MICROBIOLOGA 2015

TEMA2. FISIOLOGA Y GENTICA BACTERIANA

Guin:
Fisiologa
Introduccin
Metabolismo
Clasificacin en funcin de los
requerimientos de oxgeno
Factores que afectan al crecimiento
Temperatura
pH
Medios de cultivo
Inculo
Curva de crecimiento bacteriano: fases.
Gentica
Introduccin
Mutaciones
Intercambio gentico

Metabolismo y Fisiologa

Crecimiento, nutricin y
metabolismo bacteriano
La nutricin y el metabolismo de las
bacterias no difieren mucho de los de
las clulas de organismos superiores.

FISIOLOGA BACTERIANA
cmo los diferentes componentes
qumicos y estructuras bacterianas se
interrelacionan tanto entre s como con
el medio que las rodea para poder
sobrevivir y desarrollarse.
La replicacin de una bacteria implica:
metabolismo bacteriano
regulacin y coordinacin de los
procesos metablicos
la divisin celular

Metabolismo bacteriano:

es la suma de todas las

reacciones qumicas que tienen lugar en la clula, pueden
dividirse en catabolismo y anabolismo

En el catabolismo se reduce la complejidad de

las molculas y se libera energa libre.
En el anabolismo se requiere el uso de energa
libre para aumentar la complejidad de las
molculas (son reacciones de biosntesis)
Las bacterias, llevan a cabo todos los procesos metablicos
gracias a las enzimas.

 Factores que influyen en el crecimiento

bacteriano:
Nutrientes (sustancias que deben incorporar
para garantizar su supervivencia, ya que le dan
energa y elementos necesarios para la sntesis
de sus estructuras celulares).
Los elementos ms importantes son C, H, O, N, S
y P; adems en menor cantidad de Fe, Mg, K, Ca y
el resto cantidades nfimas

Factores:
Factores de crecimientos o Factores orgnicos:
sustancias que las clulas no pueden sintetizar y
comprenden vitaminas y algunos AA. Ej: vitaminas
del complejo B.
Factor X (hemina) y Factor V (NAD) son
indispensables para H. influenzae
Factores estimulantes: son los que influyen en el
proceso de crecimiento de las bacterias, aunque no
imprescindibles, pero el proceso es ms rpido y
mejor en presencia de ellos.

Crecimiento bacteriano:
no se caracteriza por aumento de tamao, sino del
nmero.
La divisin o multiplicacin bacteriana se realiza
por FISIN SIMPLE O BINARIA.
La clula aumenta de volumen, en bacilos se
traduce en elongacin. El DNA cromosmico se
autoduplica, va producindose uen tabique en la
parte central por invaginacin de la membrana
celular y se acompaa de sntesis de pared.
RESULTADO: dos clulas hijas exactamente
iguales entre si y a la clula que les dio origen.

Tiempo de generacin:
Tiempo en el que se produce la duplicacin
de las clulas.
Proceso que no alcanza la misma velocidad
para todas las especies, es distintivo,
aunque hay factores estimulantes que
pueden influir algo.
E. coli: 20-30 minutos
M. tuberculosis: 20 horas en promedio.

Curva de crecimiento: Si se coloca una bacteria

en un ambiente propicio para su desarrollo y se trata de
esquematizar en un grfico de coordenadas el n de
bacterias a travs del tiempo

Fase de latencia:
Fase exponencial o de crecimiento
logartmico:
Fase estacionaria:
Fase de declinacin o de muerte:

Temperatura de crecimiento:
T mnima de crecimiento: T ms baja a la
que la especie puede crecer.
T ptima de crecimiento: aquella en la qu el
crecimiento es mejor, ms rpido y
abundante.
T mxima de crecimiento: T ms alta que
tolera ese microorganismo.

De acuerdo a la Temperatura
ptima de crecimiento:
Ya que influye en las velocidades de todas las reacciones
qumicas ligadas a los procesos de crecimiento
Hipertermfilos: 90 a 100C ( normalmente no son
patgenos para el hombre)
Termfilos: 55 C , la mxima puede ubicarse en 80
C.
Mesfilos: entre 25 y los 40 C (ptima : 37 C).
Agentes que infectan al ser humano.
Psicrfilos: 15 a 20 C (la mnima puede ser muy
baja)

Condiciones de pH:
Neutro: es el ms adecuado para el
desarrollo bacteriano (entre 6,5 y 7,5)
Bacterias acidfilas: hay bacterias que
pueden crecer hasta un pH de 4,0. Ej:
Lactobacillus spp. que forman parte de la
microbiota oral, digestiva y vaginal. El
agente del clera requiere un medio
alcalino.

