Prueba bioqumica

Las pruebas bioqumicas consisten en distintos

test qumicos aplicados a medios biolgicos, los
cuales, conocida su reaccin, nos permiten
identificar distintos microorganismos presentes.
Su sistema de funcionamiento generalmente
consiste en determinar la actividad de una va
metablica a partir de un sustrato que se
incorpora en un medio de cultivo y que la
bacteria al crecer incorpora o no.
Prueba bioqumica
Para realizar las pruebas bioqumicas se dispone
de mltiples medios, los cuales se deben aplicar
de acuerdo a las exigencias del microorganismo
en estudio.
Citrato de Simmons
Medio utilizado para la diferenciacin de
enterobacterias, en base a la capacidad de usar
citrato como nica fuente de carbono y energa.
Caractersticas del medio
Medio preparado: Verde.


Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico
es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de
sodio es la nica fuente de carbono. Ambos
componentes son necesarios para el desarrollo
bacteriano. Las sales de fosfato forman un
sistema buffer, el magnesio es cofactor
enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el
balance osmtico, y el azul de bromotimol es el
indicador de pH, que vira al color azul en medio
alcalino.
Fundamento
El medio de cultivo es diferencial en base a que
los microorganismos capaces de utilizar citrato
como nica fuente de carbono, usan sales de
amonio como nica fuente de nitrgeno, con la
consiguiente produccin de alcalinidad.
Fundamento
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas
bacterias poseedoras de citrato permeasa, a
travs del ciclo del cido tricarboxlico. El
desdoblamiento del citrato da progresivamente,
oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia
de un medio alcalino, da origen a cidos
orgnicos que, al ser utilizados como fuente de
carbono, producen carbonatos y bicarbonatos
alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es
indicativo de la produccin de citrato permeasa.
Positivo: Crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
Negativo: El medio permanece de color verde debido a
que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de
color.
Anlisis de resultados
El Agar-hierro-triple azcar es un medio de cultivo rojo
que gracias a su composicin es uno de los medios de
cultivo ms empleados para la diferenciacin
de enterobacterias.

Composicin:
Agar hierro y triple azcar
(TSI)
El agar TSI es uno de los ms usados para ver la
fermentacin de carbohidratos en la familia
Enterobacterias. Se pueden tener varias posibilidades de
fermentacin de acuerdo a las caractersticas
metablicas del microorganismo.
Fundamento
Los microorganismos que fermentan solo la glucosa
provocan en este medio una reaccin alcalina en la
superficie (roja) sobre un fondo cido (amarillo) debido a
que realizan una degradacin aerbica de la glucosa en la
superficie, convirtiendo el piruvato en agua y dixido de
carbono.
Fermentacin de glucosa
Despus de 18 a 24 horas de incubacin como la
concentracin de glucosa es baja (0.1%), los
microorganismos empiezan a utilizar las peptonas que se
encuentran en el medio, causando la liberacin de
amoniaco y produciendo un pH alcalino (rojo) gracias al
rojo de fenol que tiene el medio como indicador de pH.
En el fondo, como no hay oxgeno, se realiza una
degradacin anaerbica y el piruvato se convierte en
lactato con lo cual el pH disminuye quedando el pH cido
(amarillo).
Fermentacin de glucosa
Algunos microorganismos tienen la facultad de fermentar
la glucosa y la lactosa resultando una reaccin cida en la
superficie (amarilla) y cida en el fondo (amarilla, a/a).
En este caso despus de 18 a 24 hrs como la
concentracin de lactosa es alta (1.0%), no se ha
utilizado completamente y la acidez persiste tanto en el
fondo como en la superficie. En el caso de usar sacarosa
la reaccin sera la misma.
Fermentacin de lactosa y/o
sacarosa
Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa
que la bacteria es productora de gas.
En el caso de no utilizar ninguno de los carbohidratos
presentes (glucosa, lactosa y sacarosa), lo que se usara
seran las peptonas, ya sea aerbicamente o
anaerbicamente. Slo utilizndolas aerbicamente
dara una superficie alcalina (roja, k) sobre un fondo sin
cambio (sc) o sea k/sc. Si las usara aerbicamente dara
una superficie alcalina (rojo) sobre fondo alcalino (rojo) o
sea k/k.
En este medio tambin es posible detectar la produccin
de gas por la formacin de burbujas dentro del medio, y
la produccin de cido sulfhdrico, el cual reaccionar
con un indicador con base de fierro dando un color negro
debido al sulfuro de hierro formado.

Sin utilizacin de las anteriores
cido/cido (A/A): Pico de flauta cido y fondo cido que
indica fermentacin de glucosa, lactosa y/o sacarosa.
Alcalino/Alcalino (K/K): Reaccin tpica de los bacilos
gram-negativos no fermentadores de glucosa ni lactosa.
Alcalino/cido (K/A): Pico de flauta alcalino y fondo cido
caracterstico de un no fermentador de lactosa.
Produccin de H
2
S: Coloracin negra a travs del medio.
Produccin de gas: Burbujas, rupturas o desplazamiento
del medio.

Anlisis de resultados
Reacciones que se producen en el medio
TSI
A) A/A H2S: Indica fermentacin de
glucosa, lactosa y/o sacarosa y
produccin de H
2
S;
B) B) K/A: Reaccin caracterstica de un
no fermentador de lactosa.
C) K/K: Reaccin tpica de los bacilos gram-
negativos no fermentadores de glucosa ni
lactosa.
D) K/A H2S: Indica fermentacin de glucosa y
produccin de cido sulfhdrico, cuando se
observa esta reaccin en una bacteria oxidasa
negativa, se presume que el fondo del tubo es
cido y el color amarillo es enmascarado por la
produccin de H
2
S
Referencias
Felipe Higuita. (S.F.). Triple sugar iron (TSI) Kliger's iron agar (KIA).
Extrado el 7 de Octubre del 2014 desde
http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/file.php/743/Bacte
riologia/Pruebas_de_laboratorio/Triple_sugar_iron.html
Guin de practicas. (2008). Extrado el 7 de Octubre del 2014 desde
https://cv2.sim.ucm.es/moodle/file.php/21298/Practicas/PracMicro
07-08.pdf
Pruebas bioqumicas para la identificacin de enterobacterias. (S.F.).
Extrado el 7 de Octubre del 2014 desde
http://microdonto.files.wordpress.com/2009/04/pruebas-
bioquimicas.pdf
Simmons citrato Agar. (S.F.). Extrado el 7 de Octubre del 2014 desde
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/simmonscitagar.
htm

Integrantes
Guillermo Iran Jimnez Lpez
Carlos Eduardo Camacho Gonzlez
Jos Marcelo Negrete Aldana
Jorge Antonio Sonora Estrada