CULTIVO IN VITRO DE

VEGETALES
Dra Mara Alejandra Alvarez
Cultivo de tejidos
Presupone el cultivo de plantas o partes de
plantas (explantos) en un medio de cultivo
apropiado
El cultivo se desarrolla en condiciones de
temperatura, humedad, fotoperodo e irradiancia
controlados.
La manipulacin se realiza en cabinas de flujo
laminar
Esta tcnica es importante en la propagacin de
especies de inters agroforestal:
micropropagacin
Producen innumerables productos de
importancia en la industria farmacutica,
cosmtica y alimentaria, como alcaloides,
compuestos aromticos o pigmentos.
Los cultivos in vitro permiten obviar los
inconvenientes derivados de condiciones
geogrficas, climticas y de tiempo de
produccin.

Plasticidad


Totipotencialidad
Es la capacidad de una clula vegetal de dar
lugar al desarrollo de una planta completa
Las clulas totipotentes son clulas
somticas que han retenido su capacidad de
dividirse y diferenciarse en una planta
madura si se coloca en el medio adecuado.
Definicin
Cultivo asptico in vitro de cualquier parte de una
planta en un medio nutritivo.
Tipos de cultivos:

cultivo de clulas
cultivo de tejidos
cultivos de rganos

Cultivos vegetales
Cultivos agronmicos

Cultivos in vitro
1. Cultivos diferenciados ( races, tallos,
embriones, races y tallos
transformados)
2. Cultivos indiferenciados ( callos,
suspensiones)
Cultivos indiferenciados
Callos : en medio slido,
crecimiento lento, gran
heterogeneidad celular,
Cultivos en suspensin:
derivan de los anteriores, en
medio lquido de
composicin adecuada,
crecimiento ms rpido y
homogneo.
Composicin del medio de
cultivo. Fuente de carbono,
minerales, vitaminas,
fitohormonas (auxinas,
citoquininas)

Tejidos no diferenciados ( a veces diferenciados), en
divisin activa.
Frecuentemente se desarrollan a partir de heridas.

Mezcla de sustancias en los que las clulas, tejidos
y rganos pueden.
Sustancias inorgnicas: N, P, K, Ca, Mg, Cl, Na
Cu, Zn, Mn, Fe, Bo, Mo, Co, I
Suplementos orgnicos complejos: leche de coco,
extracto de levadura.
Reguladores de crecimiento : hormonas.
Fuente de carbono: sacarosa
Con o sin agar: medio semi -slido o lquido.
Hormonas/ Fitohormonas:
Auxinas: grupo de hormonas vegetales
(naturales o sintticas) que
inducen la elongacin, o en
algunos casos la divisin celular.
Frecuentemente inducen
races adventicias e
inhiben la formacin de
tallos adventicios.
Cytokininas: grupo de hormonas
vegetales (naturales o sintticas) que
inducen divisin celular y
frecuentemente tallos adventicios y en
muchos casos inhiben la formacin de
races adventicias.
Reglas generales para la accin hormonal:
Auxina : Cytokinina = ~1 Callo
Auxina : Cytokinina < 1 Tallo
Auxina : Cytokinina > 1 Races

1. Explanto: porcin de tejido u rgano que se separa
de la planta para iniciar el cultivo.

2. Esterilizacin: procedimiento para la eliminacin
de microorganismos.
Autoclave: aparato en el que el medio, material d vidrio,
instrumental, etc., es esterilizado por vapor bajo presin
(121
o
C, 15 psi, 10-20 min.).
Requerimientos de asepsia: desinfeccin de superficie del
explanto: generalmente usando lavandina comercial diluido
para evitar el desarrollo de microorganismos.
Cabina de flujo laminar: rea de trabajo, mantenida estril
por el flujo continuo, no turbulento de aire estril.

Subcultivo: pasaje de
clulas, tejidos,
rganos, etc. Desde un
medio de cultivo
agotado a otro medio
fresco.
Micropropagacin:
propagacin vegetativa
in vitro de plantas.

