UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

2012
Dra.IsmeniaGamboaOr
Especialista en Citogentica Clnica

DEFINICIN
PARTES DEL CROMOSOMA
OBTENCIN DE CROMOSOMAS
SSTEMAS DE BANDAS - IMPORTANCIA
NOMENCLATURA E INTERPRETACIN DE
CARIOTIPOS
Contenido
ADN - CROMOSOMA
REGIN CORTA DE ADN
PAQUETE DE NUCLEOSOMA
PAQUETE DE SOLENOIDES
PARTES DE UNA SECCIN CROMATINA
CONDENSACION DEL CROMOSOMA
METAFSICO
CROMOSOMA METAFSI CO
NUCLEOSOMA
100 A
SOLENOIDE
Unin de los dominios al armazn a travs de las regiones SAR
CROMOSOMAS HUMANOS
NMERO DE CROMOSOMAS:
CLULA SOMTICA = 2n = 46 cromosomas = Diploide
GAMETOS = n = 23 cromosomas = Haploide
22 pares AUTOSMICOS
01 par SEXUAL (X,Y)
CLASIFICACIN: (Convencin Denver 1960)
TAMAO: ORDEN DECRECIENTE
POSICIN DEL CENTROMERO
GRUPOS: AUTOSMICOS: A ,B, C, D, E, F, G,
SEXUALES: X e Y
ESPECIE Nmero de cromosomas
Hormiga
Myrmecia pilosula
1
Mosca de fruta
Drosophila melanogaster
8
Chimpance
Pan troglodytes
48
Gallina
Gallus gallus
78
Mariposa 380
Helecho
Ophioglussum reticulatum
1260
Protozoario
Aulacantha scolymantha
1600
NMERO DE CROMOSOMAS
EN DIFERENTES ESPECIES
SUBMETACNTRICO
ACROCNTRICO METACNTRICO
1. POSICIN DEL CENTRMERO
2. MORFOLOGA Y PARTES DE LOS CROMOSOMAS
p
q
Centromero
Telmero
Secuencias repetidas en tandem (TTAGGG)
ACROCNTRICO
q
Satlite
Talo
p
p
q
TELOMEROS
Estructuras especializadas que forma los extremos de los
cromosomas eucariontes. Le dan ESTABILIDAD

Los ADN telomricos son regiones no codificantes.

Estn repetidos (TTAGGG)n en tandem RICAS EN GUANINA:
10 Kb en clulas somticas
20 Kb en clulas de placenta

La longitud de las repeticiones est relacionada con el
envejecimiento y dao celular.
TELOMEROS
Un Telmero normal, no solo
es estable, sino que Ancla
ese extremo al armazn nuclear.

>Los extremos salientes de las
hebras G son importantes para
la proteccin de los telmeros
mediante la formacin de un
bucle de DNA de cadena
doble (dplex).

FUNCIONES:

1. Evitar la fusin y degradacin cromosmica.

2. Mantienen la estabilidad cromosmica.

3. Intervienen en el apareamiento de los cromosomas
homlogos y el entrecruzamiento durante la profase
en la Meiosis I.

4. Sirven como un reloj mittico.
TELOMEROS
CLASIFICACIN
CROMOSOMAS
HUMANOS
PREPARACIN Y OBTENCIN DE
CROMOSOMAS METAFSICOS
MUESTRA:
Sangre Perifrica:
(Cultivo de linfocitos)
Mdula Osea
Piel
Lquido Amnitico
Vellosidades Coriales
Sangre de Cordn Umbilical
Tumores Slidos
Jeringa heparinizada
PREPARACIN Y OBTENCIN DE
CROMOSOMAS METAFSICOS
MEDIOS DE CULTIVO:
Mc Coys
TC 199
F 12 / F 10
RPMI 1640
ADICIONAR:
Suero de Bovino Fetal
Fitohemaglutinina
Antibitico
S
I
E
M
B
R
A
OBTENCIN DE CROMOSOMAS METAFSICOS
SOLUCIN
HIPOTNICA (KCl)
COLCHICINA
CENTRIFUGACIN
COSECHA:
PREPARACIN Y OBTENCIN DE
CROMOSOMAS METAFSICOS
Lminas porta objetos heladas
Fijador: CARNOY
PREPARACIN Y OBTENCIN DE CROMOSOMAS METAFSICOS
COLORACIN:
CONVENCIONAL: GIEMSA
BANDEO:
Bandas G Bandas Q
Bandas C Bandas R
Bandas NOR
Bandas G-11
ICH
FISH
ALTA RESOLUCIN
PREPARACIN Y OBTENCIN DE CROMOSOMAS METAFSICOS
MICROFOTOGRAFIA
Armar Cariogramas
REGIONES, BANDAS Y SUB-BANDAS
BANDAS G
Summer, 1971
UTILIZA:
TRIPSINA (desnaturaliza las protenas)
Las bandas G (+) corresponden a CROMATNA LIBRE
para unirse al colorante.
Las bandas G (-) son DNA cubierto o no disponible
y en parte extrado.
COLORANTE:
* GIEMSA derivado TIAZINAS, son molculas
planas con carga (+) que, interactan con GRUPOS
FOSFATOS ADN por fuerzas inicas
BANDEO GTG
BANDAS GTG
Bandas G- (claras) Bandas G+ (oscuras)
DNA rico en GC DNA rico en AT
Replicacin temprana
GENES ESTRUCTURALES
Replicacin tarda
GENES DE TEJ. ESPECIFICO

