Regulacin de la actividad enzimtica

Regulacin de la actividad enzimtica

Regulacin de la concentracin enzimtica

Regulacin de la actividad intrnseca
de la enzima

1. Regulacin alostrica
2. Regulacin por modificacin covalente
Regulacin alostrica
Procesos a nivel celular; regulacin de ajuste fino de la
actividad enzimtica, a travs de efectos de
retroalimentacin (negativa o positiva)
Regulacin por modificacin covalente
Procesos a nivel supracelular (orgnico); regulacin a gran
escala de actividades enzimticas, a travs de modificacin
covalente de enzimas, provocadas por seales
(transduccin de seales)
Retroalimentacin negativa en vas metablicas,
Thr a-cetobutirato Ile
Treonina
desaminasa
Sntesis de Isoleucina
El producto final de la ruta, Isoleucina, inhibe a la primera
enzima de la misma, Treonina desaminasa
Retroalimentacin negativa en vas metablicas
Asp + CP Carbamil aspartato CTP
Sntesis de pirimidinas
ATCasa
El producto final de la va, CTP (citidin trifosfato) inhibe a
la primera enzima de la ruta metablica, Aspartato
transcarbamilasa.

Al mismo tiempo, dicha enzima puede ser activada por ATP
ATP
+
Rutas metablicas controladas por retroalimentacin
Gliclisis Fosfofructokinasa ATP
Gluconeognesis FBP fosfatasa AMP
Bios. cs. Grasos AcetilCoA carboxilasa AcilCoA
Bios. Colesterol HMGCoA reductasa Colesterol
Bios. Purinas PRPP sintetasa AMP,GMP,IMP
Ruta Enzima Inhibidor
En el estudio de las enzimas controladas por realimentacin
negativa, se comprobaron una serie de regularidades en las
mismas:

1. Primer paso de una ruta metablica o punto de ramificacin
2. Enzimas de naturaleza compleja: subunidades; la enzima
puede desensibilizarse a sus inhibidores por diversos mtodos.
3. Los inhibidores se comportan como competitivos (elevan el
valor de la K
m
aparente, pero sin embargo no son anlogos
estructurales del substrato
Estas ltimas caractersticas lleva al concepto de
alosterismo:
Una accin sobre la actividad enzimtica que se desarrolla
fuera del Centro Activo (Jacob y Monod, 1960)
s s i
Centro
activo
Centro
alostrico
Centro
alostrico
Centro
activo
En ausencia de inhibidor,
el substrato se fija
normalmente al centro
activo
Cuando el inhibidor ocupa el
centro alostrico, tiene lugar un
cambio conformacional en el
centro activo que impide la
fijacin del substrato
Inhibicin alostrica
Otra caracterstica importante de las enzimas
alostricas es que presentan cinticas anmalas,
normalmente cinticas sigmoides:
v
s
La presencia de una sigmoide
implica la existencia de
cooperatividad en la fijacin
del substrato
La cooperatividad (positiva) consiste en que la fijacin de una
molcula de substrato favorece la fijacin del siguiente, y as
hasta ocuparse toda la molcula
s s s s s s
s
s
s s
+ + +
1 2 3
En trminos de Km veramos que K
m1
> K
m2
> K
m3

Existe tambin cooperatividad negativa, cuando la fijacin de
una molcula de substrato dificulta la fijacin del siguiente.
El comportamiento cooperativo implica:



1. Que hay ms de un sitio de fijacin de substrato
por molcula de enzima (estr.cuaternaria)

2. Que hay interacciones entre los sitios de fijacin
Un sistema alostrico clsico es la Hemoglobina:
1. La fijacin de su substrato, O
2
, es de tipo sigmoide
2. La fijacin del substrato puede inhibirse por
efectores (H
+
, CO
2
, 2,3-BPG) que no actan sobre el
Centro Activo (grupo hemo)

