Contar clulas

Mtodos para contar clulas

Mtodos
para contar
clulas
Electrnicos
Basados en la
microscopa
Medidores de
la resistencia
Citometra
de flujo
Anlisis de
imagen
Hemocitmetro
Incorporacin de
colorantes fluorescentes
Tincin de cultivos
en monocapa
Aproximados
Peso
Contenido de ADN
Contenido de protenas
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El hemocitmetro o cmara de Neubauer
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(rojo)
(azul)
(verde)
(amarillo)
(gris)
1 mm
Profundidad = 0,1 mm
La cuadrcula del hemocitmetro
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Se introduce la suspensin de clulas en el hemocitmetro
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La regin de recuento del hemocitmetro
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La cmara de recuento del hemocitmetro
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Recuento de clulas con el hemocitmetro
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Observacin con microscopio ptico y recuento de clulas
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Diferencias entre clulas vivas y muertas
Clula viva
Clula muerta
De las tres lneas,
la del centro es la
que corresponde al
lmite del cuadrado
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Tincin de cultivos en monocapa
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Hay tres tipos de contadores electrnicos
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Contador de clulas electrnico (CASY)
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Resultados del recuento de clulas
Es importante poner lmites (inferior y
superior) a los tamaos que se miden
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Recuento mediante anlisis de imagen
Contar clulas
Fundamento del recuento de clulas por anlisis de imagen
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Recuento de clulas por anlisis de imagen
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Esquema del anlisis de la imagen
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Citometra de flujo
Contar clulas
Citometra de flujo
La difraccin de luz frontal permite
contar las clulas y, a la vez, nos
da informacin sobre su tamao.
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Estimacin del nmero de clulas a partir del peso
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Estimacin del nmero de clulas a partir contenido proteico
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Mtodo de Bradford: fundamento
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Mtodo de Bradford: protocolo
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Estimacin del nmero de clulas a partir contenido de ADN
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Determinacin de ADN por la fluorescencia del H33258
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Estimacin del ADN por la absorbancia en el ultravioleta
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Comparacin de los diversos mtodos para contar clulas
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Mtodos para determinar la viabilidad de las clulas
Mtodos para
determinar la
viabilidad de
las clulas
Sntesis de novo de protenas
Incorporacin de
3
H-timidina al ADN
Exclusin del azul tripn
Marcaje fluorescente
con naranja de acridina
y ioduro de propidio
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Viabilidad celular mediante tincin con azul tripn
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Viabilidad celular mediante tincin con azul tripn
Contar clulas
Naranja de acridina: atraviesa
la membrana celular y tie los
cidos nucleicos, generando una
intensa fluorescencia de color
verde a bajas concentraciones.
Ioduro de propidio: no
atraviesa la membrana de
clulas intactas, pero s la de
las clulas daadas. Se une a
los cidos nucleicos,
desplazando al naranja de
acridina y genera una intensa
fluorescencia de color rojo.
Viabilidad celular: Naranja de acridina + Ioduro de propidio
Clulas vivas
Clulas muertas
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Medida de la viabilidad celular a partir de la sntesis de protenas
Contar clulas
Medida de la viabilidad celular a partir de la sntesis de ADN