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It has not escaped our notice

that the specific pairing we have


postulated immediately suggests
a possible copying mechanism
for the genetic material.




Es ist uns nicht entgangen,
dass die spezifische Paarung,
die wir vorgeschlagen haben,
direkt auf einen mglichen
Mechanismus der
Vervielfltigung des genetischen
Materials hinweist.
(J ames D. Watson und Francis H. C.
Crick (1953)
Wie ist das Zitat von Watson und
Crick gemeint?
Entwickelt eine
Hypothese wie die DNA verdoppelt
werden kann.

Versuchsbeschreibung
Meselson und Stahl berprften 1958 die drei
Hypothesen bezglich der Reduplikation der DNA
experimentell
Escherichia-coli-Bakterien (E.-coli) wurden ber 14
Generationen in zwei Nhrlsungen gezchtet
Nach drei Tagen wird die DNA aus den Bakterien
extrahiert und einer Dichtegradientenzentrifugation
unterzogen.
In einer der Nhrlsungen enthlt das Ammoniumchlorid
(NH
4
Cl) ein schweres Stickstoffisotop (relative Atommasse
15;
15
N).
In der zweiten Nhrlsungen enthlt das Ammoniumchlorid
(NH
4
Cl) ein leichteres Stickstoffisotop (relative Atommasse
14;
14
N).
1
Dichtegradientenzentrifugation
Die Dichtegradientenzentrifugation gehrt zu den
physikalischen Trennverfahren.

Verschiedene gelste Makromolekle werden in einer
Ultrazentrifuge anhand ihrer Bewegungsgeschwindigkeit
(s.a. Sedimentationsgeschwindigkeit) unter dem Einfluss
starker Zentrifugalkrfte sortiert.

Die zu untersuchende Probe wird auf die Oberflche des
Zentrifugenrhrchens gegeben.

Whrend der mehrstndigen Trennung sedimentieren die
Molekle mit unterschiedlicher Geschwindigkeit im
Lsungsmittel, und zwar solange die Dichte der Probe
grer ist als die Dichte des Lsungsmittels und um so
schneller, je grer der Dichteunterschied ist.
Dichtegradientenzentrifugation
Bricht man die Zentrifugation zu einem geeigneten
Zeitpunkt ab, erhlt man unterschiedliche Banden der
Bestandteile der Probe.

E. coli Bakterien in
15
NH
4
Cl Medium

E. coli Bakterien in
14
NH
4
Cl Medium

Versuchsdurchfhrung
N
N
N
N
N
N
N N
N
N
N
N
N
N N
Einbau des
schweren
Stickstoffes
in die Nucleotide
(Base, Zucker, Phosphat)
2
Probenentnahme nach 3 Tagen & DNA-Extraktion
48h Dichtegradientenzentrifugation
Versuchsdurchfhrung / Phase I
E. coli Bakterien in
15
NH
4
Cl Medium

E. coli Bakterien in
14
NH
4
Cl Medium

48h Dichtegradientenzentrifugation
? ?
Versuchsdurchfhrung / Phase I
E. coli Bakterien in
15
NH
4
Cl Medium

E. coli Bakterien in
14
NH
4
Cl Medium

3
48h Dichtegradientenzentrifugation
Versuchsdurchfhrung / Phase I
E. coli Bakterien in
15
NH
4
Cl Medium

E. coli Bakterien in
14
NH
4
Cl Medium

leichte DNA
schwere DNA
Nach 20 Minuten Dichtegradientenzentrifugation

berfhrung in
14
NH
4
Cl Medium (leichten Stickstoff)
Versuchsdurchfhrung / Phase II
E. coli Bakterien in
15
NH
4
Cl Medium

E. coli Bakterien in
14
NH
4
Cl Medium

Nach 20 Minuten Dichtegradientenzentrifugation
?
E. coli Bakterien in
15
NH
4
Cl Medium

E. coli Bakterien in
14
NH
4
Cl Medium

Versuchsdurchfhrung / Phase II
4
Nach 20 Minuten Dichtegradientenzentrifugation
E. coli Bakterien in
15
NH
4
Cl Medium

E. coli Bakterien in
14
NH
4
Cl Medium

Versuchsdurchfhrung / Phase II
Transfer auf die molekulare Ebene
Nach 20 Minuten Dichtegradientenzentrifugation
E. coli Bakterien in
15
NH
4
Cl Medium

E. coli Bakterien in
14
NH
4
Cl Medium

Transfer auf die molekulare Ebene
5
Transfer auf die molekulare Ebene
Transfer auf die molekulare Ebene
G
e
n
e
r
a
t
i
o
n

I
I

G
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n
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n

I

Phase I
Phase II
G
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n
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n

I
I

Transfer auf die molekulare Ebene
G
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n
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n

I

Phase I
Phase II
Transfer auf die molekulare Ebene
Phase I
Phase II
G
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I
I

G
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n
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n

I

6
Nach 40 Minuten Dichtegradientenzentrifugation
E. coli Bakterien in
15
NH
4
Cl Medium

E. coli Bakterien in
14
NH
4
Cl Medium

Transfer auf die molekulare Ebene
G
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I

G
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n
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I
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G
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n

I
I
I

nach 20 Minuten
nach 40 Minuten
Phase I
Transfer auf die molekulare Ebene