Diferenciacin: desarrollo de clulas o tejidos con una funcin
especfica y/o regeneracin de rganos, estructuras tipo rganos (races,
tallos) o embriones.
Adventicios: desarrollo de rganos (races, yemas, tallos, flores, etc.) o
embriones (embryo-like structures) desde puntos de origen no usuales,
incluyendo callos.

Formacin de tallos, races, flores, etc.
Regeneracin de una planta completa!!
Explanto
Organognesis
Formacin de tallos
Formacin de races
Enraizamiento Tallos
Planta completa
Embriognesis (formacin de
embriones)
Proceso mediante el cual se desarrolla un embrin a partir de una clula
huevo fertilizada o asexualmente desde un grupo de clulas somticas
(embriognesis somtica).



Procedimiento para la regeneracin va embriognesis
somtica
1. Iniciacin: callos embriognicos
2. Proliferacin: callos embriognicos, masas
proembriognicas (PEM)
3. Desarrollo y maduracin de embriones : embriones
4. Germinacin de embriones (Regeneracin)
Estados de desarrollo en dicotiledneas:
Masas proembriognicas
Estado globular
Torpedo
Embrin somtico

Semillas artificiales

Semillas sintticas (artificiales)
1. Produccin en masa de semillas genticamente mejoradas.
2. Procedimientos:
Encapsular en cpsulas de gel, recubrir con una cubierta
adecuada, almacenar
3. Encapsulacin de embriones somticos: proteccin, nutricin,
permeable al agua, biodegradable.
Polmeros: gel de alginato, gelatina, agar, goma, etc.

Variacin fenotpica, gentica o epigentica en su origen.
Permite describir la variabilidad gentica observada en
tejidos regenerados a partir de cultivos in vitro
Es comn cuando se regeneran plantas a partir de callos, o
cuando los cultivos se establecen a partir de explantos que no
contienen un meristema pre-organizado.
En muchos casos, el grado de variacin es proporcional a la
duracin del cultivo in vitro.
Se aplica para mejora de cultivos
Protoplasto: clula vegetal sin pared celular
Procedimiento:
(1). Digestin de la pared celular: celulasa,
hemicelulasa, pectinasa
(2). Regeneracin de la pared celular: usualmente
dentro de las 24 hrs
(3). Divisin celular: la primera divisin ocurre
dentro de las 24-48 hrs
(4). Proliferacin y diferenciacin
Aislamiento, cultivo y fusin de protoplastos


Aplicaciones:
1. Remocin de pared para captacin de DNA :
Microinyeccin y electroporacin
2. estudios de sntesis de pared celular, transporte
de membrana, citoesqueleto.
3. estudio de desarrollo de embriones somticos.
4. hibridizacin somtica (cybridizacin) de
especies sexualmente compatibles o incompatibles,
por fusin de protoplastos se obtiene un nuevo
germplasma.
Aplicaciones

1. Mantenimiento del background gentico deseado:
micropropagacin
2. Produccin en gran escala de cultivares apropiados:
embriognesis somtica
3. Sntesis de productos usando tcnicas de cultivo
continuo
4. Eliminacin de virus y otros patgenos
5. Regeneracin de plantas obtenidas por ingeniera
gentica
Cultivos diferenciados
Races y tallos
transformados: obtenidas
por transformacin gentica
con la bacteria patgena del
suelo Agrobacterium sp.
Se pueden usar para la
produccin de metabolitos
derivados de races,
crecimiento rpido, mayor
estabilidad gentica, mayor
productividad.

