CICLO DE KREBS

2014

METABOLISMO:
Proceso global por el cual los organismo
vivientes adquieren y usan la energa libre
para llevar a cabo sus funciones.
CATABOLISMO
ANABOLISMO

Dnde ocurre el Ciclo de

Krebs?

Funciones principales del Ciclo de Krebs:

Produce casi todo el dixido de carbono fabricado
en los tejidos humanos
Es la fuente de muchas de las coenzimas reducidas
que impulsan la produccin del ATP en la cadena
respiratoria
Dirige el exceso de energa y muchos
intermediarios a la sntesis de cidos grasos
Proporciona algunos de los precursores utilizados
en la sntesis de protenas y de cidos nucleicos

FASE I: INTRODUCCION Y PERDIDA DE DOS

ATOMOS DE CARBONO (COMO CO2)
Primer paso (extra ciclo de Krebs):
Formacin de acetil-CoA a partir de piruvato.
Complejo Piruvato deshidrogenasa (PM = 8 x 106).

Dihidrolipoil transacetilasa

Finalmente la
dihidrolipoamida
es reoxidada a
lipoamida por
FAD y el FADH2
que resulta es, a
su vez, reoxidado
a FAD por NAD+
para completar el
ciclo cataltico.

Dihidrolipoil deshidrogenasa

Pasos 1-2: El pirofosfato de tiamina (TPP) reacciona

con piruvato para formar un producto de adicin que
sufre descarboxilacin para dar HETPP.
Paso 3: La doble ligadura de la enamina ataca a un
tomo de azufre de la lipoamida y produce un
desplazamiento tipo SN2 del segundo azufre para
dar un hemitioacetal.
Paso 4: La eliminacin de difosfato de tiamina del
intermediario hemitioacetal produce acetil
dihidrolipoamida
Paso 5: que reacciona con la coenzima A en una
reaccin de sustitucin nucleoflica del acilo para
intercambiar un tioster por otro y dar acetil-CoA y
dihidrolipoamida.

Piruvato deshidrogenasa

Envenenamiento y Krebs

Envenenamiento por mercurio y arsnico.

Enfermedad por carencia de vitamina B1
(tiamina): beriberi.

Asesinado
con arsnico?

Tnico de
Fowler (siglo
XIX): 10 mg
de arsenito
por ml

Etapas del Ciclo de Krebs:

1era Etapa: Introduccin de dos tomos de
carbono en forma de acetil-CoA (formacin de
citrato)
Actividad de la citrato sintasa (inhibida por
citrato) .

Mecanismo secuencial ordenado.

G = -31.5 kJ.mol-1

Condensacin aldlica seguida de hidrlisis

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El grupo carboxilato de la cadena lateral del

Asp-375 acta como una base y saca un
protn acdico de la acetil-CoA, mientras el
grupo N-H de la cadena lateral de la His-274
acta como un cido y dona un protn al
oxgeno carbonlico, generando un enol.

La His-274 desprotona el enol acetil-CoA, que

se adiciona al grupo carbonilo cetnico del
oxalacetato en una reaccin tipo aldlica.
Simultneamente, un protn N-H acdico de la
His-320 protona al oxgeno carbonlico
produciendo (S)-citril CoA

Luego de su formacin, (S)-citril CoA se hidroliza a citrato en una reaccin de

sustitucin nucleoflica del acilo, catalizada por la misma enzima (citrato
sintasa).
Notar: el C3 del citrato es un centro proquiral, con el brazo pro-S derivado
del acetil-CoA y el brazo pro-R derivado del oxalacetato.

Reaccin de la citrato sintasa

2da etapa: Isomerizacin del citrato

(formacin de cis-aconitato y, luego,
isocitrato).
Accin de la aconitasa.

Nota: Un sustrato de la citrato sintasa,

fluoroacetilo, se encuentra en las hojas de
ciertas plantas (astrgalo-Plantaginetum
subulatae) y produce fluorocitrato, inhibidor
de la aconitasa (veneno Ten Eighty).

La aconitasa es una ferrosulfoprotena con hierro

no hemnico.

