UNIVERSIDAD

NACIONAL MAYOR DE
SAN MARCOS
(Universidad del Per; DECANA DE
AMERICA)

Facultad de Farmacia y
Bioqumica
BIOTECNOLOGIA BSICA

INMOVILIZACION DE ENZIMAS
Mg. Elena Benavides Rivera
LIMA - PERU

Obtencin y Purificacin de
Enzimas
Obtencin:
Bacterias, hongos o levaduras
seleccionados por screening
cultivados por fermentacin
Purificacin:
tcnicas cromatogrficas
tcnicas de concentracin.

Caracterizacin estructural:
Tcnicas electroforticas,
Ultra centrifugacin analtica,
Espectroscopia.
La caracterizacin funcional:
Estabilidad y actividad frente al pH y la
temperatura,
Estudios de especificidad de sustrato
Estabilidad en condiciones de trabajo .

INMOVILIZACIN DE ENZIMAS
VENTAJAS
Aumento de la estabilidad de la
enzima.
Reutilizacin
Posibilidad de disear un reactor

INMOVILIZACIN DE ENZIMAS
INCONVENIENTES
Alteracin de la conformacin
Heterogeneidad del sistema EnzimaSoporte
Perdida de Actividad
Biocatalizador ms caro que la E

BIORREACTORES
Tanque Agitado
Tanque Agitado y alimentacin
continua.
Lecho Fluidizado y alimentacin
continua.

BIORREACTORES
Lecho Empacado y alimentacin
continua.
Lecho Empacado, en continuo y con
reciclado
Tanque Agitado, alimentacin
continua y recuperacin por ultra
centrifugacin.

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METODOS DE INMOVILIZACIN
RETENCIN FSICA
Atrapamiento
Inclusin en Membranas
UNIN QUMICA
Unin a Soportes
Adsorcin
Enlace Covalente
Reticulado

SOPORTES
INORGNICOS
Naturales (arcilla, Slice, P. Pomez,
Bentonita, etc.)
Manufacturados (Ox. De Metales, vidrio,
almina, silicagel, cermicas)

ORGNICOS:
Polmeros Naturales
Polmeros Acrlicos
Otros

POLMEROS NATURALES
Celulosa

Agarosa

Almidn

Alginatos

Dextranos

Quitina

Agar agar

Quitosan

Polmeros
Sintticos:

Otros:
Alcohol polivinilo

Poliolefinas
(poliestireno)
P. Acrlicos
(Poliacrilatos,
poliacrilamida,
polimetacrilatos,
etc.

Poliamidas

Produccin

Inmovilizacin covalente de enzimas a soportes activados

Grupos aldehdo
(soporte activado)

O
C

Grupos amino
(lis reactivas)

NH2

pH 10

CH

C N
Reduccin

Intermedio Base de Schiff

Derivado enzimtico

Produccin

Estabilizacin de la enzima
por unin covalente multipuntual

A travs de:
varios residuos de la enzima
unidos por brazos cortos al soporte

Rigididizacin
3D

Reduce los cambios

conformacionales inducidos
por codisolventes, temperatura...

Produccin

CLEA
Cross Linked Enzyme Aggregates

A
PEG

Enzima Soluble

Glutaraldehyde

Enzima Precipitada

CLEA
B

PEG

Enzima Soluble+ PEI + DS

Glutaraldehyde

Enzima Precipitada

CLEA DP

MEDIO ACUOSO

fase homognea
fase heterognea

gaseoso
supercrtico
MEDIOS NO CONVENCIONALES

slido
orgnico

Medio Acuoso
Alta reactividad
Adecuado para reacciones hidrolticas
Adecuado para S y P hidrosolubles
Baja estabilidad trmica
Difcil recuperacin de enzima y productos

Medios no Convencionales
gaseoso
supercrtico
slido
orgnico

Biocatlisis en Medio Orgnico

reacciones termodinmicamente desfavorables en agua
hidrolasas en reacciones de sntesis
alteracin de estados de ionizacin de reactantes
solubilizacin de sustratos insolubles en agua
reduccin de inhibicin por S y P por particin
estabilizacin trmica
fcil recuperacin del biocatalizador
fcil recuperacin del producto
alteracin de especificidad del biocatalizador
alteracin de afinidad por S del biocatalizador
condiciones aspticas
baja actividad
mayor complejidad

S + H2O

P 1 + P2

proteasas

pptidos

lipasas

steres

glicosidasas

oligosacridos
glicsidos

Sistemas Macroheterogneos
acuoso-orgnico

Sistemas Bifsicos

acuoso-acuoso
E

transesterificacin de lpidos
produccin de alquilpoliglucsidos
cidos aril y ariloxipropinicos
produccin de aspartame
produccin de malil-tirosina

s as s
a
s as sa
a
lip ote sida
pr ico
gl

lpidos estructurados
glicosteres de cidos grasos
polister
saborizantes peptdicos
antibiticos -lactmicos
antibiticos glicosilados

Evolucin de la Biocatlisis
Enzimas en solucin en reacciones hidrolticas
Enzimas inmovilizadas en reacciones de
hidrlisis e isomerizacin
Reacciones degradativas
(escaso valor agregado)
Enzimas con requerimientos de CoE
Enzimas sin requerimientos de CoE
Reacciones de sntesis
(elevado valor agregado)

S
1

E
CoE

E-CoE

CoE
3

ECoE

CoE

Biocatalizador Biocatalizador
en solucin inmovilizado

Proceso discontinuo

Proceso continuo

Produccin

comb.
m. obra
enzima

comb.
m. obra
enzima

materia
prima.

Biocatalizador
Soluble

materia
prima.
Biocatalizador
Inmovilizado

AMINOACILASA