Enterobactrias e outras bactrias

Gram gram negativas

Laboratrio Clnico
4o ano Biomedicina

Enterobacteriaceae
maior e mais heterognea famlia de bactrias Gram negativas de importncia
clnica
- representam 80% ou mais de todos os Gram negativos isolados na rotina
microbiolgica
- so responsveis por cerca de 70% das infeces urinias e 50% das
septicemias
Constituda por 27 gneros / 102 espcies / 08 grupos indefinidos.

Independente da complexidade, mais de 95% das amostras implicadas em caso

clnicos so colocadas em 25 espcies

E. coli

Klebsiella sp

Enterobacteriaceae
Definio

Bacilos Gram negativos

Fermentadores da glicose
Oxidase negativa e catalase +
Ausncia da atividade da citocromo-oxidasediferencia de outros gramnegativos
Mveis / imveis
Crescem em meios comuns - meios bsicos (caldo peptona) - meios ricos
(gar sangue, gar chocolate e CLED) meios seletivos (Mac Conkey)
Reduzem os nitratos a nitritos
Habitat
Plantas, solo, gua, intestino do homem e animais

Enterobacteriaceae

Nomenclatura e Classificao
Mtodos Fenotpicos
Moleculares novas espcies
reclassificao

Classificao
Gneros ( dezenas)
Espcies ( centenas )
biotipos e sorotipos
Complexos

Enterobacteriaceae

Enterobacteriaceas com importncia mdica

Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Proteus mirabilis e P. vulgaris
Enterobacter spp
Salmonella typhi e S. paratyphi A e B
Salmonella enteritidis e S. cholerae suis
Shigella spp
Yersinia pestis e Y. enterocolitica
Citrobacter spp
Serratia

Grupos
1- Escherichia
2- Klebsiella-Enterobacter-Serratia
3- Proteus-Morganell-Providencia
4- Citrobacter
5-Shigelas
6 Salmonelas
7- Outras enterobacteriaceae

Identificao de Enterobactrias
Classificao - patogenia

- Enteropatgenos
- Infeces nosocomiais - espcies importantes
- Outras espcies - raras em material clnico
isoladas em : meio ambiente
plantas
animais

Famlia Enterobacteriaceae
Patogenia

Enterobactrias - principal componente da flora intestinal normal

do homem.

Infeces -intestinal, feridas e trato urinrio

Abcessos, pneumonia, meningites
Infeces nosocomiais

Famlia Enterobacteriaceae
Patogenia
Infeces intestinais
Caractersticas
normalmente na comunidade
DTA doena transmitida por alimento
surtos / casos isolados
hospitalar
Patgenos entricos clssicos
Salmonella spp
Shigella spp
E.coli - categorias diarreiognicas
Yersinia enterocolitica

Famlia Enterobacteriaceae
Patogenia

Infeces extra-intestinais
Comunidade
Hospitalar
Qualquer espcie
Fatores de risco:
Paciente
Veculos de transmisso
Alimentos contaminados

Espcies mais comuns

Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Klebsiella oxytoca
Proteus mirabilis
Enterobacter spp
Salmonella ( sorotipos)
Serratia marcescens
Citrobacter spp
Providencia spp

Famlia Enterobacteriaceae
ISOLAMENTO E IDENTIFICAO DE ENTEROBACTRIAS
Crescem bem nos meios comuns e meios seletivos para BGN
( 18 a 24h 1 mm de dimetro).
A enterobactria sempre cresce nos meios ricos (gar sangue, chocolate), bem como nos meios
seletivos: gar Mac Conkey e Salmonella-Shigella
Os Gram positivos como regra no crescem em gar Mac Conkey e Salmonella-Shigella, exceto os
enterococos que podem crescer
No gar Mac Conkey e Salmonella-Shigella, alm das enterobactrias e dos enterococos, podem
crescer bactrias no fermentadoras e Candida

Secrees: gar sangue e Mac Conkey

Lquidos nobres e bipsias: gar Chocolate e Mac Conkey
Fezes: Mac Conkey e Salmonella-Shigella
Urina: CLED ou gar sangue e Mac Conkey, etc.

