SVILUPPO EMBRIONALE DI GALLERIA MELLONELLA (L.

M. T. Abidalla **, E. Cosi*, D. Battaglia**, C. Benvenuti* and P. F. Roversi*

Obiettivi Materiale e Metodi

Introduzione:
Solo alcuni documenti descrivono i primi stadi dello sviluppo
embrionale nel Pyraloidea. Una carta studi Plodia interpunctella
La tarma grande della cera è un diffuso parassita degli alveari, utilizzato come insetto Le uova sono stati ottenuti da femmine di G. mellonella abitualmente allevati in una
(Lepidoptera: Pyralidae), e altri per descrivere lo sviluppo embrionale di
modello per studi di patogenesi, di immunologia, di endocrinologia e di fisiologia. stanza con temperatura di 26  2 ° C e umidità relativa del 70  10%. Per
tre specie Crambidae, Chilo suppressalis o asiatici Riso Borer (Okada,
Inoltre, è utilizzata come ospite sostitutivo per gli organismi entomopatogeni ed l'osservazione di tutto il monte embrioni da invertita microscopia, le uova, a quello
1960), Ancylolomia o riso japonica Webworm, e la canna da zucchero
entomofagi grazie alla sua facilità di allevamento. Il nostro gruppo di ricerca ha desiderato stadio di sviluppo, sono stati dechorionated con il 2,5% NaOCl per 3 min.,
o Diatraea Saccaralis Borer (Alda Dossi et al., 2006).
utilizzato la Galleria mellonella come modello per estendere ai Lepidotteri la tecnica Fissato in Carnoy della soluzione, disidratati stepwise in alcole etilico serie, alla rinfusa -
di crioconservazione messa a punto per le uova di Ditteri (Mazur et al., 1992; Roversi colorato con Toluidina blu, e coperti con il Canada balsamo olio prima di aggiungere il
La mancanza di conoscenze riguardo l’embriologici maggiore cera G.
et al., 2008). coperchio scorrevole.
mellonella moth (Lepidoptera: Pyralidae), ha aderito con l'obiettivo di
descrivere all'interno di marcatori morfologici gli embrioni per migliorare
Gli studi di embriologia rappresentano il primo passaggio della tecnica di In alternativa, le uova dechorionated è stato coperto da Hoyer della soluzione e pressato
la crioconservazione di questo insetto, è la principale ragione per
crioconservazione degli insetti, poiché consentono di individuare i principali marcatori da coprire prima diapositiva esamina sotto microscopio invertito. Per osservare i dettagli
studiare la
morfologici tipici dei differenti stadi di sviluppo embrionale (Rajamohan e Leopold, delle varie zone di ooplasms dopo la deposizione, le uova sono state dechorionated con
2007). MP CI permeabilized eptan per 30 sec. e colorate con Rhadomin B. 0,1% per 5 min
FP

1
Risultati:
Descrizione delle fasi di sviluppo embrionale,
sono i seguenti: 2

Fase 1: (0 – 4.5h) Maturazione divisione, la

100
fecondazione e Cleavage
µ m
Fase 2: (5 – 11h) Formazione Blastoderm

Fase 3: (12 – 22.5 h) Germ Disk

e sierose Formazione,
Anatrepsis 1 Dopo la schiusa delle uova

3 2
Fase 4: (22 – 31h) Immersion di
Germi disco nel tuorlo e • Conclusione
Formazione di Embryo
• La superfamiglia Pyraloidea è un
Fase 5: (32 – 40h) 1 importante specie tra Lepidopteran
completamento della banda 1 falene e come parte del nostro
Germ Segmentazione e aspetto continuo embriologici studio di
di rudimentali Appendici nel questa specie abbiamo scelto di
4
protocephalon, Gnathal toracica iniziare con la Galleria mellonella. Il
e segmenti processo di sviluppo di una
maggiore cera moth G. mellonella
Fase 6: (41-60 h.) Aspetto di è simile alla maggior parte di tipo
Appendici nel protocephalon,
1 generale di sviluppo di Lepidotteri,
toracica e Gnathal segmenti & 0 con alcune caratteristiche che sono
Formazione di Neural Groove. stati pensati per essere
caratteristica di G. mellonella
Fase 7: (60-70 h.)
Completamento dei rudimentali • Questo risultato dimostra che ogni
toracica Appendici e aspetto di fase è stata la formazione di diversi
minuti Pleuropodia, katatrepsis organi e membrana e questo può
9 dare stati diversi effetti sulla
5
permeabilità all'interno di queste
Fase 8: (71-80 h.) Pre - uova dopo crioconservazione
Rivoluzione. Morfogenetici trattamenti, come il primo obiettivo
movimento del cephalo-gnathal di questo studio, pertanto, sostiene
regione 8 che questo risultato può scegliere
la fase 4 ( h. 22-31), è più tollerare
Fase 9:(81-100 h.) l'embrione nel corso di immersione sono
della Rivoluzione 7 germi disco in tuorlo e la
6 formazione di embrioni o di germe
Fase 10: (101-115 h.) di banda.
Andamento dei dorsali Chiusura

