilizados para el crecimiento de lotes de cultivos puros Los medios slidos son ampliamente utilizados para el aislamiento de cultivos puros

EJEMPLO

El agar, agente glido ms utilizado para medios slidos o semislidos, es un hidrocoloide derivado de las algas rojas. El agar es utilizado por sus propiedades fsicas nicas (se funde a 100 grados y permanece lquido hasta enfriarse a 40 grados, la temperatura a la que se vuelve gel) y porque no puede ser metabolizado por la mayora de las bacterias. Por lo tanto, como un componente del medio es relativamente inerte, simplemente mantiene los nutrientes que se encuentran en la solucin acuosa

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Pueden ser clasificados en varias categoras dependiendo de su composicin o uso Un medio qumicamente definido (sinttico) (Tabla 1a y 1b) es un medio en el que se conoce la exacta composicin qumica.
Los medios definidos estn habitualmente compuestos por bioqumicos puros sacados del stock Un medio definido es un medio mnimo (Tabla 1a) si provee slo los nutrientes exactos (incluyendo algunos factores de crecimiento) necesarios para el crecimiento del organismo. Los medios definidos qumicamente son de valor para el estudio de los requerimientos nutricionales mnimos de los microorganismos.

Un medio complejo (indefinido) (Tabla 2a y 2b) es un medio en el que no se conoce la composicin qumica exacta.
Los medios complejos habitualmente contienen materiales complejos de origen biolgico tales como la sangre, la leche, el extracto de levadura o el extracto de carne, cuya composicin qumica exacta es obviamente indeterminada. Los medios complejos habitualmente proveen la gama completa de factores de crecimiento y sirven para cultivar bacterias desconocidas o bacterias cuyos requerimientos nutricionales son complejos

CONSTRUCCIN DE MEDIOS DE CULTIVO

Un medio selectivo es aquel que tiene agregados componentes que inhibirn o prevendrn el crecimiento de ciertos tipos o especies de bacterias y/o promovern el crecimiento de las especies deseadas.

Un medio enriquecido (Tabla 2a y 2b) contiene algunos componentes que permiten el crecimiento de tipos o especies especficas de bacterias, habitualmente porque ellas solas pueden utilizar el componente de su ambiente.

Esto ajustar las condiciones fsicas del medio de cultivo, como el pH y temperatura, para hacerlo selectivo para organismos capaces de crecer bajo esas condiciones.

Un medio selectivo enriquecido (Tabla 2b) para el crecimiento de la halflica extrema (Halococcus) contiene cerca de un 25% de sal [NaCl], que es requerido por la haloflica extrema y que inhibe el crecimiento de otros procariotes.

Tabla 1a. Medio mnimo para el crecimiento de Bacillus megaterium. Un ejemplo de medio qumicamente definido para el crecimiento de bacterias heterotrficas.
COMPONENTE Sucrose K2HPO4 KH2PO4 (NH4)2HPO4 MgSO4 7H2O FeSO4 7H2O MnSO4 H2O agua pH = 7.0 CANTIDAD 10.0 g 2.5 g 2.5 g 1.0 g 0.20 g 0.01 g 0.007 g 985 ml FUNCIN DEL COMPONENTE C y fuente de energa buffer pH; fuente de P y K buffer pH; fuente de P y K buffer pH; fuente de N y P fuente de S y Mg++ fuente de Fe++ fuente de Mn++

Tabla 1b. Medio definido (tambin medio enriquecido) para el crecimiento de Thiobacillus thiooxidans, una bacteria litoautotrfica.
COMPONENTE NH4Cl KH2PO4 MgSO4 7H2O CANTIDAD 0.52 g 0.28 g 0.25 g FUNCIN DEL COMPONENTE fuente de N fuente de P y K fuente de S y Mg++

CaCl2 2H2O
Azufre elemental C02 agua pH = 3.0

0.07 g
1.56 g 5%* 1000 ml

fuente de Ca++
fuente de energa fuente de C

Tabla 2a. Medio complejo para el crecimiento de bacterias fastidiosas.

