ln(No/N) = k.t, obtm-se o valor de D para uma determinada temperatura, sendo que quanto maior a temperatura menor o valor deste, e menor a resistncia do microrganismo. N t T 1 T 2 T 3 Para B. stearothermophilus e para E. coli a ordem de grandeza das temperaturas de morte trmica so distintas: N t 110 116 121
105 B. stearothermophilus E. coli N t 56 58 60
54 Para relacionar o efeito da temperatura de morte trmica com a cintica de uma reao qumica, utiliza-se a equao de Arrhenius. k = K . exp(- /R.T) Onde: K uma constante emprica a energia de ativao R a constante dos gases T a temperatura absoluta Linearizando, tem-se: log k = A (B/T) Onde: A = log K B = /2,303.R k (min -1 ) 10 5 /T B. st.
254 266 K -1 Assim, pode-se obter o valor de k para qualquer temperatura de um intervalo Clculo de tempo de esterilizao tempo necessrio para reduzir o nmero de microrganismos de N o para N. Na prtica, porm, sua aplicao apresenta restries. 1. Meios de fermentao tm vrios m.o., e o valor de k varia para m.o. diferentes; Como alternativa pode-se escolher um m.o. mais resistente como referncia (ex. B. stearothermophilus) e considerar que todos apresentam resistncia igual a ele 2. O valor de k depende tambm do meio e da temperatura, sendo, muitas vezes, necessrio determinar experimentalmente o seu valor Pela equao: t = 1 . ln N o possvel calcular o
k N 3. Nos meios de fermentao industriais, as clulas podem formar aglomerados ou estar protegidas por partculas slidas, o que implica maior resistncia trmica.
4. Pelo conceito de esterilizao: destruio de todos os m.o. vivos, ou seja, N = 0, impossvel aplicar a equao. Como alternativa pode-se admitir um nmero final aceitvel e diferente de zero, ou seja, considerar uma Probabilidade de falha.
Sendo E t o nmero de operaes de esterilizao realizadas nas mesmas condies e E f o nmero de operaes de esterilizao que falharam, define-se Probabilidade de falha como P = E f / E t
Multiplicando-se E f /E t por 100 tem-se a probabilidade de falha expressa em porcentagem. Exemplo: Admitir que, de 100 esterilizaes (tanques), em 3 delas sobrar um m.o. vivel. Portanto, N o(total) = 100 . N o(individual) e N = 3
Aplicando a equao, tem-se: t = 1 . ln 100.N o
k 3
Assim, pode-se calcular o tempo substituindo-se o nmero final de m.o. viveis pela probabilidade de falha: P 1 . ln N o k 0,03 t = 1 . ln N o k t = Exerccio O valor de k para B. stearothermophilus, a 121 o C, igual a 1,535 min -1 . Considerando as exigncias a seguir, calcule o tempo necessrio para a esterilizao dos meios A e B. Meio A: necessrio que, a cada 1.000 operaes, no mximo 3 apresente uma clula vivel. Meio B: necessrio que, a cada 1.000.000 operaes, no mximo 1 apresente uma clula vivel. Dados: N o = 2x10 9 cel/L; V = 2 L Exemplo Calcular o tempo de esterilizao de um mosto, considerando os seguintes dados: -Volume = 100 m 3 -Contaminao inicial = 7,2 . 10 9 cel./L -Temperatura de esterilizao = 120 o C -Temperatura mnima letal = 80 o C -Probabilidade de falha = 0,001 (0,1%) -Curva de aquecimento e de resfriamento (grficos) -Variao de k em funo da temperatura (grficos) km = 19,40 min -1 km = 3,23 min -1 k = 1,60 min -1 Refazer o clculo, considerando agora uma contaminao inicial de 4,3.10 2 cel./L e uma probabilidade de falha igual a 1%.