Presin osmtica.
Los microorganismos necesitan agua, pero
la concentracin de sales o azcares en este
lquido debe ser la adecuada para que no se
produzca al plasmlisis.
Ya que las altas concentraciones harn que
la clula pierda el agua que la compone.
Bacterias halfilas: toleran altas
concentraciones salinas. Ej: V. cholerae

Si se considera las Condiciones atmosfricas los

microorganismos pueden ser clasificados de la
sigte. manera:
AEROBIOS: Utilizan el O2 atmosfrico y pueden
crecer en presencia de l. Requieren O2 porque
este es el aceptor final de hidrgeno, con el que
forman agua y CO2. Producen catalasa.
ANAEROBIOS: No son capaces de utilizar el O2
atmsferico. Aceptor final es un compuesto
inorgnico que se puede reducir como nitratos o
sulfatos. Un tipo especial es la Fermentacin: la
fuente de C provee energa, el donador de H y el
aceptor final de ste. O sea que el aceptor final de
H es un compuesto orgnico.

Segn las Condiciones atmosfricas tb. se clasifican como:

MICROAERFILOS: crecen mejor cuando la tensin de
O2 en el aire atmosfrico es inferior a la normal (no deben
superar 15% de O2). Son susceptibles a radicales
superxidos. Algunos segregan la superxido dismutasa
para contrarrestar estos radicales txicos.
Anaerobios FACULTATIVOS: Crecen indistintamente en
presencia o ausencia del O2 atmosfrico. OBLIGADOS:
No pueden usar el O2. MODERADOS: de 2 a 8 % de O2.
AEROTOLERANTES: Sobreviven un tiempo con O2.
CAPNFILOS: se desarrollan mejor cuando hay
concentraciones elevadas de CO2 en el medio.

En sntesis
Las bacterias segregan distintos tipos de enzimas.
Las sustancias nutritivas deben estar en solucin (medio
lquido).
Los microorganismos poseen ciertas vas metablicas
fundamentales para la produccin de estos bloques
estructurales.
Las vas ms conocidas para obtener energa: Vas
glucolticas, ciclo de pentosa fosfato y ciclo del cido
tricarboxlico.
Productos originados en la degradacin son aprovechados
en construccin de otros elementos.

Nutrientes
1- Fuente de energa

luz
qumica

2- Macronutrientes
H
K
O
Mg
C
Na
N
95%
Ca
S
Fe
P
3- Micronutrientes (elementos traza)
Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, W
4- Factores de crecimiento
Vitaminas
Purinas y pirimidinas
Aminocidos

Macronutrientes

Tipos nutricionales

Fuente de
energa

Fuente de
C

Ejemplos

Cianobacterias,
Fotoauttrofos
Luz
CO2
bacterias
prpuras y
verdes
Compuestos Algunas
Fotohetertrofos
Luz
orgnicos
bacterias
prpuras y
verdes
Compuestos
Algunas
Quimioauttrofos o inorgnicos CO2
Eubacterias y
littrofos
ej.: H2, NH3,
muchas Archaea
NO2-, H2S
La mayora
Quimiohetertrofos Compuestos Compuestos Eubacterias,
o hetertrofos
orgnicos
orgnicos
algunas Archaea

Condiciones para el crecimiento microbiano

Medios de cultivo

agua
fuente de energa

Crecimiento

Nutrientes

fuentes de C, N, otros
elementos
micronutrientes,
factores de crecimiento

temperatura

Condiciones
de cultivo

pH
luz
aireacin
actividad de agua
potencial redox

Factores de crecimiento
Microorganismos auto o heterotrfos pueden requerir
pequeas cantidades de ciertos compuestos orgnicos que
no pueden sintetizar y deben incorporarse en los medios

* bases pricas y pirimdicas

ADN, ARN

* aminocidos esenciales

sntesis proteica

* vitaminas

coenzimas

Aislamiento
Aislar: Es separar un tipo de microorganismo a partir de una poblacin
mixta. En habitats naturales, raramente encontramos a los
microorganismos en cultivo puro
Aislamiento directo:se logra directamente a partir de una muestra
cuando el o los microorganismos estn en una proporcin adecuada., se
realiza por estras (agotamiento) con o sin dilucin previa de la muestra
(suelo, alimentos), en medio slido
Aislamiento por enriquecimiento:Cuando el microorganismo que se
desea aislar e identificar se encuentra en baja proporcin en la muestra,
se incluye una primera etapa que consiste en sembrar la muestra en
medio lquido. Luego de varios pasajes se aisla por el mtodo de
estras.

Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su naturaleza fsica
* lquidos
* slidos - solidificante: agar-agar, silico-gel
* semi-slidos

Segn su composicin
* definidos o sintticos: composicin qumica conocida
* no definidos o complejos: composicin qumica no
definida, enriquecidos con peptonas, extracto de
carne, de levadura, de suelo, sangre

Segn su uso en el laboratorio

* selectivos o inhibitorios: medios que contienen, adems de los
nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de algunos
microorganismos permitiendo el crecimiento de otros o cuya
composicin permite el desarrollo de un grupo determinado
Ej.agar-antibiticos; agua, sales, luz, para algas, medios con
NaCl superior a la concentracin fisiolgica
* diferenciales: medios que contienen indicadores para diferenciar
los distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en l.
Ej. azcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro

Segn su uso en el laboratorio

* selectivos o inhibitorios: medios que contienen, adems de los
nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de algunos
microorganismos permitiendo el crecimiento de otros o cuya
composicin permite el desarrollo de un grupo determinado
Ej.agar-antibiticos; agua, sales, luz, para algas, medios con
NaCl superior a la concentracin fisiolgica
* diferenciales: medios que contienen indicadores para diferenciar
los distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en l.
Ej. azcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro

Cultivo en medio lquido

Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El crecimiento
se puede manifestar por enturbiamiento, por formacin de velo o
pelcula, o por sedimento.
Cultivo en medio slido
Puede ser en tubos o placas
a) Tubos con agar inclinado. Para sembrarlos, se mueve el ansa o
la punta suavemente sobre la superficie del agar con un
movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior,
cuidando de no daar el agar.
b) Tubos sin inclinar. Se siembran introduciendo una punta en el
centro del agar. Tambin se llama siembra por picadura.
c) Siembra en placas. Puede ser en superficie (por estras o
baado) o incorporada (mezclando el inculo con el agar
semifundido)

Aislamiento
Aislar: Es separar un tipo de microorganismo a partir de una poblacin
mixta. En habitats naturales, raramente encontramos a los
microorganismos en cultivo puro
Aislamiento directo:se logra directamente a partir de una muestra
cuando el o los microorganismos estn en una proporcin adecuada., se
realiza por estras (agotamiento) con o sin dilucin previa de la muestra
(suelo, alimentos), en medio slido
Aislamiento por enriquecimiento:Cuando el microorganismo que se
desea aislar e identificar se encuentra en baja proporcin en la muestra,
se incluye una primera etapa que consiste en sembrar la muestra en
medio lquido. Luego de varios pasajes se aisla por el mtodo de
estras.

Cultivo puro
Las colonias se describen por examen macroscpico en
funcin del tamao, la forma, el borde, la elevacin, la
transparencia y el color. Esto resulta a veces muy til en la
identificacin
A partir de colonias aisladas en medio de cultivo se realiza un
examen microscpico que debe mostrar clulas
razonablemente semejantes respecto al Gram y a la
morfologa.
Las colonias aisladas deben aislarse nuevamente en medio no
selectivo por el mtodo de estras. Esto se conoce como
reaislamiento.

Divisin celular: fisin binaria

Gemacin,
ej.
levaduras

Crecimiento de un microorganismo en medio

de cultivo lquido

1- Fase de latencia
2- Fase exponencial
3- Fase estacionaria

Crecimiento en un volumen fijo de medio o

cultivo cerrado (batch)
Luego de la adicin de bacterias al medio lquido fresco se observa la
siguiente cintica de crecimiento
Fase lag - las clulas se adaptan al nuevo ambiente, aun no se dividen
Fase exponencial (log) - velocidad mxima de crecimiento bajo
condiciones particulares, tiempo de generacin mnimo
Fase estacionaria - sin crecimiento neto, vc=0 estadsticamente = 0
cuando:
vc=vm (vel. crecimiento es igual a la de muerte)
nutrientes limitantes, pero suficientes para mantener actividad
acumulacin de desechos, inhibicin del crecimiento
Fase de muerte - velocidad de muerte celular > velocidad de
divisin celular

Factores del ambiente

fsicos: temperatura, gases, pH, presin osmtica
qumicos: nutrientes, sustancias antimicrobianas
biolgicos: otros microorganismos, micro y
mesofauna, vegetacin, afectan las
actividades microbianas
Los distintos factores actan simultneamente y resulta
difcil el anlisis integrado de los efectos.

