MTODO

1. IMPLEMENTACIN DE LOS FILTROS ANAEROBIOS INSTALADOS EN SERIE

2. REALIZACIN DE PRUEBAS HIDRULICAS

3. ESTABILIZACIN DEL SISTEMA

4. EVALUACIN DE LOS PARMETROS DE ESTUDIO

1. IMPLEMENTACIN DE FILTROS
ANAEROBIOS INSTALADOS EN SERIE
Se coloc tres filtros de tubera pvc, los cuales se instalaron en serie
comunicados a travs de mangueras delgadas que permitan la entrada
del flujo de agua de manera ascendente. Se ensambl el equipo con
codos de 90, tee y grifos por los cuales se recogeran las muestras.

2. REALIZACIN DE PRUEBAS
HIDRULICAS

Se realizaron pruebas para establecer el caudal ptimo para el
desarrollo del proyecto. Este no debe ser demasiado alto pues
arrastrara parte del lodo contenido en los filtros alterando as los
resultados en la turbiedad.
El caudal ptimo encontrado fue de 30,8ml /50segundos.
3. ESTABILIZACIN DEL SISTEMA

Se realizaron mediciones
diarias de parmetros de
turbiedad, pH y
temperatura. Esto con el
fin de mantener
condiciones estables para
la posterior toma de
muestras.

En caso los parmetros no
salgan con los resultados
deseados se evaluar la
posible causa de ello.

4.EVALUACIN DE LOS PARMETROS
DE ESTUDIO
ANLISIS DE LA PRESENCIA DE
COLIFORMES FECALES Y E. COLI POR
EL METODO DE FILTRACIN POR
MEMBRANA

Esta tcnica es una manera rpida y
simple de estimar poblaciones
bacterianas en el agua, es
especialmente til al evaluar grandes
volmenes de muestras o al realizar
diariamente muchas pruebas de
coliformes. Los medios a utilizar y las
temperaturas de incubacin
disminuyen el desarrollo de bacterias
no coliformes que afectaran
negativamente el crecimiento de
coliformes fecales.

COLIFORMES FECALES O
TERMOTOLERANTES
Procedimiento
Debido a que se trata de aguas residuales tratadas
es necesario diluir previamente las muestras.
Conectar el kitasato o fuente de vaco y colocar en
su sitio el soporte poroso y embudo de filtracin.
Ensamblar todo el equipo de filtracin colocando la
membrana de 0,45 mm en el soporte con pinza
estril.
Homogeneizar la muestra agitndola vigorosamente
25 veces, con movimientos de arriba abajo.
Verter 100ml de la muestra, en el vaso del filtro y
aplicar vaco, para hacer pasar la muestra a travs
de la membrana.
Cerca a la llama de un mechero, retirar la membrana
con una pinza estril y depositarla en una placa
Petri de 60mm de dimetro, preparada previamente
con 4 ml de agar M-FC.

Rotular cada placa Petri.
Luego de filtrar todas las muestras, enjuagar el
vaso tres veces, con porciones de 20 a 30 ml de
agua destilada, posteriormente autoclavar.
Introducir las placas Petri en bolsas plsticas
cerradas hermticamente.
Incubar las muestras sumergindolas a bao mara
a 44,5 0.2C DURANTE 24 HORAS.
Todas las colonias azules se consideran coliformes
fecales.

Resultado
Se seleccionan aquellas membranas que tienen
entre 20-60 colonias azules.
Para el clculo de coliforme fecal, se emplea la
siguiente frmula:



/100 =

(. )
100

E. COLI
Procedimiento
Debido a que se trata de aguas residuales tratadas es
necesario diluir previamente las muestras.
Conectar el kitasato o fuente de vaco y colocar en su
sitio el soporte poroso y embudo de filtracin.
Ensamblar todo el equipo de filtracin colocando la
membrana de 0,45 mm en el soporte con pinza
estril.
Homogeneizar la muestra agitndola vigorosamente
25 veces, con movimientos de arriba abajo.
Verter 100ml de la muestra, en el vaso del filtro y
aplicar vaco, para hacer pasar la muestra a travs de
la membrana.
Cerca a la llama de un mechero, retirar la membrana
con una pinza estril y depositarla en una placa Petri
de 60mm de dimetro, preparada previamente con 4
ml de agar M-FC.
Rotular cada placa Petri.
Luego de filtrar todas las muestras, enjuagar el vaso
tres veces, con porciones de 20 a 30 ml de agua
destilada, posteriormente autoclavar.
Invertir las placas Petri e incubar a 35C 0.5C,
durante 24 horas.
Retirar las placas Petri de la incubadora y realizar el
recuento de colonias. Las colonias de color oscuro
con brillo metlico son E. coli.

