PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD

INTRODUCCION

Las pruebas de compatibilidad son una serie de

ensayos realizados sobre la sangre del presunto
donante y del presunto receptor de una transfusin
sangunea que tiene por objeto detectar cualquier
incompatibilidad existente entre ambas.

Este procedimiento incluye: la prueba cruzada

mayor y la prueba cruzada menor. En la mayor se
enfrentan los G.R. de donante con el suero del
receptor, y en la prueba cruzada menor se hace
reaccionar el suero del donante con los G.R. del
receptor.

OBJETIVO
El propsito de las pruebas de compatibilidad es
prevenir la transfusin de sangre incompatible.
Estas pruebas tienen como objetivos:

a) Garantizar que los G.R.

a transfundir sean ABO y

RH compatibles con el receptor.

b) Detectar anticuerpos en el suero del receptor que

estn dirigidos contra antgenos de los G.R. del
donante.

LIMITACIONES
*No garantizan la sobrevida normal de los G.R.
transfundidos.
*No previenen la inmunizacin del receptor.
*No detectan todos los errores en la clasificacin del
sistema ABO.
*No detectan errores en la clasificacin del factor Rh a
menos que el suero contenga anticuerpos anti-Rh.
*No previenen reacciones hemolticas tardas
secundarias a respuestas anamnsicas a antgenos
contra los cuales el paciente haba sido previamente
inmunizado.
*No detecta anticuerpos anti-leucocitarios, antiplaque- tarios o contra protenas del suero.
*No previenen reacciones febriles o alrgicas.

PROCEDIMIENTOS
1. Clasificacin del receptor:
* Determinar los grupos ABO / Rh. Si hay
discrepancias deben resolverse antes de iniciar las
pruebas cruzadas.
* Realizar la prueba de coombs directa en los G.R.
del receptor para detectar auto-sensibilizacin
eritroctica Si es positiva, facilita el dx. del caso,
si es negativa, no habr necesidad del empleo del
autocontrol en la Prueba cruzada.
* Investigar en el suero la presencia de anticuerpos
irregulares, empleando clulas detectoras o clulas
pantallas .

2) Seleccin de la sangre adecuada para la transfusin

* Del refrigerador seleccionar la unidad de sangre a
transfundir de acuerdo al grupo ABO y Rh del
paciente.
* Separar uno de los segmentos sellados integrado a
la unidad de sangre y colocarlo en un tubo de vidrio e
identificarlos.
* En esta muestra, verificar los antgenos ABO y Rh.
No es necesario determinar sub-grupos u otros
antgenos, a menos que el receptor contenga
anticuerpos irregulares.

3) Realizacin de la Prueba cruzada

En la prueba cruzada mayor, se pretende detectar la
presencia, en el suero del receptor, Ac dirigidos
contra los G.R. del posible donante, lo cual
producira una destruccin prematura de stos y, al
menos un descenso del rendimiento de la perfusin
hemtica.
Vale sealar que si la prueba cruzada mayor es
importante para la transfusin, no menos lo es la
prueba de deteccin de anticuerpos, que algunos
autores la emplean como parte de la rutina del
estudio de compatibilidad.

ANTICUERPOS IRREGULARES
Anticuerpos irregulares son aquellos que estn
dirigidos contra grupos sanguneo que no se
determinan de una forma rutinaria.
Los aloanticuerpos irregulares son detectados, de una
forma ms precisa por el uso de paneles de hemates
fenotipados. Esto ltimo consiste en realizar la prueba
cruzada mayor pero sustituyendo los G.R. del donante
por G.R. del grupo O que expresan los antgenos ms
corrientes de los otros sistemas de grupos sanguneos.

METODOLOGIA
MATERIAL NECESARIO
Gradilla
Tubos de ensayo
Pipetas de 1.0 y 10 ml.
Bao mara
Centrfuga y reloj
REACTIVOS
Suero fisiolgico
Albumina bovina al 30 %
MUESTRA
Suero del receptor
Suspensin al 5 % de G.R. del donante, preferiblemente
lavados

TECNICA DE LA PRUEBA CRUZADA MAYOR

FASE I

1) Colocar en el tubo de 10 x 75 ml. dos gotas del suero

del receptor.

2) Agregar una gota del G.R. lavados suspendidos en

S.S. al 5 %, centrifugar.

