Clasificacin de vectores

Vectores No virales

Mtodos qumicos:
fosfato clcico
Liposomas
Mediados por receptores

Mtodos fsicos
Biolstica disparo de
partculas
Microinyeccin
Electroporacin
Vectores Virales

Retrovirus

Adenovirus

Herpes virus

Virus adenosasociados
VIRALES
RETROVIRUS

ADENOVIRUS

ADENOASOCIADOS

HERPEXVIRUS
RETROVIRUS
Caractersticas
Genoma es ARNss y durante su ciclo vital utiliza la
maquinaria replicativa de la clula husped para lo
cual se retrotranscribe a ADNds integrndose en el
genoma.
Organizacin del genoma: 10Kb que codifican 3 genes
gag: antgenos, protenas de cpsida y matriz
pol: transcriptasa inversa, proteasa e integrasa
env: protenas de la envoltura del virus
LTRs: Extremos del genoma (ADN ya) con actividades
promotoras y secuencias para la integracin.
A
D
E
N
O
V
I
R
U
S
Caractersticas
Genoma es ADNds lineal. Su ciclo vital requiere la
divisin celular y provoca una infeccin productiva de
clulas tolerantes durante la cual se acumulan en el
ncleo grandes cantidades de virus. Estn asociadas con
enfermedades benignas en humanos
Organizacin del genoma: 35 Kb con varias unidades de
transcripcin, proceso que se realiza de manera
secuencial.
Genes E1 activa otros genes tempranos
Genes E2 protenas involucradas en la replicacin ADN
Genes E3 funciones para detener mecanismos de defensa
Genes E4 funciones regulan la transcripcin entre las fases
primaria y secundaria del ciclo viral
ADENOASOCIADOS AAV
Caractersticas
Genoma ADNs lineal. Virus muy pequeo y simple..
Requiere la coinfeccin con adenovirus u otros para
replicarse.
Extendido en humanos pero no asociado a enfermedad
conocida. Se integran de manera especfica en el
cromosoma 19 en ausencia de virus ayudante.
Organizacin del genoma muy simple, solo 2 genes
rep: proteinas involucradas en replicacin e
integracin
cap: 3 protenas estructurales
Extremos TR
HERPESVIRUS
Caractersticas
Genoma ADNds lineal. Virus de 100-250Kb.
Gamma: infeccin latente en clulas en divisin,
replicndose con la clula y siendo heredado.
Alfa: no pueden mantener la infeccin latente en clulas en
divisin. Puede mantenerse de manera epismica
indefinidamente en clulas de larga duracin (ej: neuronas
sensoriales en HSV) Tropismo especfico por el SNC
Beta: desconocimiento de la naturaleza de la infeccin
latente
Organizacin del genoma 2 trozos de ADNds unidos
llamados molcula L y molcula S, las cuales se unen por
sus secuencias terminales TRL y TRS. Pueden unirse de 4
formas diferentes ismeros
METODOS QUIMICOS
METODOS FISICOS
VECTORES NO VIRALES
Primeros vectores desarrollados
ADN exgeno integrado en un plsmido que se
mantendr de manera epismica, independiente
del genoma de la clula diana.
Sencillos de producir y ms econmicos
No tienen limitaciones de tamao del ADN
vehiculizado
Poca toxicidad no inmunognicos
Baja eficiencia de transduccin
Algunos solo validos in vitro
Mtodos Fsicos
1. BOMBARDEO DE PARTCULAS
ADN situado en gotas de 1-3
micras de oro o tungsteno y
aceleradas por gas por
descarga elctrica.
Fcil manejo.
Varias integraciones en un disparo
Muerte celular en la zona
Capacidad penetracin
limitada
Variable eficacia de la
expresin
Necesidad de muchas dosis.
2. INYECCIN DIRECTA DE ADN
ADN introducido en el ncleo de las clulas gracias a un
micromanipulador. Se utiliza frecuentemente en
estudios ex vivo
Mtodos Fsicos
Evita la degradacin lisosomal y citoplasmtica
Alta eficiencia en la expresin
laborioso, necesita clulas aisladas.
Existen clulas que no sobreviven
Mtodos Qumicos
3. Liposomas catinicos:
Bolsas rodeadas de membrana lipdica capaces de interaccionar
con los fosfatos del ADN, condensndolo y con las cargas
negativas de la membrana celular mediante enlaces
electroestticos.
In vivo eficacia de transfeccin disminuida.
Libera el ADN en el citoplasma, evitando la degradacin
lisosomal.
El ADN compactado queda protegido de nucleasas
No tiene lmite de tamao de ADN a transducir
Baja inmunogenicidad