Reacciones Bisustrato

o multisustrato
David Zapata Carvajal
5to
19/06/2012
Reaccin Bisustrato


60% Rx Bioqumicas (dos S y dos P)
Fosforilo, Amonio
Transferencia de grupo funcional de un S a otro S1

Rx oxidorreduccin electrones se transfieren entre
sustratos

Nomenclatura



Nmero de sustratos y productos:

Desplazamiento secuencial
Desplazamiento simple

Desplazamiento doble


Orden de ingreso de sustratos y salida los productos:

Mtodo Cleland
Dificultad al representar los esquemas de Rx.
Varios sistemas, ms xito
Wallace Cleland
Progreso de la reaccin se simboliza por una lnea horizontal.
La entrada de sustratos y la salida de productos se representan
por flechas verticales
Ejemplos



Secuencial: Bi-Bi ordenada



Desplazamiento: Uni-Uni-Uni-Uni Ping-Pong

E E EA EAB
A
B
EQ
P Q
EPQ
E E EA E
A
P
EB
B Q
Desplazamiento secuencial

Formacin de complejo TERNARIO EAB o EBA
Sustratos se unen a la enzima antes de la
liberacin de producto.
La formacin del complejo ternario es independiente del orden de
unin de los sustratos.

Reacciones secuenciales al azar,
La formacin del complejo ternario
orden determinado
Complejo sea eficiente desde el punto de vista cataltico.

Reacciones secuenciales ordenadas.
Rx. secuenciales ordenadas.




Enzimas con sustratos NAD+ o NADH
Lactato deshidrogenasa

E E EA EAB
A
B
EQ
P Q
EPQ


Caso particular
Mecanismo de Theorell-Chance
no existe el complejo ternario EAB
ni EPQ
E E EA
A
B
EQ
P Q
Ejemplo
La alcohol deshidrogenasa cataliza la
oxidacin de etanol por (NAD+)
produciendo NADH y acetaldehido
Rx secuenciales al azar






E + A EA
E + B EB
EAB EPQ
EQ E + Q
EP E + P
B
A
P
Q
E E
A B
EA
B A
EB
EAB
Q
Q P
P
EP
EQ
EBA
EPQ
EQP

Rx. secuenciales al azar
Orden y liberacin de productos al azar
Creatina quinasa Fosfocratina + ADP





Mecanismo ping-pong o de doble
desplazamiento
Los productos se liberan antes de que todos los sustratos se
unan al enzima.
Intermediario del enzima sustituido.
Enz. modificada temporalmente.
EM. une al siguiente sustrato, catalizando la
formacin del segundo producto con regeneracin de
la forma nativa de la enzima.
Transferencia de grupos amino entre aa. y -cetoacidos.
Mecanismo ping-pong


Ejemplo: Nomenclatura de Cleland.
E E
S
u
c
c
i
n
i
l
-
C
o
A

H
S
C
o
A

P
i

S
u
c
c
i
n
a
t
o

G
D
P

G
T
P

Succinil-E
E-P
Ecuaciones de velocidad de reaccin:
Condiciones:
Supondremos la formacin de un equilibrio rpido: entre la E y
los S.
2.
3. Supondremos la existencia de condiciones de
estado estacionario
(E
o
) = E(EX
i
)
Mecanismo Secuencial Bi Bi al azar.

E
A B
EA
EB
EAB
kcat
K
A
K
B
K
M
AB
K
M
BA
EBA
E + P+ Q
A + B P +Q
v = kcat [EAB=EBA]
| || |
| |
| || |
| |
| || |
| |
| || |
| |
| | | | | | | | | | EAB EB EA E E EC
EBA
B EB
K EC
EAB
B EA
K EC
EB
B E
K EC
EA
A E
K EC
T
M
M
B
A
BA
AB
+ + + =
=
=
=
=
. 5
. 4
. 3
. 2
. 1
| | | |
| |
| |
| | | |
| |
| | | |
| | | | | | | | | |
| | | | | |
| |
| |
| | | | | |
A M B A
T
T
A M
M
M
K K
B A
E
K
B
E
K
A
E E E
EAB EB EA E E
K K
B A
E EAB
K
B EA
EAB
EAB
B EA
K
AB
AB
AB
AB
] [
] [
+ + + =
+ + + =
=
=
=
De Ec.3 despejo EAB= Ec.6
Ec.1 en Ec.6
Ec.1,2,6 en Ec.5
| |
| || |
AB
M AK K
B A
E kcat v =
v = kcat [EAB]

Vmax = kcat [E
T
]
Concentraciones saturante de A y B



| |
| || |
| | | || | B A K B K A K K
B A
E kcat v
BA AB AB
M M M A
T
+ + +
=
(

| || |
| | | || | B A K B K A K K
B A
V v
BA AB AB
M M M A + + +
=
(

max
Un substrato constante pero no saturante
Constante A
| || |
| | | || | B A K B K A K K
B A
V v
BA AB AB
M M M A + + +
=
(

max
| |
| | B K
B
V v
+
=

max
| |
(

+
|
.
|

\
|
(

+
+
=
=
A K
A K K
K
A K
A V
V
BA
AB
BA
M
A M
M

max
max
| || |
| | | || |
| |
| |
| | | || |
| |
| |
| |
| | | |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| | B
A K
A K K
B
A K
V
v
B
A K
K A K K
B
A K
V
v
A K
B A K K A K K
B
A K
V
v
A K
B A K B K A K K
B
A K
V
v
B A K B K A K K
B A
V v
BA
AB
BA
BA
AB AB
BA
BA
BA AB AB
BA
BA
BA AB AB
BA
BA AB AB
M
A M
M
M
M M A
M
M
M M M A
M
M
M M M A
M
M M M A
+
+
+
=
+
+
+
+
=
+
+ + +
+
=
+
+ + +
+
=
+ + +
=
(