Resultados
Se emplea la siguiente frmula:

. /100
=

(. )
100


5. REDACCIN DE DISCUSIN DE
RESULTADOS

Se tom nota de los resultados y se elaboraron
cuadros y grficas de acuerdo a ello.

OBSERVACIONES

CITRAR
Las muestras se recolectaron en 3 pequeas botellas
que fueron entregadas por el laboratorio de Citrar.
Se hizo uso de una probeta y un cronmetro para
medir diariamente el caudal de los filtros, este caudal
tena que permanecer perfectamente constante todos
los das que se analizaban las muestras.
Despus de una semana de analizar las muestras, se
hizo una limpieza de los filtros, esto debido a que los
valores obtenidos en la turbiedad no coincidan con las
muestras analizadas.

OBSERVACIONES
LABORATORIO DE LA FIA
Conteo de Coliformes Fecales
La muestra de entrada tena presencia de pequeas larvas,
mientras que la muestra 1 y 2 carecan de la presencia de dichas
larvas.
El medio preparado fue el M-FC, al momento de ser preparado
torn a un color azul.
Al terminar de filtrar las muestras, se puede notar unas pequeas
manchas impregnadas en las membranas.
Al momento de retirar la membrana filtrante del equipo de
filtracin, por descuido, se contaminaron las membranas filtrantes,
tenindose que reiterar el proceso de filtracin una y otra vez.
Luego de sacar las placas Petri de la incubadora, estas tenan puntos
y manchones (colonias) de color azul.
OBSERVACIONES
Conteo de Escherichia Coli
-La muestra de entrada tambin tena presencia de larvas, mientras
que la muestra 1 y 2 carecan de la presencia de estas larvas.
-El medio preparado fue el EMB, al momento de ser preparado torn a
un color morado; despus de sacarlo del refrigerador tena un color
medio marrn, pero volvi a su color original luego de ser calentado.
-Al terminar de filtrar las muestras, se puede notar unas pequeas
manchas impregnadas en las membranas.
-Aqu tambin ocurri el problema de las membranas, al momento de
retirar la membrana filtrante del equipo de filtracin, por descuido, se
contaminaron las membranas filtrantes, tenindose que reiterar el
proceso de filtracin una y otra vez.
-Luego de sacar las placas Petri de la incubadora, estas tenan puntos y
manchones (colonias) de color verdoso con un brillo en superficie.

RECOMENDACIONES
CITRAR
Se recomienda que el estudiante que sacar las muestras tome las medidas de proteccin,
tales como usar guantes de ltex y un guardapolvo respectivo.
Antes de sacar las muestras se recomienda bombear agua hacia el tanque principal para
mantener constante el flujo de agua.
Una vez terminado de sacar las muestras de los filtros, el estudiante se debe asegurar de
haber cerrado muy bien las llaves de los filtros para prevenir un posible derramamiento de
agua.
Al momento de medir la turbiedad de las muestras, se debe limpiar el tubo donde se
analizar cada muestra, ya que si no se limpia puede generar datos errneos al calcular la
turbiedad.
Cada vez que se quiera calcular el PH, el estudiante debe limpiar antes la superficie de la
membrana de vidrio (electrodo) con agua destilada, ya que el electrodo podra estar sucio y
al momento de calcular el PH no hara contacto con la muestra debido a la suciedad.
Al trmino de la toma de resultados, el estudiante debe lavarse con abundante agua y con
jabn para prevenir una posible enfermedad, y cuando termine de lavarse se recomienda
echarse alcohol sobre la superficie del cuerpo que tom contacto con las muestras, ya que las
muestras analizadas provienen de aguas residuales.