COMPONENTE Extracto de carne CANTIDAD 1.5 g FUNCIN DEL COMPONENTE Fuente de vitaminas y otros factores de crecimiento

Extracto de levadura Peptona Glucosa Agar agua pH = 6.6

3.0 g 6.0 g 1.0 g 15.0 g 1000 ml

Fuente de vitaminas y otros factores de crecimiento Fuente de aminocidos, N, S, y P C y fuente de energa Agente inerte solidificante

Tabla 2b. Medio selectivo enriquecido para el crecimiento de haloflicas extremas.

COMPONENTE Acidos Casamino Extracto de levadura Citrato trisdico KCl CANTIDAD 7.5 g 10.0 g 3.0 g 2.0 g FUNCIN DEL COMPONENTE Fuente de aminocidos, N, S y P Fuente de factores de crecimiento C y fuente de energa fuente de K+

MgSO4 7 H2O
FeCl2 NaCl Agua pH 7.4

20.0 g
0.023 g 250 g 1000 ml

fuente S y Mg++
fuente Fe++ fuente de Na+ para haloflicas e inhibidor para no haloflicas

CULTIVOS DE LAS CEPAS DE LAS BACTERIAS

CONDICIONES DE CULTIVO DE LAS CEPAS

DESARROLLO DE LA COLORACIN DESPUS DEL CULTIVO DE LAS CEPAS

CICLO DE VIDA DEL CULTIVO DE LAS BACTERIAS

El ciclo de vida de bacteria se aprecia un medio de cultivo adecuado

PRIMERA ETAPA
En este esquema se observa en primer lugar un periodo inicial de crecimiento lento o ETAPA DE ACOSTUMBRAMIENTO O ADAPTACION al nuevo medio (conocido en ingls lag time o periodo de rezago) , que se caracteriza por muy poca actividad bacterial (medible , por ejemplo por la solubilizacion de un determinado producto , o bien por el nmero de individuos por unidad de volumen, etc.) Mientras la bacteria se acostumbra y desarrolla los niveles de sus molculas internas enzimas, RNA, ribosomas, etc. al final requerido para su mantenimiento y posterior divisin celular.

CICLO DE VIDA DEL CULTIVO DE LAS BACTERIAS

SEGUNDA ETAPA
La segunda fase es la etapa de CRECIMIENTO EXPONENCIAL, en la que la bacteria se multiplica espontneamente por divisin binaria en esta fase de la vida de una colonia se puede medir experimentalmente una importante caracterstica que es particular de cada especie de bacterias y que la distingue de las dems especies, que es el periodo de duplicacin y que corresponde al tiempo que demora en duplicarse la poblacin bacteriana bajo ciertas condiciones estandarizadas.

CICLO DE VIDA DEL CULTIVO DE LAS BACTERIAS

TERCERA ETAPA
La tercera fase corresponde a la ETAPA ESTACIONARIA o de crecimiento de la poblacin debido al repentino agotamiento de uno ms de los nutrientes esenciales. La poblacin bacterial en esta etapa consiste, en su totalidad de clulas completamente viables pero su crecimiento est limitado.

CICLO DE VIDA DEL CULTIVO DE LAS BACTERIAS

En cambio al entrar en la cuarta fase, comienza a disminuir la poblacin de bacterias viables motivo por el cual, esta etapa de decaimiento se conoce como FASE DE MUERTE

OBSERVACIONES DEL CULTIVO DE LAS BACTERIAS

Las bacterias usadas en la oxidacin de minerales tienen un periodo de duplicacin del orden de 20 a70 horas. Resulta entonces sumamente importante considerar que ,al planear una nueva operacin continua en un bio-reactor , se le asigna a este , desde los inicios de respectivos diseos un tiempo de residencia para el sustrato mineral , que es el que se va a oxidar que sea menor que el periodo de duplicacin del cultivo que se pretende usar en un bio- reactor operado eficientemente se deber tener las condiciones del tiempo de residencia optimizadas para lograr que el cultivo bacteriano este , en todo momento , operando en su fase de crecimiento exponencial .en su etapa estacionaria las bacterias pueden alcanzar poblaciones del orden de ms de 108 (unos cuantos cientos de millones ) individuos por centmetros cbicos