Tecnologa del ADN recombinante
El uso de la biotecnologa moderna implica,
inicialmente, el conocimiento y aislamiento de
secuencias de ADN que corresponden a genes
responsables de conferir una caracterstica
deseada (fenotipo)
El aislamiento de los genes de inters es
realizado por medio de tcnicas de clonado
molecular
Clonado molecular
Induccin de la amplificacin de una secuencia de
ADN en un organismo vivo.
Vectores de clonado (plsmidos o virus): vectores en
los que la secuencia de ADN es introducida usando una
DNA ligasa. Cuando es necesario el fragmento de
ADN de inters puede ser liberado del vector por
medio de enzimas de restriccin.
Una vez aislados los genes de inters son incorporados
al organismo blanco resultando en un organismo
genticamente modificado (OGM) y esta caracterstica
adquirida pasa a ser hereditaria
Es posible transferir genes de animales,
bacterias o virus a las plantas.
Se amplan los recursos para el
mejoramiento gentico.
Los genes de un organismo que son
insertados en otro se denominan
transgenes y tienen la capacidad de
conferirle a este ltimo una determinada
caracterstica.
Organismos transgnicos
Son excelentes modelos para el estudio de
procesos generales bsicos como regulacin de
la expresin gnica y la gentica molecular del
desarrollo y diferenciacin celular
Ofrecen la posibilidad de correccin de
numerosas enfermedades hereditarias: terapia
gnica
Organismos transgnicos
Pueden funcionar como bioreactores para la
produccin de protenas valiosas o con propsitos
industriales
Deben ser capaces de producir la protena de inters en
niveles aceptables sin comprometer el normal
funcionamiento de sus clulas
Deben tener la capacidad de transmitir esta
caracterstica a las siguientes generaciones
En el caso de ser un organismo multicelular deben ser
capaces de producir la protena exgena en un rgano
definido
Estrategia actual
Acoplar a la secuencia de ADN que codifica para la
protena de inters secuencias de ADN que contengan
seales responsables de dirigir altos niveles de
produccin (promotor) de la protena deseada en un
rgano especfico.
Las tcnicas para la insercin de ADN en clulas
vegetales (transformacin) usadas son:
Infeccin con Agrobacterium tumefaciens
Electroporacin de protoplastos
Mtodo biolstico
Avances
Los primeros experimentos a campo con plantas
transgnicas se realizaron en 1986 en Estados Unidos y en
Francia.
En 1996 y 1997 el nmero de pases que ensay plantas
transgnicas a campo aument a 45 habindose realizado
en 2 aos mas de 10 mil experimentos.
Los cultivos ms usados fueron: maz, tomate, soja,
batata, algodn, canola.
Las caractersticas genticas introducidas son tolerancia a
herbicidas, resistencia a insectos, calidad de producto y
resistencia a virus.

Clonado de plantas
La tcnica del clonado in vitro es posible
mediante el cultivo de tejidos

Esta tcnica se basa en la totipotencialidad de las
clulas vegetales, por medio de la regeneracin in
vitro, va organognesis o embriognesis
somtica
Transformacin

Se producen cambios por insercin de un gen
proveniente de otro organismo
La transferencia de DNA/genes de un organismo a
otro se realiza sin necesidad de reproduccin sexual.
La transformacin exitosa depende de la incorporacin
estable del gen nuevo en el genoma de la planta
receptora y su subsiguiente transmisin a sucesivas
generaciones.
Transformacin

Requerimientos
Mecanismo de transferencia del gen
Mecanismos de transferencia indirecta
Mecanismos de transferencia directa
Sistemas de regeneracin
Transformacin indirecta

Mediada por Agrobacterium:
Agrobacterium es una bacteria patgena del suelo para
dicotiledneas y algunas conferas.
Agrobacterium tumefaciens crown gall disease (tumors)
Agrobacterium rhizogenes hairy root disease (hairy
roots)
Las Monocotiledneas presentan resistencia natural a
Agrobacterium.

Transformacin

Agrobacterium tumefaciens & crown gall disease
Crown gall disease produce ndulos anormales en
races. Los rboles jvenes no crecen, en los rboles
adultos la corteza se pudre.
Esta bacteria entra al rbol a travs de heridas.
Transformacin
Agrobacterium tumefaciens
La enfermedad crown gall resulta de la
expresin de genes codificados por un
segmento de DNA de la bacteria que se
transfiere e integra en forma estable al
genoma vegetal
El fragmento de DNA bacteriano contiene
genes que producen hormonas cuando se
expresan en las clulas vegetales
ocasionando divisiones y crecimiento
anormales (tumores).
Agrobacterium es un ingeniero gentico
natural(1983).
Es un mecanismo de transferencia entre
reinos