Famlia Enterobacteriaceae
ISOLAMENTO E IDENTIFICAO DE ENTEROBACTRIAS

1- Exame macroscpico da cultura:

Aspecto morfolgico das colnias
Tempo de crescimento e tamanho da colnia
Observar pureza da cultura
2-Exame microscpico da cultura:
Gram: tamanho, morfologia, reao tintorial, etc

Aspecto das colnias

Agar MacConkey

Aspecto das colnias

Salmonella.

E.coli

E.cloacae

Famlia Enterobacteriaceae

Identificao Bioqumica ( cultura pura)

Principais provas para a identificao das enterobactrias de importncia clnica

1. Fermentao da glicose
2. Fermentao da lactose
3. Motilidade
4. Utilizao de citrato
5. Descarboxilao da lisina
6. Produo de sulfeto de hidrognio (H2S)
7. Produo de gs (CO2)
8. Oxidase
9. Produo de indol
10. Produo de urease
11. Produo de fenilalanina desaminase ou opo triptofanase
12. Produo de gelatinase ou opo DNAse

Famlia Enterobacteriaceae

Identificao Bioqumica ( cultura pura)

Provas complementares de Identificao

Fermentao de outros carboidratos: sacarose, maltose, arabinose, salicina,

dulcitol, manitol, etc.
Utilizao de aminocidos: arginina e ornitina
Hidrlise da esculina, etc.
Utilizao de acetato
Provas teis, mas pouco utilizadas: vermelho de metila (VM), voges-proskauer
(VP), crescimento em KCN, tartarato de jordan e lipase.

Esquemas de identificao - determinao dos gneros e espcies mais isolados na

clnica, utilizando provas caractersticas de cada gnero e espcie.
Critrios para identificao - facilidade de execuo, facilidade de interpretao, custo,
rapidez para leitura

Famlia Enterobacteriaceae

Identificao Bioqumica ( cultura pura)

Meios presuntivos
IAL (Pessoa e Silva)
EPM-MILI
TSI

Famlia Enterobacteriaceae

Identificao Bioqumica ( cultura pura)

Meios presuntivos
IAL (Pessoa e Silva) - Instituto Adolfo Lutz triagem de enterobactrias 9 provas
em apenas um tubo de ensaio: indol (tampa), fermentao da sacarose e glicose e
produo de gs, fenilalanina, uria, H2S, Lisina, Motilidade
Baseado nestas provas possvel identificar as seguintes bactrias:
- E. coli
- Shigella (indol positiva)
- Shigella (indol negativa)
- Enterobacter aerogenes
- Klebsiella pneumoniae
- Klebsiella spp. (sacarose
negativa)

- Enterobacter cloacae
- Providencia spp. (uria positiva)
ou Morganella morganii
- Providencia spp. (uria negativa)
- Proteus mirabilis
- Proteus vulgaris
- Salmonella spp.

- Salmonella typhi
- Citrobacter freundii
- Serratia marcescens (provas
complementares)
- Vibrio cholerae
- Vibrio spp.
- bactrias no fermentadoras

Meio IAL - vantagem = prtico para inoculao e de baixo custo

- desvantagem = dificuldade de interpretao de tantas provas (experincia)

Famlia Enterobacteriaceae

Identificao Bioqumica ( cultura pura)

Meios presuntivos
EPM-MILI-Citrato - mesma combinao de reaes do meio IAL ou Rugai (fenilalanina,
fermentao da glicose, gs, H2S, uria), separados em 2 tubos, passando a verificao do
indol da tampa do IAL, para o meio MILi aps adio do reativo de Kovacs

Famlia Enterobacteriaceae

Identificao Bioqumica ( cultura pura)

Famlia Enterobacteriaceae

Identificao Bioqumica ( cultura pura)

Meios presuntivos
TSI Trplice Aucar Ferro - O meio de TSI inclinado em bico de flauta, de cor
vermelho-cereja e deve ser inoculado por picada central at o fundo, seguido de
espalhamento na superfcie e incubao durante 18-24h a 35oC
a) Prpura/amarelo (pice prpuro e base amarela) = fermentao apenas da glicose
(lactose e sacarose negativas)
b) Amarelo/amarelo (pice e base amarelos) = fermentao da glicose + lactose e/ou
sacarose (2 ou 3 acares)
c) Presena de gs (CO2) = bolhas ou meio fragmentado
d) H2S positivo = presena de precipitado negro

