Universidad Autnoma de Sinaloa

Facultad de Ciencias del Mar

Lic. Gestin de Zona Costera
Curso: Biotecnologa Ambiental

PROCESO DE DEGRADACIN MICROBIANA DEL PETRLEO

EL PETRLEO
El petrleo es una mezcla compleja de muchos hidrocarburos gaseosos, lquidos y slidos, con un nmero de carbonos en sus molculas que varan aproximadamente entre 1 y 50 . El termino petrleo proviene del latn petra, piedra y leum, aceite. Es un lquido viscoso, de color pardo oscuro, de olor desagradable, txico, irritante e inflamable. compuesto en mayor medida de carbono e hidrgeno, con pequeas cantidades de nitrgeno, oxgeno y azufre. Se encuentra en yacimientos a diferentes profundidades en el interior de la tierra. De acuerdo con la estructura predominante en la mezcla de hidrocarburos, el petrleo se puede clasificar en Hidrocarburos Saturados, Aromticos, Asfaltenos y Resinas.

El Petrleo se clasifica en:

Hidrocarburos saturados (alifticos, lineales o ramificados, desde 1 a 50 C y cicloalcanos). Hidrocarburos aromticos monocclicos (benceno, tolueno, etilbenceno y xileno, BTEX) y policclicos (hasta 5 anillos, PAHS).

Asfaltenos y resinas:

POR SU CONTENIDO DE AZUFRE: Petrleo dulce: -Contiene <0.5% de azufre. -Es un petrleo de alta calidad. -Usado para ser procesado como gasolina. Petrleo medio: -Azufre >0.5 y <1% de azufre Petrleo agrio: -Contiene >1% de azufre -Su costo de refinamiento es mayor. -Usado mayormente en productos destilados.

BIODEGRADACIN
La biodegradacin es la disolucin qumica de los materiales por bacterias u otros medios biolgicos. Cuando hablamos de biodegradacin microbiana de hidrocarburos nos referimos al hecho de que los microorganismos pueden crecer a expensas de la utilizacin de estos compuestos qumicos.

La biodegradacin, es el resultado de los procesos de digestin, asimilacin y metabolizacin de un compuesto orgnico, en este caso algunos de los hidrocarburos que componen el petrleo que son llevados a cabo por bacterias, hongos, protozoos y otros microorganismos.

La biodegradacin de petrleo en los ecosistemas es compleja. Depende de las caractersticas de la mezcla de hidrocarburos, de los factores ambientales que regulan la actividad biolgica y de la naturaleza de la comunidad microbiana. Tambin se ve afectada por la temperatura a la que se produzca la degradacin y la luz que haya.

Se ha estudiado la diversidad de microorganismos con capacidad de degradar componentes del petrleo tanto por: a) Mtodos clsicos: cultivos de enriquecimiento en medios sintticos con hidrocarburos, pero, no se

selecciona los microorganismos con mejores capacidades sino aquellos que mejor crecen en el medio
diseado. En suelos se han aislado bacterias de los gneros Pseudomonas, Burkholderia, Acinetobacter, Sphingomonas y diversos hongos. En aguas marina, bacterias de los gneros Alcanivorax, Cycloclasticus, Oleiphilus, Oleispira, Neptunomonas, Planococcus, Marinobacter, Vibrio, Pseudoalteromonas, Marinomonas o Halomonas.

b) Tcnicas moleculares: p.ej., clonacin de los genes de ARNr 16S. Ha ampliado mucho el conocimiento sobre el espectro de bacterias presentes en ambientes contaminados con petrleo, pero esta tcnica no evidencia cules estn degradando hidrocarburos.

Gneros de levaduras, bacterias, hongos y crustceos que tienen la capacidad degradadora del petrleo:

Bacterias Hidrocarbonoclasticas

Son verdaderos especialistas en degradar hidrocarburos (no metabolizan ni azcares, ni aminocidos ni otras fuentes de C habituales). Destacan los gneros Alcanivorax(especializados en Cycloclasticus (asimila slo hidrocarburos aromticos). degradar alcanos) y

En ambos casos se trata de bacterias marinas que estn presentes en pequeas proporciones en el agua de mar pero que llegan a ser predominantes en aguas contaminadas con petrleo.

Pseudomonas aeruginosa

Unas de las ms estudiadas a nivel molecular y el genoma de varias cepas ha sido secuenciado. Es una bacteria Gram-negativa tiene la capacidad de degradar hidrocarburos aromticos y alifticos, se puede aislar de muestras de suelo, aguas prstinas y contaminadas.

