EL ADN Y LA INGENIERA GENTICA

ADN recombinante Molcula de

unin artificial de dos fragmentos de
ADN.

Tecnologa de ADN Recombinante
Tcnicas que permiten aislar un gen de
un organismo para su manipulacin y
insercin en otro diferente.

Resultado Un organismo, animal,
vegetal, bacteria, hongo o virus,
producir una protena que le sea
totalmente extraa.
Tecnologa del ADN recombinante
Cmo cortar y pegar el ADN?
Enzimas de restriccin
Las enzimas de restriccin son producidas por bacterias como mtodo de
defensa contra virus y degradan el ADN extrao.
A su vez, el propio genoma bacteriano est protegido contra sus enzimas
de restriccin mediante metilaciones (es decir, el agregado de un grupo
metilo [-CH3)]) en un tomo especfico de ciertos nucletidos.



Estas molculas son indispensables
para la ingeniera gentica, ya que
producen fragmentos que se pueden
unir entre s fcilmente (con la ayuda
de un pegamento molecular: la
enzima ligasa).
Las enzimas de restriccin cortan
dejando extremos cohesivos o romos.

Cmo introducir ADN
recombinante en las bacterias?
Los plsmidos contienen genes de resistencia a antibiticos
(permite su identificacin) y son capaces de autoreplicarse, ya
que contienen su propia secuencia de iniciacin.

Podemos crear una molcula de ADN recombinante usando un
plsmido:

Es una manera relativamente eficaz de obtener millones de
copias del ADN incorporado. Dado que todas las copias del gen
provienen de una sola molcula multiplicada a partir de una nica
bacteria que dio origen a la colonia, esta tcnica lleva el nombre
de clonacin.

Clon grupo de clulas u organismos genticamente idnticas.

Vector cualquier organismo o virus capaz de mover genes de
un organismo a otro

Plsmidos. Son molculas de ADN circular,
con un tamao menor que el del cromosoma.
Se replican con independencia del cromosoma
bacteriano ya que tienen su propio origen de
replicacin.

En esta secuencia de dibujos se puede ver
como se realiza la insercin de un gen en un
plsmido.
En la 1 figura tenemos un gen (color rojo)
que interesa insertar en un plsmido (color
turquesa)

En la 2 figura, vemos como una enzima de
restriccin ha cortado el gen y el plsmido,
quedando unos bordes pegajosos.

La unin del ADN que contiene el gen que se
desea clonar con el vector de clonacin, se
realiza por medio de otras enzimas,
denominadas ADN-ligasas, que unen ambos
trozos de ADN. El resultado es una molcula
de ADN recombinante, ya que contiene
fragmentos de ADN de distinta procedencia.
Cmo amplificar el ADN?
Reaccin en cadena de la polimerasa
El proceso comienza con la separacin de las cadenas de ADN para que
cada una sirva de molde para fabricar una nueva. Se unen unos pequeos
fragmentos de ADN (cebadores) a partir de los cuales se sintetiza la
nueva cadena.



La reaccin en cadena de
la polimerasa permite
amplificar la muestra de
manera espectacular y su
sensibilidad es tal que
alcanza con una molcula
para que la reaccin genere
una infinidad de copias.
Se utiliza cuando queremos obtener grandes cantidades de un
determinado gen y la muestra de ADN es muy escasa.
Cmo encontrar el gen adecuado?
Imanes biolgicos: sondas y anticuerpos
Las sondas son fragmentos de ADN o ARN de simple cadena
complementarias a la regin de ADN o ARN que queremos
encontrar. Contienen alguna marca que permite revelar su unin
(hibridacin) a la secuencia elegida y de esa manera revela
presencia de la regin buscada.

Cmo se marcan?

-Las sondas pueden ser coloreadas durante su sntesis
utilizando nucletidos marcados con istopos radiactivos.

-Mediante la unin con una molcula que pueda ser detectada
posteriormente como fluorescente, un marcador qumico que
puede ser detectado por un anticuerpo, o una enzima cuya
actividad produce el cambio de color de su sustrato.

Una de las tcnicas ms empleadas para localizar fragmentos
determinados del genoma es la hibridacin in situ.
VIDEO ADN RECOMBINANTE
http://www.youtube.com/watch?v=_Q0ScibrEns
El 14 de abril de 2003 se anunci que el Proyecto Genoma
Humano haba concluido y la secuencia del genoma humano
haba sido descifrada completamente.
GENMICA Y PROTEMICA
El objeto de estudio de la genmica es el conocimiento del genoma completo y de
las interacciones que tienen los genes que lo componen.

El futuro de la genmica: protemica.

El trmino proteoma se utiliza para designar el conjunto de protenas de un
genoma, una clula o un tejido.
La protemica es la disciplina que estudia el conjunto completo de protenas
codificadas por el genoma de un organismo.

La protemica tiene gran cantidad de aplicaciones en ciencias como la medicina,
farmacologa o veterinaria, ya que las protenas, y no los genes, son las que
desempean las actividades en las clulas.
VIDEO PROYECTO GENOMA
http://www.youtube.com/watch?v=IoVBO21ZBBg