+
(

) (
max
max
) (
max
max
max
Igual se hace para [B] constante pero no saturante
| || |
| | | || | B A K B K A K K
B A
V v
BA AB AB
M M M A + + +
=
(

max
| |
| | A K
A
V v
+
=

max
| |
(

+
|
.
|

\
|
(

+
+
=
=
B K
B K K
K
B K
B V
V
AB
BA
AB
M
B M
M

max
max
[A]
V
max

V`max
K
M
BA
| |
(

+
=
A K
A V
V
BA
M
max
max
(

+
|
.
|

\
|
(

+
=
A K
A K K
K
BA
AB
M
A M

K`
[A]
K
B
K
M
AB
Obtencin de las constantes cinticas
[A] =0
[B]
V
max

V`max
K
M
AB
| |
(

+
=
B K
B V
V
AB
M
max
max
K`
[B]
K
A
K
M
BA
(

+
|
.
|

\
|
(

+
=
B K
B KB K
K
AB
BA
M
M

| |
| | A K
A
V v
+
=

max
| |
| | B K
B
V v
+
=

max
[A] cte [B] cte
Anlisis de la ecuacin: Un substrato
constante y saturante


| |
(

+
|
.
|

\
|
(

+
+
=
=
A K
A K K
K
B K
B V
V
BA
AB
BA
M
A M
M

max
max
| || |
| | | || | B A K B K A K K
B A
V v
BA AB AB
M M M A + + +
=
(

max
| |
| | A K
A
V v
AB
M +
= max
| |
AB
AB
M
M
K
A
A K
K
V
B
B V
V
= =
= =
(

|
.
|

\
|
(

max
max
max
[B] Muy
grande
Anlisis de la ecuacin: Un substrato
constante y saturante

| || |
| | | || | B A K B K A K K
B A
V v
BA AB AB
M M M A + + +
=
(

max
| |
| | B K
B
V v
BA
M +
= max
| |
BA
BA
M
M
K
B
B K
K
V
A
A V
V
= =
= =
(

|
.
|

\
|
(

max
max
max
[A] Muy
grande
| |
(

+
|
.
|

\
|
(

+
+
=
=
B K
B K K
K
A K
A V
V
BA
AB
BA
M
A M
M

max
max
Mecanismo secuencial Bi-Bi ordenado


Q P E EAB B EA A E + + + +
K
A
Km
AB
kcat
| || |
| |
| || |
| |
| | | | | | | | EAB EA E E
EAB
B EA
Km
EA
A E
K
T
AB
A
+ + =
=
=
= v
| |
| || |
| || | B A K A K K
B A
E kcat v
AB AB
M M A
T
+ +
=
(

V=kcat[EAB]
| || |
| || | B A K A K K
B A
V v
AB AB
M M A + +
=
(

max

Constante B
| || |
| || | B A K A K K
B A
V v
AB AB
M M A + +
=
(

max
| |
(

+
(

+
=
=
B K
K K
K
B K
B V
V
AB
AB
AB
M
M A
M
`
max
`max
[B]
V
max

| |
| | A K
A
V v
+
=
`
`max
V`max
Regresin No-linear
Vmax
K
M
AB
K`
K
A

Constante A
| || |
| || | B A K A K K
B A
V v
AB AB
M M A + +
=
(

max
| |
| | B K
B
V v
+
=
`
`max
AB
AB
M
M A
K
A
K K
K
V V
+ =
=
`
max `max
K`
K
M
AB
Pendiente es igual:
K
A
K
AB

[A]

k
1
k
2
k
3
k
4

E +A EA P + E* + B E*B E + Q
k
-1
k
-3

K
M
A
K
M
B
v = k
4
[E*B]
| || |
| |
| || |
| |
| | | | | | | | | | B E E EA E E
B E
B E
k
k k
K
EA
A E
k
k k
K
T
B
M
A
M
* *

*
3
4 3
1
2 1
+ + + =
=
+
=
=
+
=

Las constantes de Michaelis y el balance de masas en el estado estacionario

4 k kcat =
La velocidad de reaccin es la descomposicin del complejo EB

| || |
| | | | | || |
|
.
|

\
|
+ + +
|
.
|

\
|
=
2
4
2
4
1
max
k
k
B A A K B K
k
k
B A V
v
B
M
A
M
Despejando [E*B]de las ecuaciones anteriores
ECUACIN DE VELOCIDAD EN MECANISMO
BI BI PING PONG
2
4
4 2
4
k
k
k k
k kcat
=
>>>>
=
o
| || |
| | | | | || | B A A K B K
B A V
v
B
M
A
M
+ +
=
o
max
Paso limitante

Constante B
| || |
| || | B A A K B K
B A
V v
BA AB
M M + +
=
(

max
| |
(

+
(

+
=
=
B K
B K
K
B K
B V
V
B
A
B
M
M
M
o
`
max
`max
[B]
V
max

| |
| | A K
A
V v
+
=
`
`max
V`max
Regresin No-linear
Vmax
K
M
B
K`
[B]
K
M
B
oK
M
A
K
M
B

Constante A
| |
| | A K
A
V v
+
=
`
`max
| |
| |
| |
| | A K
A K
K
A K
A V
V
A
B
A
M
M
M
+
=
+
=
o
o
`
max
`max
| || |
| || | B A A K B K
B A
V v
BA AB
M M + +
=
(

max
[B]
V
max

V`max
K`
[B]
oK
M
A
K
M
B
oK
M
A
Regresin No-linear
Vmax
K
M
A