Citometra de flujo

Es una tecnologa biofsica basada en la utilizacin de luz lser, empleada en el recuento y clasificacin de clulas segn sus caractersticas morfolgicas, presencia de biomarcadores, y en la ingeniera de protenas. En los citmetros de flujo, las clulas suspendidas en un fluido atraviesan un finsimo tubo transparente sobre el que incide un delgado rayo de luz lser, la luz transmitida y dispersada por el pasaje de las clulas a travs del tubo se recoge por medio de unos dispositivos de deteccin, permitiendo hacer inferencias en cuanto a tamao y complejidad de las clulas. Tambin permite el anlisis multiparamtrico simultneo de otras caractersticas fsicas y qumicas, evaluando en promedio ms de dos mil partculas por segundo.

Su tamao relativo. (Forward scatter-FSC)

QUE NOS PUEDE DECIR LA CITOMETRIA DE FLUJO DE CADA CELULA?

Su granularidad o su complejidad citoplasmtica. (Side scatter-SSC)

Su intensidad de fluorescencia relativa. (FL1, FL2, FL3 o FL4

COMO DETECTA EL CITOMETRO ESTAS

CARACTERISTICAS SOBRE LA CELULA?

El citmetro de flujo detecta la interaccin entre una clula y un rayo lser. La forma que la clula:

Desva la luz incidente.

Emite fluorescencia.

Un ordenador para el anlisis de las seales.

Un citmetro de flujo tiene cinco componentes principales:

Un sistema de medicin, los ms comnmente utilizados son la medicin de la impedancia o conductividad (principio Coulter) y los sistemas pticos.

Un sistema de amplificacin, lineal o logartmico.

La celda de flujo laminar, donde el lquido circulando en rgimen de flujo laminar acarrea y pone en lnea a las clulas de modo que pasen a travs del rayo de luz de a una y en fila.

Un detector y un conversor de seales ADC (anlogo a digital), los cuales registran la seal producida (sea FSC, SSC, SFL) y la convierten en una seal elctrica que puede ser procesada por un computador.

Un sistema de iluminacin formado ya sea por lmparas de alta luminosidad (de mercurio, xenn) lseres de alta potencia refrigerados por agua (de argn, de criptn, de tinturas), lseres de baja potencia refrigerados por aire (de argn 488 nm), lser rojo de helio-nen ( 633 nm), verde de helio-nen, ultravioleta de helio-cadmio; lseres de diodo de baja potencia (azul, verde, rojo, violeta).

REALIZACIN DE CITOMETRIA DE FLUJO:

Se hace en 3 etapas independientes :

Fase pre-citometra: preparacin de los reactivos, preparacin de las clulas, diseo del protocolo y coloracin de las clulas con los reactivos fluorescentes.

Fase de citometra de flujo : involucra el procesamiento de las clulas marcadas y la recoleccin de los datos para cada una de las medidas (parmetros) realizados en cada clula individual.

Fase de anlisis: anlisis de los datos recolectados

EL CITOMETRO NECESITA UN SISTEMA COMBINADO DE :

Fluidos, para introducir y restringir las clulas para anlisis

Optica , una fuente de excitacin y un sistema coleccin para generar y recoger las seales luminosas. El sistema de excitacin consiste en un lser, lentes y prismas para dirigir el rayo. El sistema de coleccin consiste en espejos pticos y filtros para encaminar determinadas longitudes de onda hacia detectores pticos determinados.

Electrnica, para convertir las seales pticas en seales electrnicas proporcionales y digitalizarlas para anlisis computacional.