Muchos genes Pocos genes
CARACTERSTICAS DE LAS BANDAS G
(ej. gen de la -globina),

1
7 6
13 14 15 16 17 18
19 20 22 21
2 3 4 5
8 9 10 11 12
A B
C
D
E
F
G
X Y
CARIOGRAMA: BANDEO GTG
BANDAS C
PARDUE Y GALL, 1970
HETEROCROMATINA EN REGIN CENTRMERICA
(Extraccin del ADN no pericentromrica)
20% genoma humano
Se trata con : hidrxido de bariode Bario a 65C
OBSERVA: HETEROCROMATINA CONSTITUTIVA de
distribucin pericntrica en todos los cromosomas excepto el
cromosoma Y (regin distal del brazo largo).
Tie: Constricciones secundarias cromosomas: 1, 9, 16, y el brazo
largo del cromosoma Y.
BANDEO CBG
Y
CARIOGRAMA
BANDEO CBG
Y
DUTRILLAUX y LEJUENE 1971
Llamadas Bandas REVERSAS G, y Q.
Temperatura altas y colorante Giemsa.
Detecta: ADN rico en G-C (bandas oscuras).
Denatura el ADN rico en A-T
Utilidad: Muestra re-arreglos terminales (deleciones,
traslocaciones, etc) y polimorfismos de los cromosomas.

BANDEO RHG
BANDAS R
BANDAS Q
CASPERSSON 1971
Colorante: Mostaza de quinacrina
dihidroclorato de quinacrina
Visualiza: Microscopio de fluorescencia
Fluorece: Presencia de ADN rico en A-T (Ellison y Barr 1972)
Las bases G-C rompen la fluorescencia (Comings 1975-1978)
Las protenas NO HISTONAS limitan el acceso a la zona G-C
(Pachmann y Riegler, 1972)

BANDEO Q
BANDAS NOR

Ferguson-Smith, 1961.
FUNDAMENTO:
Emplea plata amoniacal o nitrato de plata para teir regiones de
los organizadores nucleolares, que contienen ARNr
localizados. Para ver polimorfismo de los satlites.
Las regiones NOR se ubican e el tallo del satlite de los
cromosomas acrocntricos, correspondiendo a protenas NO
HISTONAS que aparecen con la sntesis del ARNr.
RESULTADOS: Las constriciones secundarias de los
cromosomas acrocntricos con satlite se tien en los tallos con
plata amoniacal.
Modificacin de la banda G con pH elevado para
demostrar variantes normales comunes (polimorfismos).

Se tien:
Las constricciones secundarias del cromosoma 9,
El segmento distal largo del cromosoma Y,
El rea pericntrica del cromosoma 20.
BANDAS G-11
DETERMINACIN DEL N DE BANDAS
CROMOSMICAS
Utiliza Bromo-deoxiuridina que sustituye a la timidina
Mediante autoradiografa
Se observa el intercambio entre los segmentos de las
cromtides hermanas.
Normalmente se visualiza de 6-9 intercambios por
metafase, y
Aumentan cuando se exponen a mutgenos o en algunas
enfermedades donde se observan los GAPS sitios
frgiles como brechas que no se tien bien.
ICH (INTERCAMBIO DE CROMATIDES HERMANAS
TCNICA DE BANDEO EN ALTA RESOLUCIN
CROMOSOMAS:
* PROMETAFASE
* RESOLUCIN DE 850 BANDAS ( 850 bandas)

DETECTA ALTERACIONES ESTRUCTURALES
SUBMICROSCPICAS:
* MICRODELECIONES
* MICROINVERSIONES, y
* REORDENAMIENTOS CROMOSMICOS
Emplean sondas (PROBES) especficas para la coloracin
de determinados cromosomas, y diagnostican anomalas
cromosmicas.