ESTUDIO DE CASO:
Este estudio tuvo como objetivos fundamentales aislar e identificar cepas bacterianas con capacidad para biodegradar petrleo en cuatro hbitats diferentes (Biopelicula, Sedimento, Agua sub superficial y Neuston) con el fin de seleccionarlas posteriormente y hacer pruebas de degradacin a nivel de microcosmos, con el fin de contribuir en un futuro a biorremediar aguas de zonas costeras contaminadas por petrleo.

Materiales y Mtodos:
Caldo nutritivo Agar nutritivo Agar-agar comerciales marca Merck
El caldo de pre-enriquecimiento se prepar con: (NH4) H2PO4 (0.9mg/L) marca R.A. Chemicals, agregando Diesel al 1% El caldo de enriquecimiento fue preparado con sales grado reactivo marca Merck: K2HPO4: 1.5 /; KH2PO4: 0.5g/L; (NH4)2SO4: 0.5g/L; NaCl: 0.5g/L; MgSO4: 3.0g/L; FeSO4: 0.002g/L; CaCl2: 0.002g/L, todos en 1.000mL de agua destilada, suplementados con crudo de petrleo al 1%. El medio mineralizado slido se obtuvo agregando agar-agar 15g/L con 1% de crudo de petrleo.

Etapa de Pre-enriquecimiento:
a. En esta etapa, se inici una adaptacin de los microorganismos en los diferentes hbitats muestreados con diesel como fuente de carbono y energa. La coloracin de Gram permiti apreciar bacilos gram negativos, cocobacilos gram negativos, bacilos gram positivos, cocos gram positivos, algas y protozoos. En los cuatro hbitats fue la prevalencia de bacilos y cocobacilos gram negativos, siendo marcada la gran diversidad en el hbitat de biopelcula. Al finalizar los 7 das de incubacin se realizaron cultivos sobre agar nutritivo, evidenciando crecimientos entre moderados y abundantes, de veintiocho colonias con morfologas diversas. As mismo, en algunos cultivos se present pigmentacin de color verdoso, pensando en posibles bacterias del gnero Pseudomonas. En esta etapa, fue evidente en la muestra de Neuston y de agua sub superficial la formacin de natas blanquecinas transparentes mientras que las muestras de sedimento y biopelcula presentaron abundante turbidez, nata en la parte superior y formacin de sedimento

b.

c.

d.

e.

f.

g.

Etapa de Enriquecimiento:

a. La fase de enriquecimiento const de un proceso de tres semanas.

b. Inicialmente, pasados 7 das de incubacin de las muestras pre enriquecidas, se tom 1 ml de estas y se sembraron cada uno en tubos con caldo de enriquecimiento (caldo mineralizado + 1% de petrleo crudo).

c.

Se incubaron a 37C por 7 das con agitacin continua.

d. Al hacer un seguimiento de los cambios en los tubos en la tercera semana de enriquecimiento, se evidenci turbidez y cambios en las propiedades del crudo de petrleo, al disgregarse y sedimentarse, hasta la desaparicin de aproximadamente el 90% toda la mancha de coloracin oscura, con formacin de un sobrenadante amarillento.

CONCLUSIONES

En relacin con la metodologa, la seleccin de microorganismos a travs de pruebas sucesivas de crecimiento poblacional en cultivos puros enriquecidos con petrleo, es considerada como una estrategia eficiente para evaluar la adaptacin y supervivencia de cepas tolerantes a elevadas concentraciones de petrleo.

As mismo, los resultados de esta investigacin representan importancia que el grupo predominante en los aislamientos fueron los bacilos Gram negativos. Estos, tienen una ventaja amplia frente a las bacterias Gram positivas, debido a que son considerados importantes degradadores de hidrocarburos por la presencia de lipopolisacaridos en su membrana, que facilitan la formacin y estabilizacin de emulsiones de hidrocarburos en sistemas acuosos y contribuyen al incremento en la superficie de ataque del contaminante

Algunos autores sustentan que las comunidades microbianas en reas contaminadas son dominadas por los organismos capaces de utilizar o sobrevivir a compuestos txicos, como los ambientes contaminados con hidrocarburos, tal es el caso del

gnero Pseudomona.

La Pseudomona aeruginosa ha sido identificada como un gnero destacado en diversos procesos de degradacin y es la que con mayor frecuencia se asla de ambientes contaminados con hidrocarburos.