3. Las subunidades, por separado, presentan cintica
michaeliana en la fijacin de O
2

Cinticas michaeliana y sigmoide:
Mioglobina y Hemoglobina
s
0 2 4 6 8 10 12
Y
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
Mioglobina
Hemoglobina
Efecto del pH sobre la saturacin de la hemoglobina
PO
2
, mmHg
0 20 40 60 80 100
S
a
t
u
r
a
c
i

n

d
e

O
2
,

%
0
20
40
60
80
100
pH 7.4
pH 7.0
pH 6.6
(Efecto Bohr)
Efecto del 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG)
sobre la saturacin de la hemoglobina
PO
2
, mmHg
0 20 40 60 80 100
S
a
t
u
r
a
c
i

n

d
e

O
2
,

%
0
20
40
60
80
100
0
0.1 mM
1 mM
Inhibidores y activadores
alostricos
s
0 2 4 6 8 10 12
Y
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
(+ Inhibidor)
(+ Activador)
(sin efectores)
V
+

V
0

V
-

Los efectores alostricos operan sobre el grado de
cooperatividad del sistema:
- Los inhibidores alostricos aumentan el grado de
cooperatividad

- Los activadores alostricos disminuyen el grado de
cooperatividad; a concentraciones elevadas de activador, la
cintica pasa a ser michaeliana, y deja de ser sigmoide.
Ecuacin de Hill
Obsrvese que para h=1, esta ecuacin se reduce a una forma
normalizada de la ecuacin de Michaelis-Menten:
h > 1, cooperatividad positiva
h = 1, no hay cooperatividad
h < 1, cooperatividad negativa
s
s s s s s
s
s s
s
L
i
i i i
i i
i
i i
i
Forma R
Forma T
Modelo MWC
a: Concentracin normalizada de substrato, s/K
m


L: Constante alostrica: a mayor valor de L, mayor grado
de cooperatividad (positiva)

n: Nmero de sitios de fijacin de substrato
Suele haber fenmenos de modificacin covalente de
enzimas en la respuesta celular a seales qumicas:

1. Neurotransmisores
2. Hormonas
3. Factores de crecimiento
4. Estmulos morfogenticos y de diferenciacin
5. Muerte celular programada (apoptosis)
6. Estmulos antignicos
7. Luz y otros agentes fsico-qumicos
Formas de modificacin covalente
Fosforilacin: Protein kinasas
Sobre residuos de Ser, Thr y Tyr
Ser
ATP
ADP
Ser
C
N
C
C
N
C
C
N
CH
2
OH
O
H
R
H
O
R'
H
H
H
H
C
N
C
C
N
C
C
N
CH
2
O
O
H
R
H
O
R'
H
P O
-
O
O
-
H
H
H
Formas de modificacin covalente
Defosforilacin: Protein fosfatasas
Sobre residuos previamente fosforilados: Ser-P, Thr-P, Tyr-P
Ser
Ser
C
N
C
C
N
C
C
N
CH
2
OH
O
H
R
H
O
R'
H
H
H
H
C
N
C
C
N
C
C
N
CH
2
O
O
H
R
H
O
R'
H
P O
-
O
O
-
H
H
H
H
2
O
P
i
Formas de modificacin covalente
Adenilacin: Sistema de la Glutamina sintetasa
Tyr
O
OH OH
N
N
N
N
H
2
N
C
N
C
C
N
C
C
N
O
H
R
H
O
R'
H
CH
2
O P
O
O
-
O CH
2
H
H
H
Formas de modificacin covalente
ADP-ribosilacin: acta NAD+ como donador del
grupo ADP-ribosa
H
H
H
O
OH OH
N
N
N
N
H
2
N
+
C
N
C
C
N
C
C
N
O
H
R
H
O
R'
H
NH
C
NH
2
N
O
OH OH
CH
2
O P O P O CH
2
O O
O
-
O
-
H
Formas de modificacin covalente
Rotura proteoltica:
Proteinasa
especfica
+
N C
N N C C
Zimgeno
Enzima activada
La mayora de las seales qumicas operan sobre un receptor
situado en la parte externa de la membrana.