 Sicrfilos - rango: < 0-20C, ptimo < 15oC

organismos marinos, algas: Chlamydomonas nivalis (nieve rosada),
bacterias: Pseudomonas, Flavobacterium
membrana contiene alto % de cidos grasos insaturados

Sicrtrofos o Sicrfilos facultativos

- rango: 0-35C, ptimo 20-30oC
Pseudomonas - crecen en el refrigerador

Mesfilos - rango: 15-45 C, ptimo: 30-40C

la mayora de los microorganismos (del suelo, aguas, patgenos)

Termfilos - rango: 40-70C, ptimo de 55-65oC

membrana contiene alto % de cidos grasos saturados
enzimas estables al calor
Bacillus stearothermophilus, organismos de compostaje

Hipertermfilos - rango: 80-113C, ptimo > 90oC

Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales)

Oxgeno
Clasificacin de los microorganismos segn
el efecto del oxgeno:
Aerobios
obligados: requieren oxgeno (21% o ms)
Ej. Bacillus, hongos, etc.
microaeroflicos: lo requieren pero a niveles menores que el
atmosfrico (5-10%)
Ej. Azospirillum
Anaerobios
facultativos: no requieren oxgeno, pero el desarrollo es mejor con
oxgeno.
Ej. Levaduras, E. coli
aerotolerantes: no son sensibles al oxgeno (crecen en ausencia o
presencia de oxgeno).
Ej. Enterococcus faecalis, Sreptococcus spp.
.
obligados: no toleran el oxgeno, muere en su presencia
Ej. Methanobacterium, Clostridium

Cultivos en anaerobiosis
tubos con medio de cultivo llenos por completo.
medios con sustancias que reaccionan con el oxgeno y lo excluyen.
dispositivo especial (cmara anaerbica)
cajas o tubos incubados en recipientes con granos germinados (cebada,
centeno)

Otros gases
N2

componente principal de de la atmsfera (78%). Gas inerte: no es usado

por la mayora de los organismos, los que pueden reducir el triple enlace del
N2 con la enzima nitrogenasa se denominan diazotrofos o fijadores de N2 y
pueden desarrollarse en ambientes sin N-combinado

CO txico para la mayora de los organismos (cadena respiratoria)

puede ser oxidado a CO2 por algunos microorganismos

CH4

liberado a la atmsfera por microorganismos metanognicos, gas con

efecto invernadero, puede ser oxidado a CO 2 por bacterias metanotrficas

CO2

importante gas, fuente de carbono para los autotrofos, aerobios y

anaerobios, fotosintticos o quimiosintticos. Muchos hongos lo requieren a
niveles superiores a los atmsfericos, para ciertas sntesis

H2 poco usado, txico para la mayora de los microorganismos, brinda

energa a bacterias Hydrogenomonas: H2+O2 = H20 + ATP

pH
El pH es la acidez o alcalinidad de una
solucin, medida por el log 1/(H+)
Clasificacin de los microorganismos segn
su pH ptimo
Neutrfilo:

pH ptimo 7 - Ej.: bacterias

patgenas humanas.

Acidfilo: pH ptimo 7 - Ej.: muchas de

las archeobacterias y hongos.
Basfilo: pH ptimo 7 - Suelos y aguas
ricas en carbonatos

Medios de cultivo
MEDIO SELECTIVO Y
DIFERENCIAL
Colonia Lactosa negativa

Colonia Lactosa positiva

Agar sangre
S. epidermidis en agar sangre

Agar sangre
HEMOLISIS EN AGAR SANGRE

HEMLISIS COMPLETA

HEMLISIS PARCIAL

Pseudomonas aeruginosa
Siembra en medio OF
Metabolismo oxidativo

Prueba de la catalasa