Transformacin

Transformacin mediada por Agrobacterium
Plsmido Ti: plsmido inductor de tumores (A. tumefaciens)
Plsmido Ri: plsmido inductor de hairy roots (A. rhizogenes)
T-DNA: DNA que se transfiere
1. genes para sntesis de hormonas: codifican para enzimas involucradas
en la biosntesis de auxinas y citoquinias. La expresin de estos genes
en la clula vegetal causa la enfermedad de agalla de corona o la
formacin de hairy roots
2. Secuencias en los bordes: 25 bp direct repeats, borde derecho (RB) y
borde izquierdo (LB),a ambos lados del T-DNA. Son los elementos
necesarios (en la regin del T-DNA ) para dirigir la transferencia del T-
DNA.
Transformacin mediada por Agrobacterium

PlsmidoTi o plsmido Ri:
Genes de sntesis de opinas: responsables de la sntesis de nuevas opinas.
Opinas: derivados de aminocidos o azcares producidos por tejidos vegetales infectados que son
por Agrobacterium como nica fuente de carbono/nitrgeno.


Clasificacin de los plsmidos Ti y Ri:
Plsmidos Ti: plsmidos Nopalina
Octopine plasmid
Agropine plasmid
Succimanopine plasmid
Plsmidos Ri: plsmidos Manopina
Agropine plasmid
Cucumopine plasmid


Genes involucrados en la transferencia del T-DNA

Localizados en la regin T-DNA:
1.Genes de sntesis de hormonas
2. Secuencias de los bordes: LB y RB

Localizados en cualquier regin del plsmido Ti:
3.Genes de sntesis de opinas
4. Genes de virulencia

Localizados en el cromosoma de Agrobacterium (4 loci)
Sntesis de fibrillas de celulosa por Agrobacterium para cubrir la superficie de la clua vegetal(irreversible).
Clusters de Agro son entrampadas en la red de fibrillas de celulosa.
chvA ychvB (linked): sntesis y excrecin de 1,2-glucan
cel locus: sntesis de fibrillas de celulosa
pscA locus: afectan la sntesis de cicloglicanos y cido succinilglicano
att locus: afecta protenas de la superficie celular
Algunos de estos loci se encuentran conservados en otras bacterias del suelo que se interasocian con plantas

Genes Vir y transferencia de genes T-DNA
Las clulas vegetales se vuelven sensibles a Agrobacterium cuando
son heridas.
El proceso de transferencia se puede dividir en:
En la bacteria: proceso de conjugacin bacteriana
En la clula vegetal: las clulas heridas producen compuestos
fenlicos de bajo PM que actan como inductores especficos de
los genes de expresin vir.
Acetosyringona (AS), hirdroxi-acetosyringona (OH-AS)
Estos compuestos fenlicos actan a travs de dos sistemas para Regular la
expresin de los genes vir

Transformacin mediada por Agrobacterium
Uso del plsmido Ti de Agrobacterium como
vector de transformacin
Se remueven los genes para hormonas
(desarmado)
Para la transformacin de introducen genes en el
plsmido Ti
Clonado de DNA
Genes marcadores para seleccin: de
resistencia a antibiticos
Cassetes:
Promotor + gen + terminador
Transformacin mediada por Agrobacterium
Ventajas:
Transformacin estable

Desventajas:
No para monocotiledneas
Aplicaciones de las
tcnicas de cultivo in vitro
Micropropagacin
Mantiene la identidad gentica del material
propagado sin introducir ninguna variabilidad
gentica
Propagacin clonal rpida (floricultura,
fruticultura, plantas medicinales, silvicultura)
Eliminacin de virus (cultivo de meristemas)
hibridacin o fusin somtica (fusin de
protoplastos)
Bancos de germplasma
Semillas sintticas (embriones somticos
recubiertos de gel de alginato que tambin
encapsula nutrientes para el desarrollo del
embrin)

