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BIOTECNOLOGA;

CONCEPTO E HISTORIA
Aplicacin de los sistemas biolgicos en la solucin
de problemas relacionados con la mejora de la
calidad de vida del hombre.


En ste contexto podemos apreciar que el hombre
ha desarrollado Biotecnologa desde hace miles de
aos.

-
La biotecnologa podra definirse
como "toda aplicacin tecnolgica
que utilice sistemas biolgicos y
organismos vivos o sus derivados
para la creacin o modificacin de
productos o procesos para usos
especficos".


En la actualidad la biotecnologa se ha visto
revolucionada por la introduccin de la Ingeniera
Gentica o tambin llamada tecnologa del ADN
recombinante.

Para situar a la biotecnologa tradicional en su
nueva era, se ha incorporado el concepto de
Biotecnologa Molecular.

BIOTECNOLOGA MOLECULAR
La nueva era.
50s 60s 70s
80s
90s 2000s
Primer genoma
secuenciado
Primera protena
terapeutica producida
por ingeniera gentica
El codigo gentico
Es controlado.
Era de la genmica funcional
Chips de DNA
Diagnstico molecular
Farmacologa molecular
Biomedicina

Clonacin del primer
animal
Inicio de la
ingeniera gentica
Sintesis enzimtica
del ADN por PCR
Taq
Creacin de bases
de datos
de ADN y pptidos
Produccin de
SOMATOSTATINA
en bacterias
BIOTECNOLOGA;
Ambitos de desarrollo
Alimentos
Antibiticos
Nuevos frmacos
Vacunas
Hormonas
Terapias gnicas
Mejora de procesos
Obtencin de nuevos alimentos
Desarrollo de nutraceticos
Desarrollo de aditivos
Tratamiento de residuos
Biorremediacin
Energas limpias
Farmacia
Medio ambiente
Diagnstico
Salud humana
Agricultura y ganadera
Calidad de alimentos
Calidad ambiental
Microorganismos
Bacterias levaduras
Vegetales
transgnicos
Animales
Transgnicos
Produccin
Clulas
animales
Protenas teraputicas
Anticuerpos
Molculas complejas
Protenas teraputicas
Anticuerpos
Molculas complejas
Cultivos celulares
en bioreactores
No hay necesidad
de reactores
Cultivos de
clulas mamarias
Ratones de investigacin
Vacunos, ovinos
Antibiticos
Pptidos simples
Vacunas
Molculas simples
Cultivos en bioreactores
Bacterias levaduras hongos
Resistencias naturales
a virus y qumicos
No hay necesidad
de reactores
Gentica simple
Gentica compleja Gentica compleja Gentica simple
Insulina
Hormona hGH
Vacuna Hepatitis B
Activador tisular
de plasmingeno tPA
Factor VIII
Hormona hGH
Vitamina A
Beta Caroteno
PRODUCCIN DE FRMACOS EN MICROORGANISMOS
Tecnologa de bioreactores es la de mayor uso.
Tiempos generacionales cortos
Velocidad de crecimiento
Metabolismo
Manejo gentico y molecular
Como carencias:
Problemas de regulacin gnica

Problemas en los
requerimientos metablicos
Tecnologa de
operones
Ingeniera
metablica
Actualmente en
pleno desarrollo
Bsqueda de nuevos
compuestos bioactivos:
Antibiticos
Antitumorales
Sustancia Empresa Enfermedad
factor ant ihemoflico
Miles, Baxter , Genetics
Inst itute
He mofilia A
DNasa I Genentech Fibr osis qus tica
Eritropoyet ina (EPO) Amge n, Ortho Biotech Anemia, enf. renal
Gluco cerebr osidasa Genzyme Enfer med ad de Gauch er
Hormona del crecimiento Genentech Enanis mo hipofisario
Insu lina Eli Lilly Diabe tes
Interfern alfa-2a Hoffman n-LaRoche
ciertas leuc emias, sarcoma de
Kap osi
Interfern alfa-2b Schering-Plough
ciertas leuc emias, Sarcoma de
Kap osi, hep atitis B y C
Interfern alfa-n3 Interferon Sciences He rpes ge nital
Interfern gamma -1b Genentech enf. gran ulomatosa c rnica
Interl eucina -2 Chiron Ca rcinoma clula s renal es
Somato tropina Eli Lilly
Deficiencia hormona
crecimiento
Activador tisu lar de l
plasmi nge no (tPA)
Genentech
Infar to agudo de mi ocardio,
embolismo pulmonar mas ivo
Frmacos recombinantes producidos por IG
TECNOLOGIA DEL ADN
RECOMBINANTE

