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Determinacin de la concentracin letal (CL50) del K2Cr2O7 en Artemia Salina

Un bioensayo es el proceso experimental mediante el cual se determinan las caractersticas y la fuerza de una sustancia potencialmente txica o de un desecho metabolito, a travs del estudio de sus efectos sobre organismos cuidadosamente escogidos y bajo condiciones especficas de laboratorio. La dosis necesaria para producir un efecto txico particular en 50% de los animales se llama dosis txica media (DT50). Si el efecto txico causa la muerte del animal, se puede definir experimentalmente la dosis letal media (CL50). La CL50 es la concentracin a la cual hay muerte en el 50% de la poblacin estudiada. Es la dosis a la cual existe el 50% de probabilidad de morir en slo individuo. (1) La determinacin de dicha concentracin se lleva a cabo mediante el tratamiento estadstico de la relacin entre la concentracin suministrada y el nmero de muertes dentro del ensayo del efecto letal de un frmaco para una poblacin determinada de un organismo in vivo. El dicromato de potasio K2Cr2O7 es un polvo color naranja con propiedad oxidante y de alta toxicidad para los organismo vivos ya que entra a las clulas a travs de canales inicos del sistema de transporte del sulfato, produciendo reacciones oxido-reduccin orgnicas intracelulares dando lugar a la formacin de radicales hidroxilos, Cromo (V) y de Cromo (III), ste ltimo altera los procesos de replicacin y transduccin del ADN, por lo que el K2Cr2O7 es clasificado como carcingeno. (2) Como defensa natural ante estos agentes txicos las clulas producen un grupo de compuestos denominados antioxidantes, generalmente son vitaminas como la A,C y E con la caracterstica de que se oxidan con facilidad para proteger de la oxidacin a otros compuestos corporales. (3) Artemia salina es un pequeo crustceo de la subclase de los anostrceos y conforma el plancton de las aguas continentales. El modelo in vitro de artemia salina se utiliza para el estudio preliminar de la CL50 de frmacos debido a las ventajas que ofrece, ya que no es costosa, es fcil de cultivar y manipular en laboratorio, es sensible a una gran variedad de txicos como lo es el K2Cr2O7 y genera resultados que permiten analizar el experimento. Sin embargo existen desventajas, tales como su variabilidad biolgica y la dificultad para identificar su sexo o edad y la cuantificacin de las mismas.(4) - A mayor concentracin de dicromato de potasio, mayor ser el nmero de muertes que se presenten en los viales. -Los intervalos de confianza obtenidos por los mtodos de Litchfield-Wilcoxon y Miller-Tainter sern muy similares. -La CL 50 se encontrar cerca de las concentraciones en las cuales tengamos una f cercana a 0.5.

Introduccin:

Procedimiento:

Anlisis

Resultados:

Hiptesis:

-Las pruebas que nos permiten cuantificar la toxicidad de algn compuesto son pruebas necesarias para las diferentes disciplinas de la salud como la toxicologa, sin embargo son pruebas que no pueden realizarse en seres humanos ,por lo que se requieren sistemas alternos para cuantificar su toxicidad, como el realizado en esta prctica, en donde mediante un sistema in vitro, se determin la CL50 del K2Cr2O7 en Artemia salina. Una vez definido en la Introduccin el mecanismo de accin del dicromato en las clulas podemos interpretar nuestros resultados experimentales, al observar el numero de muertes con respecto a la concentracin de dicromato en el medio podemos notar una tendencia a aumentar el nmero de muertes conforme aumenta la concentracin de dicromato en disolucin, esto es lgico y esperado ya que al aumentar la concentracin de dicromato en el medio un mayor nmero de iones atravesarn la membrana generando un mayor dao celular, es lgico tambin que algunas artemias hayan muerto con una concentracin mucho menor a otras, ya que debido a su variabilidad biolgica cada artemia ser ms o menos sensible a la fuerza oxidativa del dicromato que otras. Sin embargo el promedio, que es el valor representativo de nuestra poblacin sigue la tendencia antes mencionada, a mayor concentracin ms muertes. Como primera aproximacin podemos especular que la CL50 se encontrara entre los valores de concentracin de 4 y 6 mg/mL y que estos valores presentan un valor de f cercano a 0.5, para determinar la CL50 se utiliz un el mtodo Probit el cual linealiza nuestros datos y nos permite calcular la CL50 y posteriormente los intervalos de confianza. Cabe mencionar que al realizar la grfica de Probit vs Log C, se omiti el dato obtenido para una concentracin de10mg/mL debido a que present una menor f que la concentracin anterior(8mg/Kg), por lo que no segua la tendencia general. El valor de R2 para el modelo Probit no fue tan cercano a 1, esto nos dice que nuestro experimento no present un comportamiento del todo lineal, esto se aprecia claramente en la forma curva de nuestra grfica. Finalmente la CL50 calculada fue muy parecida a la esperada como primer estimacin, sin embargo nuestros intervalos de confianza calculados no estn dentro del intervalo reportado en la literatura que es de (6.7x10-5 a 0.0599) mg/mL (5) ,este valor es muy bajo comparado con el que manejamos en la prctica, la gran diferencia entre la concentracin calculada y la reportada puede atribuirse a la variabilidad biolgica de las artemias salinas. El intervalo de confianza nos da un rango de concentraciones, a las cuales existe cierta probabilidad (En este caso 0.95) de que el 50% de los organismos presenten el efecto estudiado.
-Se pueden utilizar sistemas biolgicos alternos a los mamferos y roedores tpicos de las prcticas de laboratorio para conocer la toxicidad de algunas sustancias, el uso de animales en sistemas in vitro es una herramienta muy til para calcular dosis letales. -A pesar de que un experimento no tenga un comportamiento del todo lineal, el mtodo Probit nos permite calcular CL50 de forma muy efectiva. -Los dos mtodos propuestos en clase para calcular los intervalos de confianza son igualmente validos ya que arrojan valores muy similares. -El Cromo (VI) es un agente oxidante muy fuerte y muy txico, a concentraciones muy bajas puede causar efectos txicos y letales en diferentes sistemas biolgicos, por lo que su mal tratamiento representa un riesgo para el medio ambiente y la salud pblica.

de

resultados

Conclusiones:

Objetivos:
-Calcular la CL50 de dicromato de potasio mediante el anlisis Probit de la curva dosis-respuesta cuantal en el sistema biolgico de artemia salina. -Manejar un sistema biolgico alterno a los mamferos y roedores para la determinacin de una curva concentracin-respuesta cuantal.

Referencias:

(1): Rang, H. P. Farmacologa. Ed. Elsevier Science. 4 edicin, Espaa 2002. (2)http://www.scielo.org.pe/pdf/rins/v25n1/a08v25n1.pdf (3) Skoog, Qumica Analtica Ed. McGraw Hill, 7 ed. Mexico 2002 (4) http://biblioteca.portalpez.com/la-artemia-salina-vp15740.html (5) United Nation Environment Programme (UNEP) (1988) International Programme of Chemical Safety (IPCS). Environmental Healt Criteria (EHC) 61, Chromium.