TERAPIA GNICA: Un nuevo

enfoque de la terapetica
Nava Gmez Channtal Esther
Estudiante de Segundo ao.
Facultad de Medicina, UNAM.
Marzo de 2007

El objetivo principal de la siguiente presentacin es principalmente para

introducir al alumno de la carrera de Medicina de manera fcil y sencilla a las
bases y principios fundamentales de la Terapia Gnica, una nueva forma de
medicina teraputica basada en la manipulacin de material gentico que
promete ser el remedio a todas los padecimientos que aquejan al ser
humano.

TERAPIA GNICA

DEFINICIN: Es el proceso por el cual se inserta material gentico en una clula por
medio de vectores, con el fin de hacer que esta produzca una protena normal.
UTILIDAD: curar enfermedades unignicas
modificar totalmente el sistema inmune
La Terapia gnica se realiza con las siguientes acepciones:

somtica (tratamiento de las clulas enfermas),

germinal (para evitar la transmisin hereditaria de enfermedades)

perfectiva (manipula los genes para mejorar ciertas caractersticas)

eugnica (que busca mejorar cualidades complejas del individuo, tales como la
inteligencia).
Por lo tanto el propsito principal de la terapia gnica es:
Cambiar genotipo
para mejorar fenotipo

TERAPIA GNICA
VECTOR: Es aquel medio transportador que nos permitir insertar el material gentico de
inters en las clulas del paciente en cuestin.
Viral:

adeno, herpes, retro

TIPOS DE
VECTORES:
No viral:

liposoma
transferencia de genes mediante receptores
inyecciones de DNA desnudo
bombardeo con partculas de oro

A continuacin se describe de forma breve el funcionamiento de cada vector,

comenzaremos por los no virales y despus por los virales.

LIPOSOMA: funcionamiento en base a propiedades de carga elctrica.

-ADN a insertar (-) X fostatos de la doble hlice

-lpidos catinicos o liposoma (vector) (+)
-celula (-) X cido silico presente en su superficie

lpidos (+) + ADN (-)

Liposoma con ADN (+) + membrana celular(-)

Penetra ADN dentro del liposoma, el vector se une
a los fosfolpidos de membrana y se libera el ADN
Por lo tanto el DNA evita la degradacin por lisosomas celulares

cel

Liposoma se emplea en:

Tx. Fibrosis qustica
defecto gen CFTR que codifica protena que
mantiene libre de moco tubos areos de pulmones.
ADN a insertar: uno que codifique gen CFTR
liposoma catinico a utilizar: DC-chol/DOPE
Cl. diana: cl. tracto respiratorio.
R: se impide signos de inflamacin o necrosis en el tejido caractersticos
de la enfermedad.

Esquema donde se muestra diversos

tipos de lipidos catinicos utilizados
como vectores en la Terapia Gnica.

TRANSFERENCIA DE GENES MEDIANTE RECEPTORES: En este caso al ADN a

insertar se le adiciona un ligante (molculas reconocidas por receptores
especficos/tipo celular elegido) y un fusigeno para evitar su degradacin
por el lisosoma celular.
L

ADN + ligantes

ADN penetra X endocitosis

clula

L R

unin endosoma + lisosoma evitada por fusigenos

ADN entra al ncleo durante la divisin celular

TRANSFERENCIA DE GENES MEDIANTE RECEPTORES se emplea en: El tratamiento

de la hipercolesterolemia
problema de hipercolesterolemia: gen codificador de receptores LDL
ADN a insertar: Codificador de receptores para LDL
ligando: ASOR-PL
Receptor ASGPr (hgado)
R:
colesterol en suero sanguneo

Nota: Este mtodo a diferencia del liposoma va dirigido contra una clula
especfica por medio del reconocimiento ligando/receptor.

INYECCIONES DE DNA DESNUDO: Por este mtodo el ADN o ARN puro circular y cerrado
covalentemente es directamente inyectado dentro del tejido deseado.

BOMBARDEO DE PARTCULAS DE ORO:

1 plsmido de ADN revestido gotas de oro o tungsteno.
2 Estas partculas son aceleradas por una descarga elctrica y son " disparadas" hacia el
tejido.

Utilizado en: inyeccin directa en el msculo, del gen que codifica la protena de matriz del
virus influenza A para el Tx. de dicha enfermedad en el ratn.

VECTORES VIRALES
METODOLOGA:
Trasfieren
Gen a clula
Eucarionte

vectores

El DNA o RNA del vector

es cortado por enzimas de restriccin con el fin
de eliminar zonas patgenas e insertar en el lugar de estas el
gen de inters mdico

modificados

En ella INFECTAN : vector inicia mecanismos de trascripcin y traduccin de protenas

normales, pues sus protenas patgenas fueron reemplazadas por estas
anteriormente.
genoma vrico modificado
VECTOR VRICO
componentes

secuencias vricas esenciales

DNA de inters

estructura del virin

RETROVIRUS

- ARN de cadena sencilla como genoma viral (huesped x TI ADN)

- tres genes que codifican:
- gag, el grupo especfico de antgenos, protena de la cpsida y de la matriz
- pol , la transcriptasa inversa, proteasa, integrasa.
- env , protenas de la envoltura del virus
- LTRs promotor viral
- El genoma tambin incluye secuencias:
empaquetamiento del ARN vrico
corte y empalme entre donador y aceptor
ARNs mensajeros envueltos de forma separada.