Al operar sobre este receptor determinan la aparicin en el
interior celular de un segundo mensajero, que desencadena la
respuesta celular a la seal.
Concepto de Segundo Mensajero
Algunos segundos mensajeros:

- Nucletidos cclicos: cAMP, cGMP
- Ca++
- Diacilglicerol
- Inositolfosfatos
- xido ntrico, etc.
R R
Efector
E I
X
P
I E
O
H
H
OH
OH
H
H
H
CH
2
OH
O
HO
O
H
H
OH
OH
H
H
H
CH
2
OH
O
O
H
H
OH
OH
H
H
H
CH
2
OH
O
....
+
O
H
H
OH
OH
H
H
H
CH
2
OH
HO
O P
O
O
-
O
-
O
H
H
OH
OH
H
H
H
CH
2
OH
O
OH
O
H
H
OH
OH
H
H
H
CH
2
OH
O
....
P
i

Glucgeno (n)
Glucgeno (n-1)
Glucosa-1-fosfato
Glucgeno fosforilasa
Subunidad de la glucgeno fosforilasa
Fosforilasa b
2 ATP
2ADP
Fosforilasa a
Fosforilasa
kinasa, activa
Glucgeno
Glucosa-1-fosfato
Fosforilasa
kinasa, inactiva
Protein kinasa
activa (2C)
Protein kinasa
inactiva (R
2
C
2
)
4 cAMP
(cAMP)
4
R
2
Activacin de la fosforilasa
El cAMP (AMP cclico) desencadena la activacin
de la fosforilasa
O
CH
2
N
N
N
N
NH
2
OH OH
O P O P O P
-
O
O O O
O
-
O
-
O
-
O
N
N
N
N
NH
2
OH
O
P
O
O
-
O
ATP
cAMP
Adenilato
ciclasa
Formacin de cAMP
a partir de ATP
+
Protenas G
R
b
g
a
GDP
b
g
a
GTP
L
AC
a
GTP
b
g
ATP cAMP
a
GDP
Activacin de la
Adenilato ciclasa
R L
G
a
AC cAMP PKA FK F
O
N
N
N
N
NH
2
OH
O
P
O
O
-
O
O
CH
2
N
N
N
N
NH
2
OH OH
O P
-
O
O
O
-
cAMP
fosfodiesterasa
Metilxantinas
(p.e. cafena)
-
cAMP
Protein kinasa A
Glucgeno
Fosforilasa
Protein
fosfatasas
cAMP
fosfodiesterasa
Glucgeno
sintetasa
-
+
+
-
-
Protein kinasas


1. Protein kinasas A (Activadas por cAMP)

2. Protein kinasas G (Activadas por cGMP)

3. Protein kinasas A (Activadas por DAG)

4. Protein kinasas dependientes de Ca
++
-Calmodulina

5. Protein tirosin kinasas (Factores de crecimiento, etc.)
Activaciones proteolticas
N
C
C
N
pH < 5
Pepsingeno
Pepsina
Activacin del
pepsingeno
Fibringeno (I)
Monmero
de fibrina (Ia)
Polmero
de fibrina
Trombina (IIa)
Protrombina (II)
Protrombinasa
Precursores,
va intrnseca
Precursores,
va extrnseca
Fase 1
Fase 2
Fase 3
VII VIIa
X Xa
V Va
Ca
++
Complejo
Protrombinasa

Va extrnseca
XII XIIa
XI XIa
IX IXa
VIII VIIIa
X Xa
V Va
Complejo
protrombinasa
Va intrnseca
Ca
++
Ca
++
Trombina
+
S
S
Va
Xa
PLP
Ca
++
Complejo
protrombinasa
S
S
H
L
Trombina
Protrombina
Aa
Bb
g
+
Monmero de fibrina
A
B
Fibrinopptidos
Aa
2
Bb
2
g
2
a
2
b
2
g
2
Fibringeno
Trombina
Fragmento C-terminal
del fibringeno
Aa
Bb
g
-
+
-
-
+
-
+
-
-
+
-
-
+
-
+
- -
+
-
-
+
-
-
+
- -
+ +
-
-
-
-
+
-
+
-
-
+
-
-
+
-
+
- -
+
-
-
+
-
-
+
- -
+ +
-
-
-
Monmero de fibrina
Fibrina (Unin no covalente)
CH
NH
2
HOOC
CH
Lys
Glu
CH
NH
OC
CH
Lys
Glu
Factor XIII
(estabilizador
de la fibrina)
Formacin de
enlaces covalentes
en la fibrina