FUNDAMENTO: A partir del ADNc o ADN genmico.
La sonda se marca y se aade por hibridacin, y la seal se
identifica por autoradiografa o fluorescencia. Se observan
grnulos en la zona que hubo hibridacin
FISH (HIBRIDACION IN SITU POR FLORESCENCIA
FISH HIBRIDACIN IN SITU POR FLUORESCENCIA
COMBINA: CITOGENTICA CLSICA CON LA GENTICA MOLECULAR.
Utiliza molculas fluorescentes para localizar genes o fragmentos de DNA, mapea genes o
localizar anormalidades cromosmicas.
IDENTIFICA: REGIONES COMPLEMENTARIAS DE LOS CROMOSOMAS.
UTILIZA: SONDAS (secuencias de ADN conocidas) MARCADAS CON
FLUOROCROMOS QUE HIBRIDAN CON EL ADN PROBLEMA.
VISUALIZA: CROMOSOMAS METAFASE, PROFASE, e INTERFASE,
CLULAS COMPLETAS, TEJIDOS.
ANALIZA RAPIDAMENTE:
* GENES O REGIONES ESPECIFICAS DEL ADN
* CROMOSOMAS INVOLUCRADOS EN DIVERSAS ENFERMED
PERMITE REALIZAR ESTUDIOS CITOGENTICOS EN FORMA
RETROSPECTIVA EN EMBRIONES O FETOS QUE HAN SIDO FIJADOS Y
QUE MUESTRAN ALTERACIONES EN EL FENOTIPO
FISH

SONDAS ESPECIFICAS DE UN LOCUS:
Hibridan una regin particular del gen.
Identifica microdeleciones
SPW y SA del(15)(q11q13) S. Wolf-Hirschhom del (4)(p16.3)
Retinoblastoma del (13q) S. Cri Du Chat del(5)((p15.3)
En ncleos interfsicos (muestras de clulas fijadas)
Identifican regiones pericentromricas.
Detecta regiones crticas que resultan de una translocacin. Ej.
Leucemia Mieloide Crnica t(9;22)
Leucemia aguda promieloctica t(15;17)

FISH TIPOS DE SONDAS
Sonda: marca los dos cromosomas 22 y un
cromosoma marcador derivativo del 22
SONDA ESPECIFICA
DE UNL0CUS
mar
FISH TIPOS DE SONDAS
SONDAS ALFOIDES O
CENTROMERICAS:
Contienen secuencias complementarias de
las secuencias repetidas que se encuentran
en los centrmeros de los cromosomas.

Utilizan sondas de diferentes colores, para
cada cromosoma

Detecta anomalas numricas y
estructurales en cromosomas
Metafsicos o en Interfase.

SONDAS PARA CROMOSOMAS
COMPLETOS:

Cada SONDA se hibrida a una
secuencia diferente a lo largo de todo
un cromosoma generando un
cariotipo espectral.

Se consiguen imgenes de un color
diferente para cada cromosoma.
Detecta anomalas numricas y
estructurales



FISH TIPOS DE SONDAS
Mujer con cariotipo y FISH normal, se uso sonda
para el locus D22S75 (S. de Di George)

SONDA UNIL0CUS
Seal verde: control
interno marca el
cromosoma 22 en
22q13
Seal Roja: marca la
regin DiGeorge, en
22q11.2.
Cariotipo normal
46,XX.ish 22(q11.2)(D22S75X2)
NIVELES DE RESOLUCIN EN BANDAS
350 bandas. Mdula Osea

450-550 bandas. Lquido Amnitico

550-750 bandas. Sangre Perifrica
750-850 bandas ALTA RESOLUCION
(cromosomas en prometafase)
ANLISIS CROMOSMICO
Conteo de cromosomas: 20 30 clulas en metafase.
Sospecha de mosaicismo: Contar por cada metafase
alterada 5 metafases ms.
El patrn de bandas de cada cromosoma es especfico,
se compara con el IDEOGRAMA.