Famlia Enterobacteriaceae

Identificao Bioqumica ( cultura pura)

Famlia Enterobacteriaceae
Identificao Bioqumica ( cultura pura)

Famlia Enterobacteriaceae

Identificao Bioqumica
Provas complementares:
Fermentao de acares
Pesquisa de enzimas
DNase
gelatinase,lipase

Gram

Srie completa - 47 testes

vermelho de metila (VM)

produo de acetilmetilcarbinol a partir dextrose - voges-proskauer (VP)

Oxidase

VM e VP

Famlia Enterobacteriaceae
Reao de VM e VP
vermelho de metila (VM), voges-proskauer (VP),

Enterobactrias VP+

Enterobactrias VP -

Enterobacter
Klebsiella
Serratia

Maioria das espcies dos outros Gneros

Salmonella
Shigella
E.coli
Proteus
Morganella
Providencia
Citrobacter
Kluyvera

Famlia Enterobacteriaceae
Identificao
Gram da colnia isolada sempre fazer o Gram para evitar enganos de interpretao
(diferenciar cocos de bacilos, Gram positivos de Gram negativoe e leveduras).
Prova da oxidase indicada para detectar e/ou diferenciar o grupo Aeromonas,
Plesiomonas, Vibrio que tambm so fermentadores.
Prova do metabolismo fermentador triagem utilizando os meios de OF glicose
(quando suspeitar de no fermentador), TSI (Trplice Aucar Ferro) ou EPM (Rugai sem
sacarose), para enterobactrias.
Srie bioqumica complementar sempre necessria para caracterizar gnero e espcie.
O nmero de provas vai permitir maior ou menor discriminao
A fonte de informao mais utilizada baseia-se na tabela organizada por Farmer (1991) contando
com 47 provas, e os respectivos percentuais de positividade para 28 diferentes gneros e 121
espcies de enterobactrias. Os principais gneros e espcies de importncia clnica podem ser
caracterizados com >95% de acerto com poucas provas
Valores positivos ou negativos referem-se a 80% ou mais de definio
PB (padro bioqumico) = probabilidade terica da bactria em questo; apresentar o padro
bioqumico analisado (Exemplo: PB para Proteus vulgaris em relao s provas, H2S +(98%) FA
+(95%) Indol + (98%) (multiplicar os percentuais de ocorrncia)= 92%
PB baixo significa ter outro padro mais frequente

Fluxograma identificao bacilos gram negativos

BGN
Lac +

Oxidase
Lac -

gar Mac Conkey

IAL

IAL
E.coli
Enterobacter
Klebsiella
Kluyvera
Citrobacter
+

Enterobacter
Klebsiella
Kluyvera
Citrobacter

VP +

Shigella
Salmonella
Serratia
Proteus
Providencia
Morganella

Salmonella
Serratia
Proteus/Prov.(V)
+

Cit. Simmons
Cit. Simmons
-

E.coli

Shigella
Morganella

Enterobacteriaceae
Identificao Sorolgica

Importncia dos Ag da parede celular

Enterobactrias Antgeno completo denominadas lisas

Que no contem rugosas

LPS

Antgeno somtico O polissacardico

Polissacrido do core (comum a todas)
Lipidio A
Antgeno K (Kapsel) = cpsula, proteico ou
polissacardico
Antgeno H = protenas flagelares (flagelina).
Enterobactrias mveis
A classificao antignica das Enterobactericeas baseia-se
na presena dos Ags O, K, e H e detecta-se por aglutinao
com soros especfcos

Famlia Enterobacteriaceae
Identificao Sorolgica
Sorotipos so divises baseadas no relacionamento antignico
Biotipos so amostras do mesmo sorotipo que diferem em caractersticas bioqumicas
Em atividades de rotina de Bacteriologia Clnica, a identificao ou confirmao
sorolgica feita apenas com germes comprovadamente patognicos e de importncia
epidemiolgica como Salmonella spp., Shigella spp., Escherichia coli Yersina
enterocolitica
Gota do anti-soro (coelhos: polivalente Ac contra vrias enterobactrias
monovalente Ac individuais contra antgenos O, K e H
Suspenso densa (leitosa) bactria
salina 0,85%