Resistencia a insectos
Puede ser obtenida mediante la utilizacin
de inhibidores de proteasas vegetales o a
partir de toxinas bacterianas (Bacillus
thuringiensis), o gen Bt
Como ejemplos de plantas resistentes a
insectos estn el maz, batata y soja
transgnicos
Tolerancia a herbicidas
Esta modalidad engloba a la mayor parte
de las plantas transgnicas actuales
Ejemplos: maz, eucalipto, soja, caa de
azcar
Un ejemplo cotidiano es la Soja Roundup
Ready
Resistencia a virus
Las perspectivas son cada vez mayores a medida que
aumentan los conocimientos acerca de fitovirus
Silenciamiento gnico o proteccin mediada por ARN
Por medio de la tecnologa del Agrobacterium tumefaciens o
de la biolstica y el cultivo de tejidos, es posible
introducir en la planta genes de la cpside viral
posibilitndose as la adquisicin de resistencia por
parte de la planta.
Alteracin del color floral
Dentro del mercado de la floricultura se
abren nuevas perspectivas con el clonado
de genes asociados con la coloracin de las
flores.
Tambin se abre la posibilidad de
modificar la arquitectura de la planta y de
las flores, las fragancias y la mayor
durabilidad de las flores.
Obtencin de nuevos productos y
alteracin de la calidad nutricional
La empresa Calgene produjo aceites ricos en
cido esterico.
Se alter la composicin en hidratos de carbono
con vistas a la produccin de tubrculos de
papa, aumento del contenido de almidn y
reduccin de amilosa
En el ao 2000 se inform la obtencin de arroz
genticamente modificado que produce beta-
carotenos, precursor de la vitamina A
Ingeniera metablica
Es posible alterar rutas metablicas para permitir que
las plantas, o sus clulas, funcionen como bioreactores
(reactores biolgicos).
Es posible, de esta manera, la produccin de sustancias
de valor farmacolgico, como por ejemplo, vacunas y
biofrmacos.
La manipulacin del metabolismo secundario de
vegetales, por medio de la transformacin gentica,
promete ser una de las contribuciones ms importantes
de la ingeniera gentica aplicada a la industria.
La sobre expresin constitutiva de
genes involucrados en la ruta
biosinttica de metabolitos
secundarios podr aumentar
significativamente la cantidad de
compuestos tiles producidos en
plantas.
Los avances en esta rea permitirn
aumentar las productividad de
metabolitos secundarios obtenidos
en cultivos in vitro con la
consiguiente reduccin de costos
de produccin o logrando la
produccin de nuevos compuestos.
Ejemplos de metabolitos secundarios producidos
por cultivos in vitro de clulas vegetales
Metabolito secundario Cultivo productor
Acido rosmarnico Anchusa officinalis
Ajmalicina Catharanthus roseus
Berberina Coptis japonica
Digoxina Digitlis lanata
Ginsensidos Panax ginseng
Hiosciamina Hyoscyamus niger
Nicotina Nicotiana tabacum
Piretroides Pyrethrum cinerea
Shikonina Lithospermum erytrorhizon
Taxol Taxus cuspidata
Vinblastina Catharanthus roseus
Biotransformacin
Se usan para realizar reacciones
bioqumicas sencillas en las que no se
necesita diferenciacin ni crecimiento
celular
Hidroxilacin estereoespecfica en posicin
12- de la - metil digoxina, glicsido
cardiotnico, por clulas de Digitalis lanata.

Diferencias ms importantes en el cultivo de clulas
microbianas, animales y vegetales
Caracterstica Clulas microbianas Clulas animales Clulas vegetales
Tamao 1-5 m
3
10
5
-10
6
m3 10
5
-10
6
m3
Forma de crecimiento Clulas individuales Individuales o
adheridas a
superficies
En grupos
Tiempo de generacin 1 hora 20horas >24 horas
Sensibilidad al esfuerzo
cortante
baja alta Alta
Requerimiento de oxgeno Hasta 180 mmol l
-1
h
-1
0.7-1.0 mmol l
-1
h
-1
0.5-1.8 mmol l
-1
h
-1
Requerimientos nutritivos simples complejos Simples
Poblacin celular alcanzada
en cultivo lquido
10
10
clulas ml
-1
10
6
clulas .ml
-1
10
6
clulas .ml
-1
Molecular farming


Qu es?
El Molecular farming es la
produccin de protenas de
alto valor agregado en
plantas.
Cmo se hace?
Se usa el mejoramiento gentico
para introducir y expresar genes
que codifican para protenas de
alto
Por qu en plantas?
En las plantas las protenas se pueden producir a
muy bajos costos y en grandes cantidades.
Tambin son flexibles y pueden producir una
gran variedad de protenas.


