Cuantificacin de protenas por el

mtodo de Bradford
Universidad Autnoma Metropolitana, Unidad Iztapalapa,
Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud,
Licenciatura en Biologa Experimental.

Jany Mariela Corona Leo
Protenas
Son macromolculas formadas por residuos de
aminocidos.
Pueden tener distintas funciones:
Defensa
Trasporte
Reserva
Enzimas
Movimiento
Estructurales
Regulacin



Es importante contar con una tcnica que
permita determinar la cantidad presente en
una muestra biolgica (orina, sangre, plasma,
extracto vegetales, semillas, clulas, tejidos,
etc.).

Purificacin de protenas.
Actividad Enzimtica.
Diagnostico de enfermedades






Mtodos
Mtodos de Absorcin:
Propiedad intrnseca de las protenas para
absorber luz en el UV.

Mtodos Derivados Fluorimtricos:
Formacin de derivados qumicos.

Mtodos Colorimtricos
La capacidad que tienen las protenas de
unir ciertos colorantes.

Mtodos Colorimtricos
Mtodo de Bradford

Fue diseado por Bradford en 1976.

Barato, solo se utiliza un reactivo el colorante
Comassie Blue G-250.

Sensible (1-100 g).

Rpido, la reaccin finaliza a los 5 min. y es
estable hasta una 1 hr.

Sencillo

La Absorbancia se lee a 595 nm
Mtodo
Realizar una curva estndar con
BSA (0.5 mg/ml).
Se colocan el reactivo de Coomassie
y se deja incubar por 5 min.
Se lee la absorbancia a 595 nm en
el espectrofotmetro y se grafican
los datos obtenidos.
y = 5.2361x + 0.0102
R
2
= 0.998
-0.1
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12
Albmina (mg)
A
b
s

(
5
9
5

n
m
)
Abs promedio )Lineal (Abs promedio
y = Abs 595
m = pendiente
x= la concentracin de
protenas
b = ordenada al origen
Anlisis de la muestra problema

Se preparan diluciones con la
solucin de NaCl 0.15 M:
1:10,1:20,1:50
Se mide la absorbancia 595 nm , y
los datos se interpolan en la
ecuacin de la recta y=mx +b
Se toman 200 ul de cada una de las
diluciones y se les agrega 2 ml de
reactivo de coomassie.
Bradford MM (1976): A rapid and sensitive
method for the quantitation of microgram
quantities of protein utilizing the principle
of protein-dye binding. Anal Biochem. 72:
248-254.