CRESCIMENTO MICROBIANO

pH
smbolo para Potencial hidrogeninico ou Potencial
de hidrognio , que indica a acidez, neutralidade ou
alcalinidade do meio.
6.5 a 7.5 (ideal)

0 7 14
cido alcalino


pH cido inibe o crescimento microbiano
pH alcalino inibe o crescimento microbiano
podemos conservar alimentos em pH cido: pepino,
cebolinha, azeitona, palmito
CRESCIMENTO MICROBIANO
Presso Osmtica

Os microrganismos retiram da gua, presente no seu
meio ambiente, a maioria dos seus nutrientes solveis.

Quando uma clula microbiana se encontrar em uma
soluo contendo uma concentrao de sais superior
quela do interior da clula ocorrer a passagem da gua
de dentro da clula, atravs da membrana plasmtica,
para o meio extracelular.
CRESCIMENTO MICROBIANO

Este fenmeno s ocorre em condies experimentais,
uma vez que, na natureza os organismos se adaptam s
condies do seu meio ambiente, e tambm pelo fato
da membrana celular ser uma membrana seletiva, que
respeita a troca de ions.

A osmose o nome dado ao movimento da gua entre
meios com concentraes diferentes de solutos,
separados por uma membrana semipermevel.

A perda de gua por osmose causa a PLASMLISE ou
diminuio da membrana plasmtica da clula.

CRESCIMENTO MICROBIANO

A importncia deste fenmeno est na inibio do
crescimento no momento em que a membrana
plasmtica se separa da parede celular.


Assim, a adio de sais em uma soluo, com
consequente aumento da presso osmtica, pode ser
utilizada na preservao dos alimentos, pois a alta
concentrao de sal ou de acar remove a gua do
interior da clula microbiana impedindo seu
crescimento.



CRESCIMENTO MICROBIANO

Microrganismo Halfilo: dependente de altas
concentraes de sal para o crescimento. So os
organismos encontrados nos mares (6 a 15% de Cloreto
de Sdio). Ex. Vibrio fischeri

Microrganismo Halfilo Extremo: aquele dependente
exclusivamente de concentraes muito altas de sal para
exercer o seu crescimento (Concentrao de 15 a 30% de
Cloreto de Sdio). Ex. Halobacterium salinarum

CRESCIMENTO MICROBIANO

Microrganismo Halotolerante: aquele que tolera certa
dose de salinidade (Concentrao de 1 a 6% de Cloreto
de Sdio). Ex. Staphylococcus aureus


Microrganismo no Halfilo: so aqueles em que a
salinidade txica e ocasiona a lise celular. Ex.
Escherichia coli

CRESCIMENTO MICROBIANO
2. QUMICOS
Carbono:
Componente estrutural bsico de todos os seres
vivos.
Aproximadamente 50% do peso seco (sem gua)
Fundamental para a sntese de protenas,
carboidratos e lipdeos
Sem carbono as bactrias no sobrevivem
Fonte:
Matria orgnica em decomposio: heterotrficas
A partir do CO
2
: autotrficas (produzem o prprio alimento)
CRESCIMENTO MICROBIANO
Nitrognio
Corresponde a 14% do peso seco da bactria
Fundamental para a sntese de aminocidos, protenas
e nucleotdeos (DNA, RNA)

Fonte:
Matria orgnica em decomposio
Atravs da atmosfera so as fixadoras de nitrognio
Estabelecem uma relao de simbiose, encontram-se nas razes
das leguminosas (soja, feijo)
Usadas para enriquecer o solo
CRESCIMENTO MICROBIANO
Enxofre:
Corresponde a 4% do peso seco de uma bactria
Importante para realizao das snteses dos
aminocidos, protenas e vitaminas (tiamina e biotina)

Fonte:
Material orgnico em decomposio
CRESCIMENTO MICROBIANO
Fsforo:
Corresponde a 4% do peso seco de uma bactria
Importante para sntese de cidos nucleicos e
fosfolipdeos de membranas

Fonte:
Matria orgnica em decomposio




Oxignio:
Importante para o processo de respirao celular,
aerbica


Porque existem bactrias que vivem e outras que morrem
na presena de O
2

CRESCIMENTO MICROBIANO
CRESCIMENTO MICROBIANO

Durante a respirao aerbica so gerados radicais

txicos, como radicais livres derivados do O2 (nions
superxidos), ons hidroxila e perxido de hidrognio.