El citrato es un alcohol terciario proquiral que se convierte en un alcohol

secundario, quiral (2R,3S)-isocitrato. La isomerizacin ocurre en dos etapas,
ambas catalizadas por la aconitasa.
El paso inicial: deshidratacin de -HO-cido para dar cis-aconitato.
Segundo: adicin nucleoflica de agua al doble enlace que ocurre especficamente
en el brazo pro-R.

El protn sale de la cara re del C2 pero se adiciona en la cara re del C3. Ambas caras re
de C2 y C3 se encuentran a 180, en lados opuestos de la molcula. Por lo tanto, el cisaconitato debe voltearse 180 entre los pasos, liberndose de la enzima, rotar y volver a
unirse.

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3era etapa: Generacin de CO2 por una

deshidrogenasa ligada al NAD+ (formacin
de -cetoglutarato).
Accin de la isocitrato deshidrogenasa.

El (2R,3S)-isocitrato, un alcohol secundario, se oxida con NAD + para dar una cetona,
oxalosuccinato, que pierde CO2 para dar a-cetoglutarato. Esta reaccin necesita de
un catin divalente como cofactor, para polarizar el grupo ceto.

Reaccin de la isocitrato deshidrogenasa

4ta etapa: Generacin de la segunda molcula

de CO2 por un complejo multienzimtico
(formacin de succinil-CoA).
Accin de la -cetoglutarato deshidrogenasa
(complejo -cetoglutarato deshidrogenasa,
trans-succinilasa y dihidrolipoilo
deshidrogenasa)

Este complejo enzimtico es inhibido por

mercurio y arsenito, que bloquean los grupos
SH del cido lipoico. Tambin es inhibida
por la falta de tiamina en la dieta,
produciendo un acmulo de -cetoglutarato,
con inhibicin del ciclo de Krebs.

SEGUNDA FASE DEL CICLO:

REGENERACION DEL OXALACETATO.
5ta etapa: Fosforilacin a nivel de sustrato
(formacin de succinato).
Actividad de la succinil-CoA sintetasa.

GTP + ADP

GDP + ATP

Nuclesido difosfoquinasa

Plegamiento de Rossmann (Michael Rossmann)

Succinil-CoA recibe un in fosfato en una reaccin de

sustitucin nucleoflica de acilo, generando un
intermediario tetrahdrico
que expulsa CoA como grupo saliente y genera un
acil fosfato.
Un residuo histidina de la enzima realiza una
sustitucin nucleoflica sobre el fsforo, liberando
succinato y dejando un fosfato unido a la enzima.

El difosfato de guanosina (GDP) realiza otra

sustitucin nucleoflica sobre el fsforo, generando
GTP.

6ta etapa: deshidrogenacin dependiente

de flavina (formacin de fumarato).
Accin de la succinato deshidrogenasa
(ferro-sulfoprotena).

Reaccin estereoespecfica, sacando el H pro-S de un

carbono y el pro-R del otro

7ma etapa: Hidratacin de un doble enlace

carbono-carbono (formacin de malato).
Accin de la fumarasa.

Adicin nucleoflica de agua a fumarato, para dar (S)-malato (L-malato). La

reaccin ocurre a travs de la formacin de un carbanin, estabilizado por
el grupo carbonilo adyacente. La protonacin tiene lugar en el lado opuesto
al OH.

8va etapa: Deshidrogenacin que regenera

al oxalacetato (formacin de oxalacetato).
Accin de la malato deshidrogenasa.

G = +29.7 kJ.mol-1

En estas dos etapas se eliminan

todos los carbonos carboxlicos marcados

Reaccin

Coenzimas

Nmero de ATP

Medio

Isocitrato

1 NADH

2.5 ATP

Cadena respiratoria

-cetoglutarato
succinil-CoA

1 NADH

2.5 ATP

Cadena respiratoria

Succinil-CoA
succinato

1 GTP

1 ATP

Transferencia directa

Succinato fumarato

1 CoQH2 (FADH2)

1.5 ATP

Cadena respiratoria

Malato oxalacetato

1 NADH

2.5 ATP

Cadena respiratoria

-cetoglutarato

La sntesis de acetil-CoA por el complejo

piruvato deshidrogenasa es una etapa clave e
irreversible en el metabolismo de la glucosa.

