UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA

DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

LABORATORIO DE GENTICA CLNICA
Equipo: 11

Adriana Meja Trevilla
Torres Prez Diana Smirna

DIABETES MELLITUS
DEFINICIN:

CLASIFICACIN

Diabetes tipo 1
Autoinmune
Idioptica

Diabetes tipo 2

Diabetes gestacional

Otros tipos de diabetes

DIABETES MELLITUS TIPO 1
IDDM
Idioptica:
No existe asociacin con
marcadores de
autoinmunidad ni MCH.
Autoinmune:

Asociada a genes
HLA.
Presencia de
anticuerpos
especficos contra
clulas beta
pancreticas
Capacidad de la captacin de insulina en la
diabetes tipo 1.
DIABETES TIPO 1
AUTOINMUNE: presencia
Anticuerp
o
antiinsulin
a
IA
Anticuerpo
contra el
antgeno
citoplasmtic
o de los
islotes
ICA
Anticuerpo
contra la
descarboxila
sa del acido
glutmico
GADA
DIABETES TIPO 1
MHC HLA DM1
SNTOMAS
CARACTERSTICAS:
DIABETES MELLITUS TIPO 2
Se presenta insulina
plasmtica normal o
elevada
Sobre peso y obesidad

Responde a dieta e
hipoglucemiantes orales

Poca tendencia a
cetoacidosis
DIABETES TIPO II
Genes que no forman
parte del MHC:
SLC30A8 (rs12366634)

ABCA1(R230C)

Calpaina-10 (brazo largo del
cromosoma 2)

(SNP)-44

(SNP)-43

FACTORES DE RIESGO

Sobrepeso

Obesidad

Sedentarismo

Edad

Raza

Sexo

GLUCOS
A:
Menor
captacin
por tejidos
Disminucin
en la sntesis
de glucgeno
Reduccin
de la
glucolisis
anaerbica y
aerbica
Mayor
produccin
heptica
de glucosa

LPIDO
S
Disminucin en la
sntesis de
triglicridos
Aumento del
catabolismo de los
triglicridos
Lleva a la
produccin de
cuerpos cetonicos
INSULINA
SNTESIS DE LA INSULINA
SECRECIN
VAS DE SEALIZACIN
Vas de sealizacin
PI3K
Vas de sealizacin
DEL MAPK
VA DE LA PI3K
VAS DE LA MAPK
POLIMORFISMO:

Poli- = mucho, numeroso

Morfo- = Forma.

Definicin: Variacin estructural o funcional
encontrada entre miembros de una misma
especie.

Los polimorfismos se distinguen
terminologicamente de las mutaciones por su
frecuencia. >1%

Polimorfismo
de un solo
nucletido
Tipos de polimorfismos
"repeticiones cortas en tndem"
o, de forma abreviada, STR (del
ingls Short Tandem Repeats).
121 ctaacgatag atagatagat agatagatag atagatagat agatagatag atagatagat
121 ctaacgatag atagatagat agatagatag atagatagat agatagatag atagacagat

SNP (POLIMORFISMOS DE
NUCLEOTIDOS SIMPLES)
Variante de
una nica
base en una
secuencia de
ADN
Se localizan
en cualquier
parte del
genoma
Estas
variaciones
son
heredables, por
lo tanto son
usadas como
marcadores
para localizar
genes
Modifican
el sentido
de un
codn o
alteran la
expresin
de un gen.
POLIMORFISMO EN
TRANSPORTADOR
ABCA1
GEN ABCA1
Tiene 147,153 pares de bases y 50 exones.

Codifica para una protena de membrana
dependiente de ATP de 2261 aminocidos

Funcin: Transporta colesterol y fosfolpidos a
travs de membranas, hacia apolipoproteinas
con bajo o nulo contenido lipidico.
HDL.



VARIABILIDAD DEL GEN
ABCA1


Gen con una gran cantidad de
polimorfismos
Se conocen ms de 850
diferentes SNPs.
Contribuyen a la variacin de los
niveles de HDL y apoA-I.
FUNCIONALIDAD DE LA
VARIANTE R230C
CISTEN
A
ARGININ
A
Grupos sulfuro forman puentes disulfuro.

Puentes generan estabilidad a la protena
y mantienen la estructura.
ENZIMAS DE RESTRICCIN

Las enzimas de
restriccin,
tambin
conocidas como
endonucleasas,
son enzimas que
cortan los
enlaces
fosfodiester del
material gentico
a partir de una
secuencia que
reconocen.
Las mismas
permiten
cortar DNA de
hebra doble,
donde
reconocen
secuencias
palindrmicas
Los sitios de
restriccin
cuentan con
entre 4 y 8 pares
de bases, con
las que son
reconocidos.
Enzimas de restriccin
La enzima de restriccin utilizada es: BSP1191
Restriction Site Sequence:
...TTCGAA...
...AAGCTT...