ES UN TRMINO QUE AGRUPA UNA GRAN VARIEDAD DE TCNICAS
EMPLEADAS EN EL LABORATORIO PARA MANIPULAR LAS MOLCULAS DE
ADN CON EL FIN DE ESTUDIARLAS.
CONSISTE EN LA INTRODUCCIN DE GENES EXTRAOS EN EL MATERIAL
GENTICO DE OTRA CLULA.
REQUIERE DE CULTIVOS CELULARES, ENZIMAS DE RESTRICCIN,
VECTORES DE CLONACIN, LABORATORIOS EQUIPADOS Y PERSONAL BIEN
ENTRENADO.

Esta tecnologa es muy
importante para la
investigacin en biologa
celular y molecular.
Los procedimientos bsicos de la tecnologa del DNA recombinante
incluyen de manera general los siguientes pasos:
Los fragmentos de DNA se generan utilizando unas enzimas denominadas
endonucleasas de restriccin, que reconocen y cortan las molculas de
DNA por secuencias especficas.
La piedra angular de la tecnologa del DNA recombinante es un tipo de
enzimas denominadas endonucleasas de restriccin. Las enzimas de
restriccin reconocen una secuencia especfica de nucletidos (denominada
sitio de restriccin) de una molcula de DNA de doble cadena, y cortan el
DNA por esa secuencia.

Hasta la fecha, se han aislado y caracterizado casi 200 tipos de enzimas de
restriccin diferentes. Las enzimas de restriccin se denominan segn el
organismo en el que se descubrieron, utilizando un sistema alfanumrico. La
enzima EcoRI proviene de Escherichia coli; HindIII se descubri en
Hemophilus influenzae.

Hay dos tipos de enzimas de restriccin:
Las enzimas de Tipo I cortan las dos cadenas del DNA en una posicin
aleatoria a cierta distancia del sitio de restriccin. No se utilizan
normalmente en la investigacin de DNA recombinante ya que el sitio de
corte no es preciso.
Las enzimas de Tipo II reconocen una secuencia especfica y cortan las dos
cadenas de la molcula de DNA con absoluta precisin dentro de la
secuencia reconocida. Se usan ampliamente en investigacin de DNA
recombinante puesto que cortan en sitios especficos. Las secuencias
reconocidas por las enzimas de Tipo II son simtricas (palindrmicas), es
decir, la secuencia de una de las cadenas leda en direccin 5 a 3' es la
misma que la secuencia de la cadena complementaria leda tambin en
direccin 5' a 3'.
CULTIVO CELULAR
Proceso mediante el cual, clulas procariotas o eucariotas, pueden
cultivarse en condiciones controladas.

Los "cultivos celulares" hacen referencia a la siembra de clulas aisladas de
eucariotas pluricelulares, especialmente clulas animales., para cultivo de rganos y tejidos
Cultivo de clulas
humanas en medios
enriquecidos con
aminocidos, vitaminas y
factores de crecimiento
Medios de cultivo
slidos para
siembra de las
clulas
(Variedad de agares)
Procesamiento de cultivo de clulas
madre
MEDIOS DE CULTIVO
MEDIO DESCRIPCION
Medio Basal de Eagle (BME) Medio elemental con slo los aminocidos esenciales. Se
necesita siempre la suplementacin
con suero bovino fetal al 10 %. Crecimiento de fibroblastos de
ratn y clulas HeLa.
McCoy 5A Medio diseado para el crecimiento para el crecimiento de
lneas celulares diploides tanto de rata como
humanas.
Medio L-15 de Leibovitz Utilizado para el cultivo de virus.
RPMI 1640 Medio diseado para el crecimiento de linfoblastos y lneas
celulares leucmicas en suspensin. Tiene un amplio
rango de aplicaciones con suplementos adecuados.
5 PASOS DE LA TECNOLOGA DEL ADN
RECOMBINANTE
Vector de
clonacin
Seleccin del
ADN con el
gen de inters
Corte con enzima
de restriccin
Plsmido
recombinado
Cromosoma
bacteriano
Plsmido dentro
de la bacteria
cultivo de bacteria
recombinada
Corte del ADN en posiciones
precisas (secuencias palndromes)
con endonucleasas de restriccin,