3) Observar el sobrenadante para detectar hemlisis,

desprender del fondo del tubo las clulas para
observar aglutinacin. Anotar los resultados

FASE II

1) Agregar dos gotas de albmina bovina, mezclar, incubar

a 37oC durante 15 a 30 minutos.

2) Centrifugar. Observar el sobrenadante para hemlisis,

desprender suavemente el botn de clulas del fondo del
tubo y anotar resultados.
FASE III
1)Lavar cuatro veces con S.S. para realizar Coombs
indirecto.: agregar dos gotas del reactivo antiglobulina
poliespecfico y mezclar. Centrifugar, ver aglutinacin.
2)Agregar una gota
de clulas control de coombs si la prueba es negativa:
centrifugar, leer, anotar resultados. Esta prueba debe ser +,
de lo contrario resultados son invlidos. Repetir la

INTERPRETACION
Existe compatibilidad si no se observa hemlisis o
aglutinacin en ninguno de los pasos de la prueba.
El Autocontrol
Es una prueba que se realiza simultneamente con la
prueba cruzada. En un tubo se coloca dos gotas del
suero del receptor + una gota de G.R. del mismo
receptor, y se siguen los mismo pasos que la prueba
mayor.
Interpretacin: Permite detectar una prueba de
Coombs directa positiva, as como la presencia de
roleaux u otras anormalidades que pueden causar
problemas en la interpretacin de la P. cruzada mayor.

PRUEBA CRUZADA MENOR

Es el procedimiento inverso de la prueba cruzada mayor,
en donde las clulas de receptor se ponen en contacto
con el suero del donante.
No es necesario realizarla si se han investigado
anticuerpos irregulares en el suero del donante
conjuntamente con el procedimiento de clasificacin del
ABO / Rh

PRUEBAS CRUZADAS
IMCOMPATIBLES

INTRODUCCION
La mayora de las pruebas de compatibilidad no
muestran discrepancias y las sangres cruzadas son
clasificadas como serolgicamente compatibles.
Sin embargo, ocasionalmente se presentan
incompatibilidades que deben resolverse prontamente.
Antes de iniciar el trabajo de laboratorio para la
resolucin serolgica de la incompatibilidad, es
importante hacer una evaluacin de la Historia Clnica
que incluya:

HISTORIA CLINICA
Diagnstico: Las discrepancias encontradas a menudo
reflejan una condicin secundaria relacionada con el
proceso primario por lo que es necesario obtener una
informacin ms precisa de la etiologa para poder
establecer una correlacin entre los hallazgos serol
gicos y la enfermedad del paciente.
Antecedentes: Suministran informacin valiosa: edad,
sexo, raza, intervenciones quirrgicas, embarazos.
Antecedentes transfusionales, siendo importante los
anticuerpos adquiridos de forma pasiva.
Medicamentos.-

CORRELACION ENTRE EL PROBLEMA

SEROLOGICO Y CONDICIONES CLINICAS
Coombs directo positivo

Anemias hemolticas
auto e aloinmune
Poliaglutinacin ( Ag. T )Spsis
Antgeno B
adquirido
Inf. Bacterianas, Ca.
Colon , obstr. Intest.
Anticuerpos calientes

carcinomas,linfomas,
timomas, colagenosis

Anticuerpos frios

Crioaglutininas,
neumonia, linfomas,
virosis,

Anticuerpos irregulares

Transfusiones pasadas o
recientes, transfusin de
plasma con
aloanticuerpos

Antgenos A / B deprimidos

exanguneotransfusin,
Plasmafresis, neonatos,
leucemias, Q.T.

Ausencia de anticuerpos ABO Inmunodeficiencias,

agammaglobulinemia,
neonatos y lactantes < 3
meses, ancianos
Rouleaux

Mieloma Mltiple,
gelatina de Wharton

Aloanticuerpos

Embarazadas, plitransfundidos, neonatos

Campo mixto

Quimeras, TMO,
hemorragia feto-materna
o materno

Anticuerpos inmunes
Anti-AB

Neonatos con enf. hemoltica

embarazadas del grupo O

Drogas o medicamentos Metil-dopa, L-Dopa,

penicilina, cefalosporina,
Quinina, quinidina

GUIA DE TRABAJO
1. Confirmar la presencia de discrepancias serolgicas
pasadas y actuales, relacionadas con:
Discrepancias ABO y / o Rh
Anticuerpos irregulares
Reacciones transfusionales graves
2. Descartar la posibilidad de un error humano
3. Demostrar si el anticuerpo causante de la
incompatibilidad es un autoanticuerpo o un aloanticuerpo. Esta distincin se estableced en la prctica
observando la reaccin de autocontrol, que ser
negativa en presencia de aloanticuerpo.