Corta el ADN en la siguiente secuencia:
5. T T C G A A 3
3. A A G C T T 5






AGA, AGG, CGA, CGG y CGC =
Arginina

UGU y UGC = Cistena
Primers

Foward : GTC TGT GCA ATG GAT CAA AAT
CA

Reverse: GCT TCA GGA TGT CCA TGT TGG
TTC
1) Necesitamos la secuencia:
CTTYGTTCCAACATGGACATCCTGAAGC

2) Necesitamos el primer mutagnico
GAACCAACATGGACATCCTGAAGC


3) Necesitamos la enzima de corte BSP1191
TT/CGAA

Como generamos el corte?
Fundamento.
Si existe la variante R230C en el gen ABCA1,
entonces la enzima de restriccin BSP1191va
a reconocer el sitio, donde realizar el corte.

LIMITACIONES DE LA PRUEBA
DE DETECCIN DEL
POLIMORFISMO
La mutacin debe ser conocida.
Es importante tener conocimiento de
dnde se encuentra el gen en el que
se presenta la mutacin.
La mutacin debe encontrarse en
una diana de una endonucleasa de
restriccin.
Deben existir dos o ms alelos para
el gen.
DIAGNSTICO DE DIABETES MELLITUS
Glucemia en ayunas
Medida en plasma venoso 126 mg/dl.
Prueba de tolerancia oral a la glucosa (PTOG).
Glucemia medida en plasma venoso 200 mg/dl 2 horas
despus de una carga de glucosa
Glucemia casual
Medida en plasma venoso 200 mg/dlen un paciente con
Sntomas de diabetes.
Hemoglobina glucosilada
6.5%.
Amplificacin por PCR
Mezcla de Rx adecuando las cantidades de cada
reactivo de acuerdo con el nmero de Rx a realizar.









Se

Reactivo Para 1 Rx Conc. Por Rx 13 Rx.
H20 Calidad
Millipore
14.65 L ----------------------
-
219.75L
Amortiguador
PCR 10X
2.0 L 1 X 30 L
25mM de
MgCL2
2.0 L 2.5 M 30 L
5nm de d NTPS 1.0 L 200 nM 15 L
5 U/L de Taq 0.1 L 0.5 U 1.5 L
Mezcla de
Oligonucleotidos
0.25 L 250 nM 3.75 L
Volumen total. 20 L 300L
Amplificacin por PCR
Realizar mezcla de Rx en un tubo eppendorf y
posteriormente fraccionarla en alcuotas de 20 L
Adicionar la muestra de ADN (1circulo
de FTA previamente tratado)
El control negativo no lleva FTA
Realizar la amplificacin del
gen en el termociclador
Eppendorf
Programa de ciclaje
Nm.. De paso Temperatura C Tiempo
1 94 5 min.
2 55 2 min.
3 72 2 min.
4 94 45 segundos
5 Repetir del paso 2 al 4,
35 ciclos.
--------
6 55 2 min.
7 72 5 min.
8 20 50 minutos
9 Terminar
LEY DE EQUILIBRIO DE HARDY-
WEINBERG

Las frecuencias de los distintos genotipos que se
forman durante el
apareamiento dependen nicamente de las
frecuencias allicas de la poblacin.

Considerando un locus autosmico, cuando la
poblacin es infinitamente grande, y que no est
sujeta a ninguna fuerza evolutiva como seleccin,
migracin, mutacin y deriva gentica, tanto las
frecuencias allicas como las genotpicas
permanecern constantes de generacin en
generacin, pudindose predecir sus valores para
las futuras generaciones.
En la progenie se reconstruyen los genotipos. Por lo tanto, los genotipos de los
progenitores no tienen continuidad de una generacin a la siguiente, los que tienen
continuidad son los alelos.









Nomenclatura de las frecuencias genotpicas:
f(A1 A1)= P
f(A1 A2)= H
f(A2 A2)= Q

P+H+K=1
Las frecuencias genotpicas de equilibrio estn dadas por el desarrollo
del
binomio:
Siendo: p2 = f(A1 A1) 2pq = f(A1 A2) q2 = f(A2 A2)
Entonces, si la poblacin est en equilibrio:
p2 = P 2pq = H q2 = Q

Principio:
explicar las relaciones entre las frecuencias allicas y
genotpicas en una poblacin.
Ejemplo: supongamos una poblacin
compuesta por 200 individuos: 60 A1A1, 120
A1 A2 y 20 A2 A2
Las frecuencias genotpicas sern:
f(A1 A1 variante C230C1)= 60/200 = 0,3 = P
f(A1 A2) R230C = 120/200 = 0,6 = H
f(A2 A2) R230R = 20/200 = 0,1 = Q
METODOLOGI
A