Unin de fragmentos por la
ADNligasa,

Seleccin de un fragmento de ADN
capz de autoreplicarse,

Insertar los vectores de clonacin a
clulas especficas que contienen
toda la maquinaria gentica para la
expresin de la informacin contenida
en el vector

Seleccin o identificacin de las
clulas que contienen al ADN
recombinante.











Las 2 molculas de ADN
son digeridas con la misma
endonucleasa de restriccin,
La enzima corta extremos
complementarios que se
aparean,
La ligasa repara hebras
cortadas de ADN y rehace
las nuevas bicatenarias.
Manipulacin del ADN
ENZIMAS DE RESTRICCIN
Catalizan la hidrlisis de los enlaces fosfodester de los cidos nucleicos y son
capaces de cortar ambas hebras del DNA en sitios especficos
Ciertas cepas de E. coli degradan (cortan) el DNA de ciertos virus fagos
infectivos, a menos que los cidos nuclecos presenten metilacin (adicin de
grupos metilo) en algunos residuos de adenina o citosina del sitio de corte.


VECTORES DE CLONACIN
Bacterifagos: son virus
que sirven de portadores de
Material gentico a bacterias

Plsmidos son
molculas de ADN
extra cromosmico
de forma circular en
bacterias
Cosmidos son
vectores sintticos que
combinan
caractersticas del fago
lambda que posee
extremos cohesivos o
regiones cos
Son molculas que transportan y replican fragmentos de ADN que
llevan insertados.
VIRUS BACTERIFAGOS
Partculas infectantes de bacterias,

Algunos (Lambda y M13) han sido utilizados por bilogos moleculares, que
han modificado oportunamente sus genomas.

Pueden tener efecto ltico o lisognico en las bacterias.
Actividad de los virus bacterifagos
MANIPULACIN DE CLULAS
HUMANAS

UTILIDAD DE LA BIOTECNOLOGA
bacterifagos)
Utiliza
microorganismos
modificados
geneticamente, asi
como plantas y
animales
transgnicos para
elaboracin de
antibiticos,
hormonas y variedad
de sustancias de
utilidad para el
hombre.
El sistema tradicional de obtencin de
vacunas a partir de microorganismos
patgenos inactivos, puede comportar un
riesgo potencial.

Muchas vacunas, como la de la hepatitis B,
se obtienen actualmente por ingeniera
gentica.

Como la mayora de los factores antignicos
son proteinas lo que se hace es clonar el gen
de la proteina correspondiente.

EN AGRICULTURA

-En el mbito de la agricultura siempre se ha
pretendido obtener plantas cultivables, cuyos
rendimientos sean ptimos.

Desde hace muchos aos se utilizan los
conocimientos de la Gentica, aunque muchas veces
de una forma inadvertida, y en este sentido deben
entenderse los procesos de seleccin gnica
realizados provocando cruces y originando
poliploidas, para luego seleccionar aquellas plantas
de buenos resultados y multiplicarlas asexualmente,
formando clones con ellas.
Los principales caracteres conseguidos en las
plantas transgnicas, son:

a)resistencia a herbicidas, a insectos y
enfermedades microbianas.

b)incremento del rendimiento fotosinttico.

c)mejora en la calidad de los productos
agrcolas.
Las primeras plantas obtenidas mediante estas
tcnicas fueron un tipo de tomates, en los que
sus frutos tardan en madurar algunas semanas
despus de haber sido cosechados.
EN ANIMALES

-En animales, la aplicacin de las tcnicas de la Ingeniera
Gentica persiguen los objetivos siguientes:

a)favorecer la investigacin biomdica para estudiar la
fisiologa de los genes y la biologa del desarrollo.

b)mejorar la productividad o la resistencia a las
enfermedades de animales tiles para los hombres.

c)produccin de protenas de valor farmacolgico.

La correccin de errores innatos de metabolismo
mediante terapia gnica.
GRACIAS