Obtencin del Vector: retrovirus naturales se les reemplaza genes estructurales (gag, pol,
env), por uno o varios genes teraputicos deseados.

Expresin de genes terapeticos estar dirigida por el promotor retroviral (LTR)

estos vectores retrovirales (sin genes estructurales pero con LTR) pueden ser producidos
nicamente en unas lneas celulares de empaquetamiento, que son capaces de aportar
por transcomplementacin las protenas retrovirales estructurales que son necesarias para
la estructura del virin.
-desventaja: solo se integran en clulas que se replican
- ventaja: genes que se integran X retrovirus poseen expresin a largo plazo.

ADENOVIRUS
- Virus no desarrollados que contienen ADN lineal de cadena doble
- El ciclo de infeccin productiva comprende dos fases, la primera, la ms
importante para la sntesis del ADN, la segunda, durante la cual las protenas
estructurales y el ADN vrico son ensamblados en viriones.

-cuatro unidades transcripcionales, cada una con su promotor, codifican ARN

mensajero empalmados .
- La transcripcin es secuencial en la que los genes E1 se expresan pronto, y en
parte activan la transcripcin de otros genes tempranos .

-E1 rescata clulas de la quiescencia, dejndolas capaces de sintetizar ADN

vrico y protenas, usando predominantemente las funciones del cdigo
del hospedador.
- E2 : replicacin del ADN.

- E3 : detener los mecanismos de defensa de la clula hospedadora:

anular los efectos de (TNF) en clulas infectadas
bloquear el transporte de MHC I, reduce la presentacin de pptidos vricos.
- E4 regula fase primaria y secundaria del ciclo de vida vrico.

- Obtencin del Vector: se le elimina E1 y E3, crecen en cl. 293 que

aportaran por transcomplementacin los genes estructurales
necesarios para integrar el virin.
- Son capaces de infectar clulas quiescentes y persisten como DNAs no
integrado
- por su baja eficiencia es necesario utilizar virus a ttulos muy altos que
podran desencadenar respuesta inflamatoria inespecfica.
- la expresin de la protena es limitada a solo semanas o meses por la
falta de integracin del DNA, por esto se requiere readministracin
que puede desencadenar respuesta inmune y limitar su eficiencia.

ADENOASOCIADOS
-

Es un virus muy pequeo, muy simple, no autnomo, que contiene ADN lineal
de cadena sencilla. El virus requiere la coinfeccin con adenovirus u otros
para replicarse
rep, codifica protenas para replicacin e integracin.
cap, codifica tres protenas estructurales vricas.
Los extremos del genoma comprenden repeticiones terminales (TR) de cerca de
145 nucletidos
Vector: Contienen slo las secuencias vricas TR que bordean el ADN de inters.

HERPESVIRUS
-

ADN bicatenario lineal

Dos trozos de ADN bicatenario lineal unidos dando una estructura nica
llamadas molcula L y molcula S. Poseen en sus extremos secuencias repetidas
terminales ( TRL y TRS ) que son los sitios mediante los cuales permite unirse a
las dos molculas.

Vector: Contienen slo las secuencias vricas TRL TRS y DNA de inters.
Lleva grandes secuencias de ADN
Establece infecciones latentes de larga duracin en las cuales el genoma del
virus existe como un episoma con efectos no aparentes en la clula
hospedadora
El herpes virus puede ser una herramienta muy valiosa en clulas del sistema
nervioso central.
Cl. en reposo.

APLICACIONES DE LA TERAPIA GNICA

Distrofia muscular de Duchenne:

Gen codificador de BMP-7 transducido por adenovirus en el Tx. De la

osteoporosis.

-OTROS:
-dolor: La expresin en forma continua de preproencefalina en neuronas sensitivas
Tx. Dolor cncer, angina, artritis y neuropatas perifricas.
-Ateroesclerosis: administracin de genes que expresan el factor de crecimiento
endotelial vascular (revascularizar la pierna).
-Disfx. Erctil e infertilidad: adm. gen KL-2 que potencia formacin y crecimiento de cl.
Sertoli (ratas).
-Ceguera: adm. gen RPE95 x virus impide degeneracin y reanudacin de la actividad
elctrica de la retina (animales).
-Alzhaimer: adm. Gen del factor de crecimiento neurolgico (NGF) (monos viejos)
-Parkinson: gen de la descarboxilasa glutmica cida (GAD)/ cl. hperactivas del ncleo
subtalmico.
-Diabetes tipo I: gen PDX-1
hgado produce insulina (rata)

BIBLIOGRAFA:
Howe S, Thrasher AJ. Gene teraphy for inherited immunodeficiences. Curr
Hematol Rep 2003; 2 (4):328-34

http://www.uclm.es/profesorado/jjordan/terapia.pdf
"Delivering therapeutic genes-matching approach and aplication". Trends
in Biochemical Sciences. Mayo 1.993. Vol11.