As bactrias que sobrevivem na presena de O2

possuem enzimas que inativam os radicais livres
liberados do oxignio
(catalase e superxido desmutase)


CRESCIMENTO MICROBIANO


Aerbias estritas/ obrigatrias
Bactrias que s vivem e crescem na presena de
oxignio
Ex: Staphylococcus aureus


Anaerbicas facultativas
Bactrias que sobrevivem tanto na presena como
na ausncia de oxignio
Ex: Escherichia coli

CRESCIMENTO MICROBIANO

Anerbias estritas/ obrigatrias
Bactrias que s sobrevivem na ausncia de oxignio
Ex: Clostridium tetani

Anaerbias aerotolerantes:
Necessitam de baixa taxa de oxignio para
sobreviverem
Ex: Lactobacillus lactis

Microaerfilas:
Necessitam muito pouco oxignio para sobreviverem
Ex: Campylobacter jejuni

MEIOS DE CULTURA
Material nutriente cujo objetivo possibilitar o crescimento
microbiano

So meios sintticos
De uso laboratorial
Os microrganismos criados em meios de cultura so
denominados CULTURAS
Possui condies ideais para o crescimento microbiano
(nutrientes, pH, gua, oxignio)
Estril


Existem dois tipos d meios de cultura:
Lquido - caldo
Slido - gar
MEIOS DE CULTURA

gar:
polissacardeo complexo
Provem de algas marinhas
Gel = slido (abaixo de 40C)
lquido = (acima de 40C)
Suporta altas temperaturas, fervura
Material altamente resistente a
deteriorao e alterao de temperatura
Bactrias podem ser cultivadas em Placas
de Petri ou tubos de vidro com tampa de
rosca



TIPOS DE MEIO DE CULTURA
Existem vrios:
Cada bactria necessita de uma composio
especial

1. MEIO QUIMICAMENTE CONHECIDO
COMPOSIO QUMICA CONHECIDA
Ex: Glicose 5g
Cloreto de sdio 0,05g
Fosfato monobsico 1,0g
Sulfato de magnsio 2,0g
H2O 1L
TIPOS DE MEIO DE CULTURA
BACTRIAS FASTIDIOSAS:
organismos exigentes
dependem de nutrientes especficos
Ex: Lactobacillus spp

2. MEIO COMPLEXO:
COMPOSIO QUMICA DESCONHECIDA
Extrato de carne, levedura ou peptonas
Ex: meio crebro infuso
meio extrato de levedura
meio fgado corao

substncias TAMPONANTES (limitam as variaes do
pH)


TIPOS DE MEIO DE CULTURA

Todo meio complexo lquido denominado: CALDO NUTRIENTE
Todo meio complexo slido denominado: GAR NUTRIENTE

O meio complexo pode ser usado para cultivar:
Bactrias aerbicas
Bactrias anaerbicas

Para bactrias anaerbicas estritas usamos
a jarra de anaerobiose
TIPOS DE MEIO DE CULTURA
3. MEIO SELETIVO
Seleciona o crescimento da bactria de interesse
Possui agentes inibidores de determinados
microrganismos.

Ex: E. coli
gar MacConkey inibe o
crescimento de bactrias
Gram positivas

TIPOS DE MEIO DE CULTURA
4. MEIO DIFERENCIAL
Identifica a bactria atravs da forma da colnia ou da
cor da colnia em crescimento

Ex: Meio de Baird Parker
Staphylococcus aureus cultivado
neste meio apresenta colnias
lisas, brilhantes e negras

TIPOS DE MEIO DE CULTURA
5. MEIO DE ENRIQUECIMENTO
Crescimento de bactrias em nmero muito pequeno
em uma amostra. suplementado com nutrientes
especficos para o microrganismo que se deseja
pesquisar. Geralmente um meio lquido.
Ex: Caldo Fraser de enriquecimento para Listeria sp
DIVISO BACTERIANA
Fisso Binria

a. duplicao do material gentico (DNA)
b. invaginao da membrana plasmtica,
formando uma dobra (mesossomo)
c. sntese da parede celular (nova)
d. formao de duas bactrias idnticas a clula
me