Transformacin
1 El disco de la hoja es sumergida en una suspensin bacteriana. LA
bacteria "Trojan Horse" infecta los bordes de la hoja y en este
proceso integra los genes que codifican para la protena de inters en
el genoma vegetal.






2 & 3 Despus de la infeccin los discos se ubican en medio de
seleccin para las clulas que portan el gen de la protena y regeneran
en plntulas. Luego de aproximadamente seis semanas en medio de
seleccin, un gran nmero de plntulas que portan el gen de inters
son visibles en los bordes.
4 se remueven las plntulas de los bordes de hojas y se colocan en
cajas plsticas transparentes con medio de enraizamiento.
5 Las plntulas se colocan en macetas y crecen hasta producir
semillas. Estas semillas pueden ser usadas para la produccin en gran
escala de protenas de inters farmacutico..
Trfico Proteico
6 Luego de la traduccin, la protena se mover a travs del retculo
endoplsmico y el aparato de Golgi para su procesamiento, plegado y
glicosilacin..

Produccin en campo
7 Luego de la cosecha el tejido que acumula la protena puede ser
directamente consumido o la protena puede ser extrada para un uso
posterior.



Protenas obtenidas por
Molecular Farming

Reactivos de diagnstico
Vacunas animales
Alimentos animales
Enzimas industriales
Pharmaceuticals para el hombre

Ventajas del Molecular Farming para la produccin de
protenas de uso farmacutico y enzimas industriales

1. Riesgos sanitarios reducidos de contaminacin por patgenos

2. Pueden ser escalados a costos relativamente bajos

3. Son capaces de modificaciones postraslacionales proteicas

4. Requieren de infraestructuras limitadas (para cultivo, cosecha,
almacenamiento y procesamiento del material vegetal)
5. No se requiere, en muchos casos, la purificacin de la protena (por ej.
Procesamiento de alimentos, aditivos alimenticios, fermentaciones y
vacunas orales)
Valor de mercado de los productos proteicos del
molecular farming
1. La demanda del mercado de protenas para la
industria farmacutica se incrementa
2. Las protenas expresadas en plantas resultan al
menos 10 veces ms baratas que las expresadas
en otros sistemas (por ej, microorganismos)
3. El costo de vacunas expresadas en plantas ,
anticuerpos o protenas puede ser 100- 1000
veces menor
Ventajas de los vegetales como bioreactores

Las plantas son los productores ms eficientes de
protenas
son bioreactores escalables
presentas ventajas en cuanto a costos
Las clulas vegetales son similares a las humanas en
cuanto a:
Maquinaria para sntesis proteica
Pauta de lectura del cdigo gentico
Ensamble, plegamiento y secrecin de protenas
complejas

Anticuerpos
recombinantes en
vegetales
Plantibodies
Los Anticuerpos producidos en plantas pueden ser utilizados en
especialidades medicinales?

Los anticuerpos producidos en plantas son seguros
y efectivos?
Los glicanos vegetales pueden ser inyectados?
Son para administracin oral, inhalatoria o tpica?
Las regulaciones de FDA y USDA estn
evolucionando?

