IX Semana de Biologia da UFPB

Biossegurana e Rotina Laboratorial

Laboratrio de Gentica de Microrganismos - DBM

Microbiologia de Bactrias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacolgica

Tcnicas Microbiolgicas

Biossegurana
Microbiologia de Bactrias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacolgica

Biossegurana
Conjunto de procedimentos, aes,
tcnicas, metodologias, equipamentos e
dispositivos
capazes
de
eliminar
ou
minimizar riscos inerentes s atividades de
pesquisa,
produo,
desenvolvimento,
tecnolgico, ensino e prestao de servios,
que podem comprometer a sade do
homem, dos animais, do meio ambiente ou
a qualidade dos trabalhos desenvolvidos.

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Histrico
1941 Meyer e Eddie 74 casos de
brucelose associados a laboratrios
Concluso:
A manipulao de culturas, espcies ou inalao
de poeira contendo a bactria Brucella
eminentemente perigosa para os trabalhadores de
um laboratrio.

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Histrico
1949 Sulkin e Pike Pesquisa sobre
infeces associadas a laboratrios
222 infeces, sendo 21 fatais 12% por
acidentes relatados

1951 - Sulkin e Pike Nova pesquisa

1342 casos de infeces, sendo 72% das
infeces por brucelose, tuberculose, tifo e
infeco estreptoccica

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Histrico

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Histrico
1974 Classificao de Risco dos Agentes Etiolgicos

1980 Precaues universais na manipulao

de fludos corpreos

1984 Primeiro Workshop Brasileiro

de Biossegurana - Fiocruz

1995 Lei Brasileira de

Biossegurana Lei 897/95
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Histrico
1999 Fundao da Associao Nacional de
Biossegurana (ANBio)

1999 Primeiro Congresso Brasileiro de

Biossegurana

2000 Biossegurana como

discplina cientfica universitria

2001 Induo de aes em

biossegurana pelo CNPq
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Tipos de Riscos
Fsicos
Qumicos
Biolgicos
Acidentes e
Ergonmicos
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Tipos de Riscos
Fsicos

-Provocados por algum tipo

de energia;

Qumicos

- A caracterizao depende
do equipamento;
- Principais:

Biolgicos
Acidentes e
Ergonmicos

* Equipamentos que geram

calor ou chamas;
* Equipamentos de baixa
temperatura;
* Material radioativo

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Tipos de Riscos
Fsicos
Qumicos
Biolgicos

-Conhecimento das
substncias qumicas;
- Cuidados adequados
para o manuseio.

Acidentes e
Ergonmicos
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Tipos de Riscos
Fsicos
Qumicos

- Decorrentes da exposio
produtos de animais,
vegetais e microrganismos;
- Agentes microbiolgicos:

Biolgicos
Acidentes e
Ergonmicos

*
*
*
*
*

Grau de patogenicidade
Poder de invaso
Resistncia a esterilizao
Virulncia
Capacidade mutagnica

- Vias de contaminao.

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Tipos de Riscos
Fsicos
Qumicos
Biolgicos
Acidentes e
Ergonmicos

- Fatores que gerem

situaes de risco para a
integridade fsica e
moral;
- Fatores que possam
interferir nas
caractersticas
psicofisiolgicas.

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Classificao dos Microorganismos

Classe 2:
Risco individual moderado e baixo
risco para a comunidade.

Nvel de Segurana 2

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Uso de Barreiras
Equipamentos de Proteo Individual (EPI):
Proteo contra o contato com agentes
infecciosos, txicos ou corrosivos, calor
excessivo, fogo dentre outros.

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Microbiologia de Bactrias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacolgica

Uso de Barreiras
Equipamentos de Proteo Coletiva:
Proteo dos pesquisadores, do
ambiente e da pesquisa desenvolvida.

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Biossegurana
Manuseio de produtos biolgicos envolve:

Limpeza

Descontaminao

Desinfeco

Anti-sepsia

Esterilizao

Assepsia

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Esterilizao
Processos Fsicos:
Calor
Radiao
Filtrao

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Esterilizao
Processos Fsicos:

Radiao

- Calor mido (vapor sob

presso) Autoclave, maior
poder de penetrao e
reduo do nmero de
microrganismos.