IMPORTANCIA DE THIOBACILLUS CALDUS EN LA LIXIVIACIN DE SULFUROS METLICOS

RESUMEN
Las clulas de THIOBACILLUS CALDUS pueden participar en los procesos de biolixiviacin a travs de la generacin de cido sulfrico. Adems, esta bacteria solo es capaz de lixiviar eficazmente sulfuros metlicos puros cuando son suficientemente solubles; de este modo, se lograron elevadas solubilizaciones de sulfuro de cinc pero las biolixiviaciones de sulfuro de nquel y sulfuro de cobre alcanzaron recuperaciones semejantes a los controles estriles.

INTRODUCCION
El gnero Thiobacillus comprende a bacterias capaces de obtener energa de la catlisis oxidativa de compuestos reducidos de azufre utilizando oxgeno como ltimo aceptor electrnico. De este gnero, algunas especies acidfilas (resisten muy bajos valores de pH), mesfilas (actan a temperaturas intermedias) y autotrficas (utilizan CO2 como fuente de carbono), tales como Thiobacillus ferrooxidans y Thiobacillus thiooxidans, han mostrado sistemticamente una accin importante en la solubilizacin de metales a partir de minerales sulfurados de baja ley.

PARTE EXPERIMENTAL

En las experiencias de biolixiviacin, se utilizaron como sustratos sulfuros sintticos puros en tamao de polvo (CuS, NiS y ZnS) a tres densidades de pulpa diferentes, 0.10, 0.25 y 0.5 % p/v. Los cultivos fueron realizados en frascos de 500 ml con 150 ml del medio estril descripto, previamente inoculado al 10 % v/v. El pH inicial fue 2.5 y no fue controlado durante la experiencia. Los frascos fueron agitados a 180 rpm y termostatizados a 40 C. Los controles estriles se agitados a 180 rpm y termostatizados a 40 C. Los controles estriles se prepararon reemplazando el inculo por medio estril.

Existen 4 parmetros para ebullicin del cultivo que son

1:Concentracin de protones 2:Concentracin de sulfatos 3:Poblacin bacteriana 4:pH

En muestras peridicas, se determin la concentracin del metal respectivo por espectrofotometra de absorcin atmica y la concentracin de sulfatos por turbidimetra, el pH y la poblacin bacteriana en suspensin.

RESULTADOS
En la figura 1 se muestra una cintica representativa de un cultivo de Tiobacillos. caldus sobre azufre elemental.

Figura 1: Crecimiento de T. caldus sobre azufre elemental: evolucin de protones y sulfatos (grfico externo) y poblacin bacteriana en suspensin y pH (grfico interno)

En la figura 2 se han graficado los resultados obtenidos durante la biolixiviacin de sulfuro de cinc. jhdjfhjdfhjdfhdjhdfkjfhdsjkdhdkjhdfjkhfdj

Figura 2 Biolixiviacin de sulfuro de cinc para tres densidades de pulpa diferentes utilizando clulas de T. caldus: evolucin de la concentracin de cinc en solucin (grfico externo) y evolucin de la poblacin bacteriana en suspensin (grfico interno)

CONCLUSIONES
La extraccin de metales de valor comercial con bacterias que se alimentan d pequeas sustancias es de inters en biohidrometalurgia para la explotacin de menas que por la baja concentracin del metal no se tratan con mtodos tradicionales. En la figura puede apreciarse que en un cultivo de T. caldus sobre azufre elemental, la evolucin de las concentraciones de protones y sulfatos es prcticamente paralela.