Aglutinao

Teste positivo

Gnero:Escherichia

Compreende as espcies E. coli, E. hermanii, E. fergusonii, E.vulneris e E.

blattae. Seis so as categorias de E. coli enteropatognicas: E. coli
enteropatognica clssica (EPEC), E. coli enterotoxignica (ETEC), E. coli
enteroinvasiva (EIEC), E. coli enterohemorrgica (EHEC) E. coli
enteroaderente (EAEC) e E. coli enteroagregativa (EAggEC).
Trato unrinrio , doenas diarricas , sepse , meningite

E. coli
Identificao Sorolgica

Gnero: Salmonella

Bactria do gnero Salmonella vista por microscopia eletrnica.

Bactria do gnero Salmonella vista por

microscopia eletrnica.

Febre entrica (febre tifide), bacteremia com leses focais , enterocolite

Salmonella
Identificao Sorolgica
a) Anti-Salmonella polivalente somtico (Grupos A,B,C,D,E)
b) Anti-Salmonella somtico, Grupo D (S. typhi)
c) Anti-Salmonella, anti Vi

Gnero: Klebsiella

Trato respiratrio pneumonias (3%)

Gnero:Enterobacter,Citrobacter Serratia,Providencia
Esto associadas a infeces hospitalares

Observa-se resistncia a mltiplos antibiticos

Enterobacter capsulas pequenas trato intestinal, urinaria e sepse
Serratia pneumonia, bacteremia e endocardite (pacientes viviados em narcotios)

Gnero: Yersinia
Composto de no mnimo sete espcie
Yersinia Pestis

Agente causador de uma das doenas mais devastadora na histria

Peste urbana e peste silvestre
Peste bubnica e peste pneumnica

Yersinia enterocoltica
Causam enterocolite
gastroenterite diarria, febre e dor abdominal

Yersinia enterocoltica

Yersinia Pestis

Image Courtesy: Wyoming Animal

Health and Disease Information Network

gar MacConkey

Gnero: Proteus
Proteus mirabilis

Associadas a infeco urinrias

As cepas produz grandes
quantidades de urease que
degrada a uriacom Co2 e NH3
eleva o Ph da urina facilitando
a formao de clculos renais

Tratamento

Escherichia coli e Proteus mirabilis: so suscetveis a vrios antibiticos

A maioria das enterobactrias so sensveis a cefalosporina,
aminoglicosdeos, tetraciclinas, cloranfenicol, cotrimoxazol e aos derivados
de quilnicos
Proteus,Providencia e Serratia resistentes a polimixinas
Klebsiella,Enterobacter e Serratia resistencia a ampicilina

Preveno e Controle

Infeco endgena difcil de ser controlada

Evitar o uso irrestrito de antibiticos-> resistncia bacteriana
Infeco exgenamais fcil controle
Eficaz com educao e introduo de procedimentos adequados de controle de
infecao
p.ex.: lavar bem as mos
E eliminao de roupas sujas em meio com surto identificado

Bastonetes Gram negativos no fermentadores

bacilos Gram negativos classificados como no fermentadores (BNFs) so
microrganismos aerbios, no esporulados, que se caracterizam pelo fato de serem
incapazes de utilizar carboidratos como fonte de energia atravs de fermentao,
degradando-os pela via oxidativa

A maioria dos laboratrios de microbiologia clnica no realiza provas de

identificao desses microrganismos visto a pouca incidncia em amostras
ambulatoriais
A caracterizao importante nos casos de infeco hospitalar , embora a incidencia
seja pequena, mas esses microrganismos apresentam resistncia elevada a vrios
antibiticos e so capazes de causar infeces graves

Bastonetes Gram negativos no fermentadores

BNFs de importncia clnica

Bastonetes Gram negativos no fermentadores

Testes para identificao de BNFs

Bastonetes Gram negativos no fermentadores

Testes para identificao de BNFs

Bastonetes Gram negativos no fermentadores

Testes para identificao de BNFs

Bastonetes Gram negativos no fermentadores

Testes para identificao de BNFs