La entrada en el ciclo de Krebs y sus

reacciones estn controladas:
El complejo piruvato deshidrogenasa se
regula alostricamente por inhibicin por
producto y, adems, mediante una
fosforilacin reversible.

Regulacin de la piruvato deshidrogenasa

PEP, AMP

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Puntos de control del ciclo:

-ADP estimula alostricamente a la isocitrato
deshidrogenasa.
-La unin de NAD+, Mg2+ y ADP es mutuamente
cooperativa.
-NADH inhibe esta enzima desplazando al NAD+.
-ATP es tambin inhibitorio
En general, la velocidad del ciclo se reduce cuando
la clula dispone de un alto nivel de ATP

El ciclo de Krebs es una fuente de

precursores biosintticos.

ANAPLEROSIS
Palabra que describe a los procesos
metablicos que reaprovisionan de
intermediarios en un ciclo bioqumico.
Los ciclos metablicos son esenciales para la
transferencia eficiente de energa en la
clula.

Los sustratos que ingresan al ciclo como

citrato (va la condensacin de acetil-CoA
con oxalacetato), no causan un cambio neto
en el tamao del pool del ciclo.
Los dos carbonos de acetil-CoA se pierden
como CO2 en las reacciones de la isocitrato
deshidrogenasa y la -cetoglutarato
deshidrogenasa.
Por el contrario, la anaplerosis provee de
compuestos para el ciclo, por otras
reacciones diferentes de la citrato sintasa.

El papel de la anaplerosis en el ciclo de

Krebs es doble:
Primero, a medida que los intermediarios se
pierden en procesos biosintticos tales
como gluconeognesis, glicerognesis y
sntesis de aminocidos, la anaplerosis los
restablece, permitiendo que el flujo en el
ciclo contine sin impedimento.
Segundo, la anaplerosis facilita la
produccin de energa en rganos con alto
grado de recambio energtico, tales como el
corazn y el msculo.

Sustratos para anaplerosis:

-Piruvato y alanina son los principales,
aunque glutamato puede llegar a ser
importante.
-Adems, los aminocidos ramificados,
tales como isoleucina y valina, cidos
grasos de cadena impar y su producto de
degradacin, propionato, sirven como
sustratos anaplerticos.

Ingreso al ciclo va malato y oxalacetato:

Aunque la mayora del piruvato es
descarboxilado oxidativamente y entra al
ciclo como acetil-CoA, una porcin es
carboxilada e ingresa al ciclo.
Esta reaccin es catalizada por la piruvato
carboxilasa (formando oxalacetato) o por la
enzima mlica dependiente de NADP
(formando malato)

TABLA 16-2 Reacciones Anaplerticas

Ingreso va a-cetoglutarato:
El -cetoglutarato deja el ciclo como
glutamato. Esta reaccin es reversible
cuando se forma glutamato va
transaminacin con piruvato (dando alanina) u
oxalacetato (formando aspartato).

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Entrada va succinil-CoA:
Este intermediario juega un papel importante
en el metabolismo de cidos grasos y
aminocidos porque es el punto de ingreso a
partir de cidos grasos de cadena impar y de
aminocidos con cadena lateral ramificada.
Este ingreso se asocia a la produccin de
compuestos de alta energa.

Interrelationship between the propionyl-CoA pathway and the CAC in liver and heart.

Reszko A E et al. J. Biol. Chem. 2003;278:34959-34965

2003 by American Society for Biochemistry and Molecular Biology

1, propionil-CoA carboxilasa;
2, metilmalonil-CoA racemasa;
3, metilmalonil-CoA mutasa.

Entrada va fumarato:
Adems de los aminocidos fenilalanina y
tirosina ingresando como fumarato, el ciclo
de las purinas tambin enriquece al ciclo, por
una reaccin entre aspartato y GTP para dar
fumarato, amonaco, GDP y Pi.

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1-carbamil P sintetasa
2-OTC
3-argininosuccinato
sintetasa
4-argininosuccinasa
5-arginasa

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Cmo estudiamos la
anaplerosis?

Ciclo del glioxilato:

Plantas y bacterias pueden crecer en
presencia de acetato.

FIN DE KREBS