entificacin de interaccin de prote

Sistema doble hibrido

Julio Lozano
Elia Salazar

Mtodos comunes para analizar

interaccin protena-protena

El sistema del doble hbrido en levaduras (Yeast TwoHybrid System, Y2H)es una tcnica usada para
estudiar las interacciones protena-protena, que son
crticos en prcticamente todos los procesos celulares.

1989, Fields y Song

Lab. Ptashne

Y
AD

BD

X
BD

Y
AD

APLICACIONES
a) probar la interaccin de un par de
protenas,
que
utilizando
otros
criterios,
se
sospecha
que
interaccionan
b) definir el dominio o los aminocidos
que juegan un papel importante en la
interaccin de dos protenas, que se
sabe que interactan
c) tamizar bibliotecas para detectar
protenas que interaccionen con una

 Hace
posible
el
screening
de
interaccin entre muchas protenas
involucradas en los procesos biolgicos.
Identificar mutaciones que podran
afectar las uniones
Aunque
tiene
desventajas,
mecanismos moleculares de muchas
cascadas de sealizacin
han sido
definidas usando esta tcnica.

Ventajas
Tcnica in vivo
Rapidez
cDNA del gen
Interacciones sensibles

Semi-cuantitativo

Desventajas
Activacin automtica
Interferencia entre los
dominios fusionados
Modificaciones posttranscripcional
plegamiento puede
variar entre levaduras y
otros organismos
verificacin
independiente de la
interaccin
falsos negativos (64%)
y falsos positivos (50%)

Falsos negativos

Falsos positivos

Protena diana no
disponible en la biblioteca

No especfica
Protenas cebo o diana
que activan sin objetivo

Las protenas no se
pliegan correctamente o
interactan en las
condiciones utilizadas en
el screening
Las protenas de levadura
reportero fusionados o
anclajes pueden causar
impedimento estrico que
impide la interaccin
No permiten la activacin
de dominio

Especfica
Las interacciones entre
protenas que nunca se
expresan
juntos
en
clulas vivas
Las interacciones entre
protenas
que
normalmente
son
inhibidas por la presencia
de otras protenas /
condiciones
Sobreexpresin
de

Lneas 1 y 5
mostrando
actividad betagalactosidasa

Ejemplos de interaccin
AFCS ID
A001088
A000456
A001088
A001088
A001088

Bait Protein Name

Grb2
Calcium-dependent protein kinase II alpha
Grb2
Grb2
Grb2

Prey Nuc GI
3406752
3406752
3406752
3406752
3406752

Prey ID
A000381
A000381
A000381
A000381
A000381

Prey Nuc GI
6754977
6754977

Prey ID
A000070 Pak1
A000070 Pak1

Bait Protein Name

Integrin beta 1
Integrin beta 1
Ryanodine receptor type I
PI3 kinase p85 regulatory subunit (alpha)
Dbl
Integrin beta 1

Prey Nuc GI
53353
53353
53353
53353
53353
53353

Prey ID
A001678
A001678
A001678
A001678
A001678
A001678

AFCS ID
Bait Protein Name
A001775 PI3 kinase p85 regulatory subunit (alpha)
A001776 PI3K p85beta
A000381 BLNK

Prey Nuc GI
7305484
7305484
7305484

Prey ID
Prey Protein Name
A000834 Endophilin 2
A000834 Endophilin 2
A000834 Endophilin 2

AFCS ID
A000113
A000365
A000365
A000365
A001088
A001088

Prey Nuc GI
13878194
13878194
13878194
13878194
13878194
13878194

Prey ID
A000365
A000365
A000365
A000365
A000365
A000365

AFCS ID
A000605 cdc42
A000676 PIX/COOL
AFCS ID
A001220
A001220
A002108
A001775
A000754
A001220

Bait Protein Name

Bait Protein Name

Nck1
Bcap
Bcap
Bcap
Grb2
Grb2

Prey Protein Name

Blnk
Blnk
Blnk
Blnk
Blnk
Prey Protein Name

Prey Protein Name

Nucleoside diphosphate kinase B
Nucleoside diphosphate kinase B
Nucleoside diphosphate kinase B
Nucleoside diphosphate kinase B
Nucleoside diphosphate kinase B
Nucleoside diphosphate kinase B

Prey Protein Name

Bcap
Bcap
Bcap
Bcap
Bcap
Bcap