As bactrias de um modo geral se dividem em um
perodo mdio de 20 minutos

DIVISO BACTERIANA
Fisso binria
Membrana plasmtica
Parede celular

Material gentico
CURVA DE CRESCIMENTO
BACTERIANO










Conforme vai ocorrendo o crescimento das bactrias
ocorre o esgotamento dos nutrientes, queda do pH e falta
de espao.
Caldo nutriente
bactria
Condies: 37C, pH = 6.8

CURVA DE CRESCIMENTO
BACTERIANO
1. Fase LAG/ LATENTE
taxa de crescimento = ZERO
perodo de adaptao nutritiva ao meio
alta taxa de atividade metablica
NO h diviso celular
perodo de incubao - Doenas Infecciosas

2. Fase LOG/ EXPONENCIAL
velocidade de duplicao caracterstica para
cada espcie
taxa de crescimento populacional constante



CURVA DE CRESCIMENTO
BACTERIANO

3. Fase ESTACIONRIA
taxa de crescimento populacional = ZERO
acmulo de metablito txico, falta de
substrato ou de espao
produo de esporos
A taxa de nascimento igual de morte,
resultando em um nmero igual de clulas em
um dado tempo.


CURVA DE CRESCIMENTO
BACTERIANO

4. Fase DECLINIO (AUTLISE)

ZERO nutrientes, pH muito cido
morte da forma vegetativa bacteriana
o nmero de clulas morrendo maior que o
de clulas nascendo
as clulas que formam esporos sobrevivero
mais tempo que aquelas que no formam

CURVA DE CRESCIMENTO
BACTERIANO


a representao grfica do crescimento de
uma determinada bactria em um
determinado meio de cultura
MTODOS DE CONTAGEM DE
MICRORGANISMOS
MTODOS DE CONTAGEM DE
MICRORGANISMOS
A quantidade de luz que atravessa a suspenso celular
depende:
da concentrao de clulas na suspenso e do tamanho
destas
do comprimento de onda e da intensidade (I
0
) da luz
incidente
e do dimetro do tubo que contm a suspenso celular.

A Densidade ptica (D.O.) da cultura corresponde
Absorbncia, que determinada com base na expresso
D.O = log (I
0
/I)), onde I
o
a intensidade da luz incidente e I a
intensidade da luz transmitida atravs da suspenso de clulas.

MTODOS DE CONTAGEM DE
MICRORGANISMOS
Um espectrofotmetro possui:
uma fonte estvel de energia radiante (normalmente uma lmpada
incandescente),

um seletor de faixa espectral (os prismas, que seleciona o
comprimento de onda da luz que passa atravs da soluo de teste),

um recipiente para colocar a amostra a ser analisada (a amostra
deve estar em recipientes apropriados como as cubetas e tubos de
ensaio)

um detector de radiao (fotoclula) que permite uma medida
relativa da intensidade da luz. Quantifica a luz que no foi desviada
pelas clulas presentes na suspenso microbiana, I, medindo-se a
Densidade ptica (D.O) dessa suspenso (com base na absorbncia)
MTODOS DE CONTAGEM DE
MICRORGANISMOS

MTODOS DE CONTAGEM DE
MICRORGANISMOS
MTODO DE CONTAGEM TURBIDIMTRICOS

Principais caractersticas:

CONTAM CLULAS VIVAS E MORTAS

MAIS ADEQUADO PARA AMOSTRAS
LQUIDAS

POPULAO DEVE SER ELEVADA

RPIDO E COM RESULTADOS IMEDIATOS
MTODOS DE CONTAGEM DE
MICRORGANISMOS
Colocar numa srie de 10 tubos de dimetro uniforme
0,1 mL;0,2mL; 0,3 mL etc...de sol a 1% de cloreto de
brio. Completar os volumes para 10 mL com sol a 1%
de cido sulfrico, obtendo-se turvao crescente
devido as diferentes concentraes de sulfato de
brio.
MTODOS DE CONTAGEM DE
MICRORGANISMOS

MTODOS DE CONTAGEM DE
MICRORGANISMOS
MTODOS DE CONTAGEM DE
MICRORGANISMOS
MTODOS DE CONTAGEM DE
MICRORGANISMOS
MTODOS DE CONTAGEM DE
MICRORGANISMOS
MTODOS DE CONTAGEM DE
MICRORGANISMOS
MTODOS DE CONTAGEM DE
MICRORGANISMOS
O mtodo baseia-se na filtrao de volumes adequados
da amostra diluda

atravs de membrana filtrante com porosidade de 0,45
m.