FIN DE LA CLASE

4. En que fase de la prueba cruzada la reaccin de

aglutinacin es ms evidente ?

a) Fase de centrifugacin inmediata ( Fase I ) :

El autocontrol y pantallas I-II estn negativos.
* Sugiere incompatibilidad ABO. Se deben revisar
los grupos del donante y receptor.
* Si el receptor es A o AB y el donante es A,
sugiere que el receptor puede ser A2 o A2B y
contener anti-A1 en su suero. Se debe clasificar a
ambos con lectina o suero anti-A y verificar la
especificidad del anticuerpo con clulas A2 a las
que no debe aglutinar.Dicho anticuerpo no tiene
importancia clnica sino reacciona a 37oC

En que fase de la prueba cruzada la reaccin de

aglutinacin es ms evidente ?

b) Aglutinacin en las Fases II o III ( albumina o

antiglobulina )
El autocontrol es negativo pero las pantallas I y/o II
son positivas: Sugiere la presencia de un aloanti
-cuerpo caliente. Se debe proceder a su
identificacin y cruzar nuevas unidades de sangre
hasta encontrar las necesarias compatibles .

5. Porcentaje de donantes incompatibles.

a) Si todas las pruebas han resultado incompatibles y
ambas pantallas fuertemente aglutinadas, pero el
autocontrol negativo, puede tratarse de un anticuerpo
contra un antgeno de alta incidencia, o de mltiples
anticuerpos presente

b) Si solo un donante es incompatible pero las pantallas

y el autocontrol resultaron negativas, puede tratarse :
* Un
anticuerpo dirigido contra un antgeno de baja
incidencia que solo est presente en los G.R. de ese
donante.
* El problema puede residir en el donante. Se le debe
practicar un Coombs directo, y si es positivo su

6) Todos los donantes son aglutinados con la misma

intensidad ?
Si la intensidad de la reaccin no es igual en todas
las clulas , sugiere:
* Una mezcla de anticuerpos, cada uno con
diferente potenciaEfecto de dosis ( anti-M, anti-c,
aanti-C anti-e, anti-E ).
Si la intensidad es fuertemente uniforme, puede
corresponder a uno o varios anticuerpos con alto
ttulo.

7) Prueba cruzada ioncompatible, autocontrol positivo

( Coombs directo ) y pantallas positivas:
+ Corresponde a un autoanticuerpo en el paciente, el
cual reacciona con antgenos presentes en las clulas
autlogas y extraas.
8) Tiene el receptor la prueba de Coombs directa
positiva, sin anticuerpos irregulares demostrables en
el suero ? :
* Anemia hemoltica autoinmune
Reaccin hemoltica tarda
*Efecto droga

9) La prueba cruzada es incompatible en las tres fases,

al igual que las pruebas pantallas, pero el Coombs
directo es negativo. Sugiere:
* Mezcla
de anticuerpos fros y calientes
* Un
anticuerpo fro que fija el complemento
10) Anormalidades en el suero del paciente

9) Contaminantes en el sistema conducen a reacciones

falsas positivas

DISCREPANCIAS EN LA PRUEBA MENOR

1) Incorrecta clasificacin ABO del donante y receptor

2) Presencia de un anticuerpo en el plasma del donante
que reacciona con su correspondienre antgeno en el
receptor

3) El receptor tiene Coombs directo positivo

4) Contaminantes en el sistema

PRUEBA CRUZADA INCOMPATIBLE

ORIENTACION PARA LA SOLUCION DEL
PROBLEMA
1. Incorrecta determinacin de los antgenos ABO
2. Aloanticuerpos

a.

Pantallas positivas. Anticuerpos contra:

Antgenos de alta incidencia
Mezcla de anticuerpos
Antgenos de bvaja incidencia

b. Pantallas negativas: anti-A1

3) Autoanticuerpos ( autocontrol positivo )

5) Autosensibilizacin de los eritrocitos del donante

6) Anormalidades en el suero del paciente:
* Hipergammaglobulinemia ( roleaux )
* Presencia de dextranos
* Presencia de otros expansores del plasma
7) Contaminantes en el sistema
* Tubos sucios
* Contaminacin bacteriana de la muestra
* Presencia de fibrina
* Contaminacin de la solucin salina