Fase 11: (116-120 h.)

Completamento del dorsale
chiusura

Fase 12: (121-144 h.) Completo

- cresciuto embrione appena
prima schiusa : Abbreviazioni

Mp: Male pronucleus ng: neural groove

Riferimenti:
Alda Dossi FC, Conte H and Zacaro AA. 2006. Histochemical characterization of the embryonic stages in Diatraea saccharalis (Lipedoptera:
Fp: Female pronucleus tl: telson
Crambidae). Ann. Entomolo. Sci. Am. 99 (6): 1206-1212. CI: Cytoplasmic island at: antenna
Pce: protocephalon Oes: Oesophagus
•Okada, M. 1960. Embryonic development of th rice stem borer, Chilo suppressalis. Sci. Rep. Tokyo Kyoiku Daigaku, Sec. B. 9: 243-296. Pco: protocorm Ir: labial
Ibs: labial segment th1: first prothoracic ganglion
•Rajamohan A. and Leopold R. A. 2007. Cryopresrvation of Mexican fruit flies by vitrification: Stage selection and avoidance of thermal stress.
Cryobiology 54: 44-54.
Mxs: maxillary segment pp: pleuropodium
Mds: mandibular segment ab10: tenth abdominal segment
•Roversi P. F., Cosi E. and Irdani T. 2008. Chill sensitivity and cryopreservation of eggs of the greater wax moth Galleria mellonella (Lepidoptera: Ea: embryonic area Eea: Extra-embryonic area
Pyralidae).Cryobiology 56: 1-7.

. CRA – Centro di Ricerca per l'Agrobiologia e la Pedologia, Firenze*

Dipartimento di Biologia e Biotecnologie, Univeristà della Basilicata, Potenza**
 SVILUPPO EMBRIONALE DI GALLERIA MELLONELLA (L.)

M. T. Abidalla **, E. Cosi*, D. Battaglia**, C. Benvenuti* and P. F. Roversi*

Objectives Material and Methods

Introduzction:
The greater wax moth is one of the more common harmful pyralids as a parasite of
bee hives and model system to study pathogenesis (Mylonakis et al., 2005).
Additionally, this insect is an important as an experimental model include its preferred
in entomological studies because of its simple nutritional needs, ecological
adaptation and developmental characteristics (Roversi et al., 2008).
The morphological basis is an important for many research direction like
endocrionological and other physiological studies (Dorn et al., 1987) as well as a
major role in that direction is played by staging of embryos using characteristic
markers is very critical step to select of the most appropriate development stage for
improvement of a ceryopreservation technology of insect embryos (Havelka et al.,
2007; Rajamohan and Leopold, 2007; Mazur et al., 1992).
Only a few papers describe the early embryonic development in the
The eggs were obtained from the females of G. mellonella routinely reared in a room with
Pyraloidea. One paper studies Plodia interpunctella (Lepidoptera:
temperature 26 ± 2°C and relative humidity of 70 ± 10%.
Pyralidae) (Müller, 1938), and others describe the embryonic
development of three Crambidae species, Chilo suppressalis or Asiatic
For observation of whole mount embryos by inverted microscopy, the eggs, at the desired
Rice Borer (Okada, 1960), Ancylolomia japonica or Rice Webworm
stage of development, were dechorionated with 2.5% NaOCl for 3 min., fixed in Carnoy’s
(Tanaka, 1970a, 1970b, 1971, 1972), and Diatraea Saccaralis
solution, dehydrated stepwise in ethyl alcohol series, bulk – stained with Toluidine blue,
or Sugarcane Borer (Alda Dossi et al., 2006).
and covered with Canada balsam oil before to add the cover slide.
The lack of embryological knowledge about the greater wax moth G.
mellonella (Lepidoptera: Pyralidae), joined with the aim to describe
Alternatively, the dechorionated eggs was covered by Hoyer's solution and pressed by
morphological markers inside the embryos to improve the
cover slide before examines under inverted microscopy. To observe details of different
cryopreservation of this insect, is the main reason for studying its
zones of ooplasms after deposition, the dechorionated eggs were permeabilized with
embryogenesis.
heptan for 30 sec. and stained with 0.1% Rhadomin B. for 5 min
MP FP CI