RECOMENDACIONES
LABORATORIO DE LA FIA
Conteo de Coliformes Fecales
Para preparar el medio de cultivo se debe tener en cuenta la relacin de masa del
cultivo de preparacin con la cantidad de agua en la que se preparar.
Asegrese de que las placas a utilizar estn correctamente esterilizadas.
Cuando se plaquee, el estudiante que lo haga debe estar al tanto para flamear el
matraz que contiene el medio luego de que plaquee, esto debe hacer para cada
placa Petri, esto se hace para no contaminar el medio de cultivo.
Al momento de retirar la membrana con la pinza, asegrese de que esta est
esterilizada.
Cuando se abra la placa Petri para poner en ella la membrana filtrante, asegrese
de no abrirla demasiado, abrir lo necesario para poder introducir la membrana.
Tener en cuenta que la temperatura de incubacin es de 44.5C, mientras que el
tiempo es de 24 horas.
RECOMENDACIONES
Conteo de Escherichia Coli
Para preparar el medio de cultivo se debe tener en cuenta la relacin de
masa del cultivo de preparacin con la cantidad de agua en la que se
preparar.
Asegrese de que las placas a utilizar estn correctamente esterilizadas.
Cuando se plaquee, el estudiante que lo haga debe estar al tanto para
flamear el matraz que contiene el medio luego de que plaquee, esto debe
hacer para cada placa Petri, esto se hace para no contaminar el medio de
cultivo.
Al momento de retirar la membrana con la pinza, asegrese de que esta
est esterilizada.
Cuando se abra la placa Petri para poner en ella la membrana filtrante,
asegrese de no abrirla demasiado, abrir lo necesario para poder
introducir la membrana.
Tener en cuenta que la temperatura de incubacin es de 37C, mientras
que el tiempo es de 24 horas.


CONCLUSIONES
Turbiedad

La muestra de entrada presenta una mayor estabilidad de la turbiedad con el pasar
del tiempo en comparacin con la muestra H1, y esta a su vez una mayor
estabilidad que la muestra H2.
> 1 > 2

PH

Casi todas las muestras presentan una estabilidad en el PH. En todas las muestras
el PH se encuentra en el rango de 7.5-8.1.

Temperatura

En todas las muestras la temperatura vara de 20C a 25C, esto tambin se debe a
que la temperatura vara para cualquier da de trabajo.

CONCLUSIONES
Conteo de colonias de Coliformes Fecales

De los resultados obtenidos mediante la frmula:

/100 =

(. )
100

La concentracin de Coliformes Fecales va disminuyendo de la muestra de
entrada hacia la muestra H2, quedando de la siguiente manera:
> 1 > 2

Estos resultados confirmaran nuestra hiptesis echa antes de realizarse el
proyecto.

CONCLUSIONES
Conteo de colonias de Escherichia Coli

De los resultados obtenidos mediante la frmula:

.

100
=

.
100

La concentracin de Escherichia Coli va disminuyendo de la muestra de entrada hacia la
muestra H2, quedando de la siguiente manera:
> 1 > 2

Esos resultados confirmaran nuestra hiptesis echa antes de realizarse el proyecto.

Como conclusin final, nuestra hiptesis fue la correcta, demostrada por los resultados
obtenidos, entonces diremos: La utilizacin de los filtros anaerobios de flujo ascendente s
fue eficiente en el tratamiento de aguas residuales removiendo microorganismos
patgenos.


DISCUSIONES
El pico ms alto de la turbiedad se da en la muestra H1 en
el primer da, pero esto va en contra de lo esperado, ya que
esta tendra que tener menor turbiedad que la muestra de
entrada. Para solucionar esto se realiz una limpieza de
filtros, logrndose luego el buen funcionamiento de estos.
Posiblemente los Coliformes Fecales y la Escherichia Coli se
hallan adaptado al PH bsico, ya que al realizar el anlisis
de las muestras se encontraron estas bacterias.
En la aplicacin de filtros anaerobios de flujo ascendente
para la remocin de microorganismos patgenos
demostramos la eficiencia de esta aplicacin, ya que
encontramos en los filtros H1 y H2 menor concentracin de
estos agentes patgenos (Coliformes Fecales y Escherichia
Coli).