As bactrias a serem detectadas, apresentando
dimenses maiores, ficaro retidas na superfcie da
membrana, a qual ento

transferida para placa de Petri contendo meio seletivo e
diferencial.
RECOMBINAO GENTICA - GENTICA
BACTERIANA - REPRODUO SEXUADA
As informaes genticas das bactrias esto contidas:

Cromossomo
contm quase a totalidade das informaes genticas
das bactrias.

Plasmdeos
contm poucas informaes e a maioria no
essencial para a vida bacteriana.
RECOMBINAO GENTICA
GENTICA BACTERIANA
Cromossomo organela celular presente no
citoplasma, nica, circular, composta de DNA de cadeia
dupla, forma enovelada e compacta.
Replicao conservativa: as duas cadeias da molcula
separam-se e cada uma serve de molde para sntese
de uma nova cadeia. Cada clula filha na diviso
binria recebe uma nova molcula de DNA

Plasmdio molculas de DNA extra cromossmica,
circulares fechadas, fita dupla, altamente compacta;
replicam-se automaticamente; menores que o DNA
cromossmico
RECOMBINAO GENTICA
GENTICA BACTERIANA

Tipos de variaes genticas:
a. Mutao: qualquer alterao na sequncia de
nucleotdeos da molcula do DNA cromossmico
podem ser causadas por :

erros de copia do material durante a diviso celular,

exposio a radiao ultravioleta ou ionizante,
mutagnicos qumicos, ou vrus.

mutaes espontneas durante processos conhecidos
como hipermutao.


RECOMBINAO GENTICA
GENTICA BACTERIANA
b. Transferncia de material gentico:

Os genes transferidos podem:
se integrar ao cromossomo da bactria ou
persistir como um elemento citoplasmtico autnomo.

Os processos de transferncia podem ser por:

GENTICA BACTERIANA

Transformao
um processo no qual h lise de determinado
microrganismo com liberao de seu material gentico
para o meio;

Alguns tipos de bactrias em condies especiais so
capazes de captar esse DNA incorporando-o ao seu
genoma e passam a exibir o fentipo (caracterstica)
da doadora.

GENTICA BACTERIANA

Essas bactrias ficam, ento, com constituio
gentica modificada e so chamadas
transformadas.

Cientistas tm utilizado a transformao como
uma tcnica de Engenharia Gentica, para
introduzir genes de diferentes espcies em clulas
bacterianas (bactrias transgnicas).

GENTICA BACTERIANA
Utilizado em bactrias E. coli para produo de
insulina

Pedaos de DNA humano com a sequncia que
determina a produo de insulina foram
introduzidos em bactrias que passaram a
sintetizar este hormnio

Atualmente grande parte da insulina
comercializada vem da ao dessas bactrias
transgnicas
GENTICA BACTERIANA
GENTICA BACTERIANA

Conjugao

Na conjugao bacteriana, pedaos de DNA passam
diretamente de uma bactria doadora para uma
receptora.

Isso acontece atravs de microscpicos tubos proticos,
chamados pontes citoplasmticas, o pili.


GENTICA BACTERIANA

Conjugao

O fragmento de DNA transferido se recombina com o
cromossomo da bactria receptora, produzindo novas
misturas genticas, que sero transmitidas s clulas
filhas na prxima diviso celular.

Essa bactria "recombinante" pode apresentar diviso
binria, dando origem a outras clulas iguais a ela.


GENTICA BACTERIANA
Conjugao
GENTICA BACTERIANA
Transduo (Bacterifago)
as molculas de DNA so transferidas de uma bactria a
outra usando vrus como vetores.

Estes, ao se formarem, podem eventualmente incluir
pedaos da bactria que lhe serviu de hospedeira.

Ao infectar outra bactria, o vrus que leva DNA
bacteriano o transfere junto ao seu.

Se a bactria sobreviver infeco viral, pode passar a
incluir os genes de outra bactria em seu genoma.

GENTICA BACTERIANA
Transduo