Etapas del proceso
1. Clonado y expresin de los genes de
inters
2. Regeneracin y seleccin de las plantas
3. Recuperacin y purificacin de la
protena
4. Caracterizacin del producto final
Introduccin de genes de anticuerpos
en plantas
1. Transformacin con Agrobacterium.
2. Microinyeccin de cDNA en ncleo antes de
reimplantarlo en una clula anucleada (Stieger
et al. 1991)
3. Expresin transiente en hojas (Schouten et al,
1996)
4. Mtodos biolsticos
Comparacin de Anticuerpos derivados de Plantas y
Cultivos Animales
Secuencia Peptdica: idntica
Afinidad: idntica
Tipos de Anticuerpos: El sistema vegetal es ms verstil
Pueden producir isotipos incluyendo IgA secretoras
Procesamiento Post-transduccional: diferente
ncleo de glicano idntico, azcar terminal diferente
Antigenicidad & clearance: aparentemente idnticos

Anticuerpos efectivos producidos en vegetales

Anti-Streptococcus mutans (Guys 13)
Previene caries dental en humanos
Las sIgA 10X de plantas son ms estables que IgG
Nature Medicine 1998

Anti-Herpes simplex virus (HSV8)
Previene la transmisin del herpes vaginal
Probado en ratones con PAbs de arroz y soja
Nature Biotechnology 1998

Aplicaciones de la Inmunomodulacin

Estudiar la funcin de un antgeno o incluso de
un epitope en las plantas
Modificar caracteres agronmicos
Inmunizar a la planta contra un determinado
agente.

Inmunomodulacin de blancos
endgenos
Actividad de fitohormonas
ABA (scFv en ER de tabaco)
Giberellina (A 19/24 scFv en tabaco)
Inactivacin de producto final en la ruta biosinttica de
una hormona (ABA)
Modulacin de la actividad del receptor hormonal (scFv
contra fitocromo)
Inhibicin enzimtica (DFR en Petunia hybrida)

Inmunizacin intra y extracelular
Tabaco que expresa anticuerpos contra la
cubierta viral proteica de TMV
Nicotiana benthamiana que expresa anticuerpos
contra el virus BNYVV
Tabaco que expresa scFv contra factores de
infectividad de fitoplasmas y espiroplasmas
Tabaco resistente a nematodes (IgM contra
Meloidogyne incognita)

Anticuerpos contra nematodes
Genes que codifican para enzimas blanco: p.ej celulasas las cuales
han sido clonadas de M. incognita as como de otros nematodes de
este tipo. Estas enzimas desempean un papel fundamental en la
migracin hacia raz y son un excelente punto de partida para la
seleccin de anticuerpos .Se han generado tambin anticuerpos
que bloquean el inicio del ciclo celular para evitar la induccin de
las clulas de alimentacin por el nematode.
Se han obtenido y caracterizado por su capacidad para inhibir sus
blancos anticuerpos contra las protenas de TSWV :N
(importante para la replicacin viral), G1/G2 (captacin por
thrips) y NSm (distribucin en la planta).
Se han hallado motivos estabilizadores que aseguran un nivel de
expresin significativo de los anticuerpos y sus fragmentos en el
citosol de la clula vegetal.

Perspectivas
1. Regulacin metablica.
2. Plantas con resistencia a virus mediada por plantibodies
3. Reduccin del uso de pesticidas: resistencia a pestes e insectos
4. Modulacin de antgenos (DH4R)
5. Estudio del rol fisiolgico de hormonas.
6. Remocin de polutantes de suelos (Ac contra txicos
orgnicos, compuestos potencialmente carcinognicos,
herbicidas)
7. Remocin de polutantes de aguas ( inmovilizacin el Ac en
soporte slido)
8. Biofarming: produccin de molculas industriales o
farmacuticas basada en cultivos vegetales. (1% TSP:
expresin costo-efectiva). Anlisis de especie, rgano.
9. diagnstico

Downstream processing
Importante para utilizacin ex planta
Alcaloides y otras sustancias txicas encarecen y
dificultan la purificacin (tabaco)
Ausencia de virus patgenos, priones y otras
sustancias tpicas de sistemas de produccin
animales.
Posibilidad de usar un tejido vegetal comestible
para inmunidad a nivel de mucosas
(purificacin)
Cul es el desafo?

Desarrollo de drogas para el tratamiento de ciertas
enfermedades; las protenas son la clase en ms franco
desarrollo para la prevencin y tratamiento de
enfermedades.
Desarrollo de resistencia contra patgenos
(microorganismos y patgenos ms complejos como
nematodes)
Anlisis y manipulacin de rutas biosintticas.
Seguridad y Eficiencia
tica