CARIOGRAMA: ordenamiento de los cromosomas por
pares del 1 al 23
> Las diferencias interindividuales en el contenido de ADN de
los cromosomas se han precisado mediante la CITOMETRIA
DE FLUJO O MICRODENSITOMETRIA.

Existen cuatro grupos principales:
1. TAMAO DEL BRAZO q DEL CROMOSOMA Y:
FRECUENCIA: 10% de los hombres tienen el
cromosoma Y mas largo y mas corto que lo usual.
COLORACION: BANDAS Q Y BANCAS C.
HETEROMORFISMOS CROMOSMICOS
HETEROMORFISMOS CROMOSOMICOS
2. TAMAO DE LA HETEROCROMATINA
CONSTITUTIVA:
Variaciones en los cromosomas 1, 9, 16.
Tincin: BANDAS C.
3. POLIMORFISMOS DE LOS SATLITES:
Variaciones en los cromosomas 13, 14, 15, 21, 22.
Tincin: BANDAS Q Y NOR.
4. SITIOS FRGILES:
Rasgos estructurales de los cromosomas que se hacen visibles
en ciertas condiciones en el cultivo de tejidos.
Se heredan en forma codominante, por lo menos existen 20
sitios frgiles comunes y 18 sitios raros.
SSTEMA INTERNACIONAL DE
NOMENCLATURA CITOGENTICA (ISCN) 2009
RESULTADO DE CONFERENCIAS INTERNACIONALES:
DENVER 1960 1 REUNIN
LONDRES 1963 CLASIFICACIN CROMOSOMAS GRUPOS A-G
CHICAGO 1966 SSTEMA ESTANDAR DE NOMENCLATURA
PARIS 1971 DESCRIPCIN DE BANDAS Y REGIONES
ISCN 1978 DOCUMENTO
ISCN 1981 BANDEO DE ALTA RESOLUCIN
ISCN 1985 DOCUMENTO
ISCN 1991 NOMENCLATURA CITOGENTICA DEL CANCER
ISCN 1995 NOMENCLATURA FISH
ISCN 2005 NOMENCLATURA CROMOSOMAS EN MEIOSIS

ISCN 2009 Nomenclatura del MLPA(Amplificacin de sondas mltiples)
SMBOLOS Y ABREVIATURAS
ace fragmento acntrico Upd disomia uniparental
c anomala constitucional rea rearreglo
cen centrmero g gap
chr cromosoma h heterocromatina
del delecin fra fragilidad
der cromosoma derivativo i isocromosoma
dic dicntrico inc cariotipo incompleto
dmin doble minut ins insercin
s satlite inv inversin
stk talo satelital mar marcador
t traslocacin tan tandem
pat origen paternal mat origen materna
p brazo corto del cromosoma q brazo largo del cromosoma
de novo cromosoma anormal el cual no ha sido heredado
add material adicional de origen desconocido
International System for Human Cytogenetics ISCN (2009)
:
> En cromosomas normales : Varn normal : 46,XY
Mujer normal : 46,XX
> Anomalas numricas : S. de Down : 47,XY,+21
S. de Klinefelter : 47,XXY
S. Turner : 45,X
> Anomalas estructurales : S. Cri-duchat : 46,XY,del(5)(p15)
S. de Down : 46,XX, der ( 14;21) (q10;q10),+21
Anomala en cromosoma sexual X : 46,X, r (X) (p13 q26)
S. Prader Willy: 46,XY, del(15)(q11q13)
MOSAICOS
CONSTITUCIONAL: dotacin cromosmica al nacer
45,X 10 / 46,X X 20
45,X 15 / 47, XXX 10 / 46, XX 23
La lnea celular normal se indica al final, independientemente del
tamao.
En las lneas celulares anormales, el clon mayor se indica en primer lugar.
ADQUIRIDAS: aparece en enf. Hematolgicas,tumores,etc
46,XX,t(8;21)(q22;q22) 12 / 45,X,-X,t(8;21)(q22;q22) 19 / 46,X,-X,+8t(8;21)(q22;q22) 5
La lnea celular normal, se indica al final, independiente de su tamao
Los clones anormales, se indican en orden creciente de complejidad,
independientes a sus tamaos.
GRACIAS