1
Results:

Description of embryonic developmental stages are: 2

Stage1: Maturation Division, Fertilization and
Cleavage (0 – 4.5h) 100
µ m
Stage 2: Blastoderm Formation (5 – 11h)

Stage 3: Germ Disk and Serosa

Formation, Anatrepsis (12 – 22.5
h) 1 Dopo la schiusa delle uova

3 2
Stage 4: Immersion of Germ Disk
into the Yolk and Formation of Conclusion
Embryo (22 – 31h)
The Pyraloidea superfamily is an
Stage 5: Completion of Germ Band 1 important species among
Segmentation & Appearance of 1 Lepidopteran moths and as a part
Rudimentary Appendages in the of our ongoing embryological study
protocephalon, Gnathal & of this species we chosen to start
4
Thoracic segments (32 – 40h) with Galleria mellonella. The
process of development of greater
Stage 6: Appearance of wax moth G. mellonella is similar
Appendages in the the most parts of general type of
protocephalon, Gnathal &
1 development of Lepidoptera, with
Thoracic segments & Formation 0 some features which are thought to
of Neural Groove (41-60 h.) be characteristic of G. mellonella

Stage 7: Completion of This result shows that each stage

Rudimentary Thoracic
Appendages & Appearance of
minute Pleuropodia, katatrepsis
(60-70 h.)
Stage 8: Pre - Revolution.
Morphogenetic movement of the
cephalo-gnathal region (71-80 h.)
Stage 9: Revolution of the embryo
(81-100 h.)
Stage 10: Progress of
Closure. (101-115 h.)
have been different formation of
membrane and organs and this
may been give different effect on
9 permeability inside these eggs
5
after cryopreservation treatments,
as the first aim of this study,
therefore; this result supports that
may chose the stage 4 (22-31 h.),is
8 more tolerate during have
immersion of germ disk into the
yolk & formation of embryos or
7 germ band.
Dorsal 6

Stage 11: Completion of dorsal

closure . (116-120 h.)

Stage 12: Full – grown embryo just

before hatching. (121-144 h.)

:Abbreviations
References:
Mp: Male pronucleus ng: neural groove
Alda Dossi FC, Conte H and Zacaro AA. 2006. Histochemical characterization of the embryonic stages in Diatraea saccharalis (Lipedoptera: Fp: Female pronucleus tl: telson
Crambidae). Ann. Entomolo. Sci. Am. 99 (6): 1206-1212. CI: Cytoplasmic island at: antenna
Pce: protocephalon Oes: Oesophagus
•Okada, M. 1960. Embryonic development of th rice stem borer, Chilo suppressalis. Sci. Rep. Tokyo Kyoiku Daigaku, Sec. B. 9: 243-296. Pco: protocorm Ir: labial
•Rajamohan A. and Leopold R. A. 2007. Cryopresrvation of Mexican fruit flies by vitrification: Stage selection and avoidance of thermal stress.
Ibs: labial segment th1: first prothoracic ganglion
Cryobiology 54: 44-54. Mxs: maxillary segment pp: pleuropodium
Mds: mandibular segment ab10: tenth abdominal segment
•Roversi P. F., Cosi E. and Irdani T. 2008. Chill sensitivity and cryopreservation of eggs of the greater wax moth Galleria mellonella Ea: embryonic area Eea: Extra-embryonic area
(Lepidoptera: Pyralidae).Cryobiology 56: 1-7.

. CRA – Centro di Ricerca per l'Agrobiologia e la Pedologia, Firenze*

Dipartimento di Biologia e Biotecnologie, Univeristà della Basilicata, Potenza**