Filtrao

- Calor seco - Incinerao,

flambagem ar quente (estufa)

Calor

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Esterilizao
AUTOCLAVE - Dispositivo selado que permite a entrada de
vapor sob presso.

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Esterilizao
ESTUFA - Calor seco
Ao: desnaturao das protenas microbiana

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Esterilizao
Processos Fsicos:
- Flambagem

Calor

Esterilizao de alas e
agulhas.

Radiao
Filtrao

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Esterilizao
Processos Fsicos:
Calor
Radiao
Filtrao

- Radiao eletromagntica
Exemplos:
microondas
radiao ultravioleta
raios X
raios
eltrons

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Esterilizao
Radiao ultravioleta Capela de Fluxo Laminar

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Esterilizao
Processos Fsicos:
Calor
Radiao

- Remoo dos
microrganismos de lquidos e
gases sensveis ao calor:

* Glicose
* Antibiticos

Filtrao

* Reagentes qumicos

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Esterilizao
Tipos de filtros:
A)

B)

C)

A) Filtro de profundidade
B) Membrana filtrante
C) Filtro de trilhas de nuleao
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Esterilizao
Filtrao:

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Esterilizao
Filtro de trilhas de nucleao - microscopia
eletrnica de varredura

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Esterilizao
Produtos Qumicos Desinfetantes e Esterilizantes

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Biossegurana
Atividades no laboratrio:
Planejamento das tarefas
Condies adequadas

Material necessrio
Maior segurana
Menor desperdcio
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Tcnicas Microbiolgicas

Rotina Laboratorial
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Cultivo e Manuteno
Meios de Cultura:
Mistura de nutrientes requeridos para a
sobrevivncia e crescimento dos
microorganismos em um sistema artificial.
Podem ser em caldo (lquido) ou gar
(slido).
Meios lquidos - teis para a obteno
de grande biomassa de microrganismos
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Cultivo e Manuteno
Meios quimicamente definidos:
(Meios com finalidades especiais)

Meios seletivos
Meios diferenciais
Meios de enriquecimento

Meios para anaerbios

Meios para o cultivo de bactrias (Geral-BHI)
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Mtodos de Cultivo
Inoculao:
Tcnica de esgotamento por estrias
Tcnica da semeadura em superfcie
Inundao
Diluio por extino
(Obteno de cultura pura, originada partir de uma
nica clula (UFC) A suspenso original da amostra diluda
seriadamente e semeiam-se amostras de cada diluio)
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Medida do Crescimento
Mtodo Quantitativo:
Avaliao do nmero de clulas - UFC/mL
Unidades Formadoras de Colnias por mL
ex.: Contagem celular microscpica ou eletrnica,
contagem em placa ou atravs de membrana filtrante.

Mtodo Qualitativo:
Avaliao do peso celular ou estimativa de
unidades de absorbncia da massa de clulas
em caldo ou suspenses (turbidez).
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Identificao dos Microorganismos

Caractersticas Culturais

Microscopia ptica

Morfologia Colonial

Caractersticas Metablicas

Caractersticas Morfolgicas

Caractersticas Fisiolgicas

Colorao simples

Caractersticas Antignicas

Colorao diferencial

Caractersticas patognicas

Colorao de Gram

Caractersticas genticas

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Estocagem
Conservao de Culturas Puras:
Conservao por um curto perodo (dias a
meses):

Armazenagem temperatura de refrigeradores (4C a

10C) - Repiques freqentes

Conservao por longos perodos:

Nitrognio lquido a -196C

Freezers a -70C/ -120C
Liofilizao congelamento a seco - viabilidade das
culturas por muitos anos - coleo de microrganismos como
referncia.
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Material:
Tubos de Cultura e Placas de Petri

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Material
Instrumentos para Transferncia de Culturas

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Obrigada!!!!!
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